Phân lập một số hợp chất trong cao n-Butanol ( Bacopa monnieri (L.) Wettst. Scrophulariaceae)

Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH 0O0 BÁO CÁO TỎNG KẾT ĐÈ TÀI CHƯƠNG TRÌNH SINH VIÊN NCKH NĂM 2020 TÊN ĐÈ TÀI: PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TRONG CAO n-BUTANOL Của Cây rau ĐẮNG BIỂN (Bacopa monnieri (L.) Wettst Scrophulariaceae) Mã số đề tài: Chủ nhiệm đề tài: Phạm Tiểu Nhi Giảng viên hướng dẫn: DS.CKI Nguyễn Hoàng Khánh Linh Khoa: Dược Các thành viên tham gia: STT Họ tên Phạm Tiểu Nhi MSSV 1511541049 TP Hồ Chí Minh, thảng 10 năm 2020 Lớp 15DDS7C MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan thực vật học 1.1.1 Tổng quan họ Scrophulariaceae 1.1.2 Tổng quan chi Bacopa 1.1.3 Tổng quan thực vật Rau đắng biển 1.1.4 Mô tả thực vật 1.1.5 Đặc điểm vi phẫu 1.1.6 Đặc điểm bột dược liệu 1.1.7 Sinh thái phân bố .7 1.1.8 Bộ phận dùng 1.1.9 Cách trồng .8 1.2 Tổng quan thành phần hóa học 1.2.1 Saponin 1.2.2 Cucurbitacin 11 1.2.3 Alkaloid Flavonoid 12 1.3 Tổng quan tác dụng dược lý 13 1.3.1 Hoạt tính chống co giật 13 1.3.2 Hoạt tính khả học hỏi trẻ em 13 1.3.3 Hoạt tính khả nhận thức 13 1.3.4 Hoạt tính chống ung thư 14 1.3.5 Hoạt tính trị liệu hệ tiêu hóa 14 1.3.6 Hoạt tính chống oxy hóa 15 1.3.7 Hoạt tính chống stress 15 1.3.8 Hoạt tính bảo vệ thần kinh 16 1.3.9 Độc tính 16 1.3.10 Tác dụng phụ Rau đắng biển 17 1.4 Bài thuốc chữa bệnh từ Rau đắng biển 17 1.4.1 Chữa viêm bàng quang, tiểu buốt viêm đường tiểu tiện 17 1.4.2 Trị đau nhức xương khóp 18 1.4.3 Giải độc lọc gan 18 1.4.4 Chữa rôm sảy trẻ em 18 1.4.5 Chữa động kinh, thao cuồng, suy nhược thần kinh, khản tiếng 18 1.4.6 Chữa khản tiếng lao phổi 18 1.4.7 Chữa rắn cắn 18 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 19 2.1 Đối tưọng nghiên cửu 19 2.1.1 Nguyên liệu 19 2.1.2 Dung mơi hóa chất 19 2.1.3 Máy móc thiết bị 19 2.2 Phuơng pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Khảo sát thực vật học vi học .20 2.2.3 Chiết xuất, phân lập 22 2.2.4 Kiểm tra độ tinh khiết 23 2.2.5 Xác định cấu trúc hóa học chất phân lập 23 CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ SẢN PHẨM ĐẠT Được 24 3.1 Kiểm nghiệm vi học 24 3.1.1 Vi phẫu thân Rau đắng biển (Bacopa monnieri (L.) Wettst.) 24 3.1.2 Vi phẫu Rau đắng biển (Bcicopci monnieri (L.) Wettst.) 25 3.2 Soi bột dược liệu 27 3.2.1 Mô tả bột thân Rau đắng biển (Bacopci monnieri (L.) Wettst.) 27 3.2.2 Mô tả bột Rau đắng biển (Bacopa monnieri (L.) Wettst.) 27 3.3 Ket so hóa thành phần hóa học thực vật 28 3.4 Chiết xuất 29 3.5 Phân lập tinh chế 29 3.5.1 Phân lập .29 3.5.2 Khảo sát hệ dung mơi phân tích .29 3.5.3 Tiến hành sắc ký cột nhanh với cao /z-BuOH 30 3.5.3 Phân lập phân đoạn sắc ký cột cổ điển 31 3.5.4 Kiểm tra độ tinh khiết B-l, B-2 SKLM 32 3.5.5 Xác định cấu trúc B-l, B-2 34 3.6 Bàn luận 40 3.6.1 đối tượng nghiên cứu 40 3.6.2 kết trình chiết xuất 40 3.6.3 kết phân lập 40 CHƯƠNG KẾT LUẬN 42 4.1 Kết luận 42 4.2 Kiến nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt Chữ nguyên Ý nghĩa COSY Correlated Spectroscopy Phô tuong quan ’H -*H d Doublet Đỉnh đôi Da Dalton Đon vị carbon dd doublet of doublets Đỉnh đôi kép DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO dimethyl sulfoxide HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation J coupling constant Hằng số ghép m Multiplet Nhiều đỉnh, đỉnh bội NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân ppm parts per million Phần triệu s Singlet Đỉnh đon SKLM Sac ký lóp mỏng Sắc ký lóp mỏng uv Ultra violet (Phổ) tử ngoại GOT Glutamat oxaloacetat transaminase GPT Glutamat pyruvat transaminase vs Vanilin Sulfuric Dimethyl sulfoxid iii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hoa thức hoa đồ Rau đắng biển Hình 1.2 Các phận loài B monnỉerỉ (L.) Wettst Hình 1.3 Vi phẫu mặt ngang thân B monnierỉ Hình 1.4 Vi phẫu B monnieri Hình 1.5 Vi phẫu bột thân dược liệu B.monnierỉ Hình 1.6 Vi phẫu bột dược liệu B monnieri Hình 1.7 Rau đắng biển Hình 1.8 Cấu trúc số saponin quan trọng Rau đắng biển 11 Hình 1.9 Các Cucurbitacin Rau đắng biển (B monnỉeri L.) 11 Hình 1.10 Các Alkaloid Flavonoid Rau đắng biên (B monnieri L.) 12 Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất dịch chiết khảo sát sơ thành phần hóa học Rau đắng biển 22 Hình 3.1 Vi phẫu thân Rau đắng biển 24 Hình 3.2 Các thành phần vi phẫu thânRau đắng biển 25 Hình 3.3 Vi phẫu Rau đắng biển 25 Hình 3.4 Các thành phần vi phẫu Rau đắng biển 26 Hình 3.5 Lồ khí biểu bì Rau đắng biển 26 Hình 3.6 Các thành phần bột thân Rau đắng biển 27 Hình 3.5 Các thành phần bột Rau đắng biển 27 Hình 3.8 Sắc ký đồ phân đoạn 77-BuOH 29 Hình 3.9 Sắc ký đồ phân đoạn cột nhanh 31 Hình 3.10 Sắcký đồ phân đoạn cột cổ điển phân đoạn 32 Hình 3.11 Sắcký đồ thử tinh khiết B-l 33 Hình 3.12 Sắcký đồ thử tinh khiết B-2 33 Hình 3.13 Sơ đồ phân lập tinh chế 34 Hình 3.14 Phổ H-NMR (Pyridine-i/j) hợp chất B-l phân lập 34 Hình 3.15 Phổ 13C-NMR (Pyridine-íA) họp chất B-l phân lập 35 Hình 3.16 Cơng thức cấu tạo B-l (Mannitol) 36 Hình 3.17 Dữ liệu phổ MS B-2 (D2O) 37 Hình 3.18 Phổ 'H-NMR (D2O) hợp chất B-2 phân lập 38 Hình 3.19 Phổ 13C-NMR (D2O) họp chất B-2 phân lập 38 Hình 3.19 Cơng thức cấu tạo B-2 (Oxepane-3,4,5,6-tetraol) 39 IV DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Một số loài dùng làm thuốc Bảng 1.2 Một số saponin quan trọng Rau đắng biển Bảng 3.1 Kết sơ thành phần hóa học Rau đắng biển .28 Bảng 3.2 Các phân đoạn từ sắc ký cột nhanh 30 Bảng 3.3 Các phân đoạn từ sắc ký cột cổ điển phân đoạn 32 Bảng 3.4 Phổ NMR họp chất B-l 35 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ B-l 36 Bảng 3.6 Phổ NMR họp chất B-2 39 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ B-2 39 V CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan thực vật học 1.1.1 Tổng quan họ Scrophulariaceae Thân thường lồi thân thảo, đứng, bị leo, sống năm hay nhiều năm; nhiều loại bán kí sinh cịn diệp lục Lá đơn, mọc đối (có mọc vịng) khơng có kèm Trên cây, cách mọc thay đổi từ gốc đến Cụm hoa dạng chùm, gỉé hay xim nách hay cành Hoa đối xứng bên, lưỡng tính, thường có hoa Khi hoa tận nhánh hay trở thành Cánh hoa dính thành ống dưới, môi thường môi, môi thường có bướu to hay nhỏ, thuỳ xếp lớp Nhị thơng thường (trong nhị dài nhị ngắn) nhị nhau, đính ống tràng xen kẽ với thuỳ khơng giống Hai nỗn họp thành bầu Bầu ô với giá noãn bên họp (như giá noãn trụ giữa) Vịi đính đỉnh bầu Quả nang mở thành mảnh, nhiều hạt Hạt có góc hay có cánh, phơi thẳng cong, có nội nhũ nạc [1] Hoa thức Hoa đồ: T ộ' KsC(5)A4G(2) Hình 1.1 Hoa thức hoa đồ Rau đắng biển 1.1.2 Tổng quan chi Bacopa Dạng sống: Thân cỏ, mọc bò dài mặt đất, sống lâu năm Thân nhằn, màu xanh, thân non đơi có màu nâu đỏ, tiết diện trịn, mọng nước, có rễ mấu, phân nhánh nhiều, mọc đứng Thân có vị đắng Lá đơn, mọc đối, khơng lơng, dày, mọng nước, có dạng hình muỗng hay hình trứng ngược, tà đầu, dài 2-2,8 cm, rộng 0,5 0,7 cm, mép nguyên, không lông, mặt có nhiều chấm lõm Lá có màu xanh đậm mặt trên, xanh nhạt mặt dưới, gân chính, gân phụ khơng rõ Hoa đơn độc, mọc nách lá, màu trắng hay màu tím nhạt Hoa khơng đều, lưỡng tính mẫu Cuống hoa dài 2,6-5,6 cm, không lông, hai bắc hình dải, dài 0,6 cm, đỉnh cuống hoa Bao hoa có đài rời, khơng đều, đài sau to nhất, hình trứng, có gân chính, dài 0,8 cm, rộng 0,5 cm, đài truớc hình trứng, mũi nhọn, gân chính, dài 0,7 cm, rộng 0,4 cm, đài bên nhỏ nhất, hình dải, gân, có lơng bìa, dài 0,6 cm, rộng 0,1 cm Lá đài 5, có màu xanh đậm mép, xanh nhạt bên có chấm lõm mặt, tiền khai năm điểm Lá noãn 2, vị trí trước sau, dính thành bầu ơ, chứa nhiều nỗn, đính nỗn trung trụ Cánh hoa 5, có lơng, mồi cánh hoa có gân, dính bên tạo thành ống dài 0,4 cm, đáy ống màu tím nhạt hay màu trắng, tiền khai ngũ điểm hay kết lọp Tràng hoa có màu trắng xanh dương, màu tím màu xanh nhạt, đơi có màu cam, hồng đỏ, đối xứng bên, môi thùy, môi thùy Bộ nhị thơng thường hoa cịn nhị, nhị dài nhị ngắn (bộ nhị hai dài) Nhị 4, không đều, nhị dài mm phía trước, nhị ngắn mm phía sau Nhị sau bị trụy không để lại dấu vết Nhị đính gần đáy ống tràng xen kẽ cánh hoa; nhị nhẵn, hình sợi Ở vài chi Veronica, nhị trước bị trụy nên hoa nhị Chi Verbascum cịn đủ nhị Nhị đính ống tràng xen kẽ cánh hoa Bộ nhụy có nỗn vị trí trước-sau, dính liền thành bầu trên, ơ, mồi đựng nhiều nỗn, đính nỗn trung trụ, vịi nhụy đỉnh bầu Vịi nhụy 1, đỉnh bầu, dạng sợi, nhẵn, dài mm, đầu nhụy hình chén chia thùy, màu xanh nhạt Bao phấn ô, rời, xếp song song cạnh nhau, mở dọc, hướng trong, đính đáy Hạt phấn màu vàng nhạt, hình bầu dục hay hình trịn có thùy, có rãnh Hạt nhỏ, nhiều, hình tam giác, có cạnh Quả nang hình trứng có mũi, nhẵn, kích thước 5x3 mm, có mũi, đựng đài nhằn, vịi nhụy tồn Hạt có nội nhũ, mầm thẳng, hạt nhiều, nhỏ Rễ mọc từ gốc nách mang rễ dài 10-40 cm [6] Ở Việt Nam có khoảng 120 loài với 40 chi : Adenosma, Alectra (Melasma), Angelonia, Antirrhinum, Artanema (Ourỉsianthus), Bacopa (Herpestis), Brandisia, Buchnera, Centranthera, Digitalis, Dolichostemon, Dopatrỉum, Glossostigma, Legazpia, Lỉmnophila, Lỉndenbergỉa, Lindernỉa (Bonnaya, Ilysanthes), Mazus, Mỉcrocarpaea, Mimulus, Paulownia, Pedicularis, Pỉcria (Curanga), Pierranthus (Delpya), Rhemannia, Russelia, Schizotorenia, Scolophylliim, Scophularia, Sỉphonostegia, Sopubia, Stemodia, Strỉga, Torenia, Scoparia, Verbascum, Veronica, Wightia', Trong có nhiều lồi sử dụng làm thuốc trình bày bảng 1.1: Bảng 1.1 Một số loài dùng làm thuốc Tên khoa học Adenosma caendea R Br Dược liệu Nhân trần Ngọc hân ( Hương thảo, lưu ly) Dương địa hồng Om (Rau om) Cơng dụng Bổ máu, chữa viêm gan, vàng da, làm tiết mật Làm thuốc xông trị cảm sốt, ho Lá trị bệnh tim Dùng làm rau thuốc chữa cảm, sỏi thận Angelonỉa goyazensis Benth Hay K.salicariaefolia Humb & Bonpl Digitalis purpurea L Limnophila chỉnensis (Osb.) Merr subsp Aromatica (Lam.) Yam hay L aromatỉca (Lam.) Merr Xác pháo Russelia equysetiformis Schlecht Trị ho, cảm (Liễu tường hoa đỏ) et Cham Chữa sốt, giải độc Cam thảo nam Scoparỉa dulcỉs L (Cam thảo đất) thể Rau đắng biển Chữa suy nhược thần B.monnỉerỉ (L.) Wettst kinh, bí tiểu, viêm gan, thấp khớp 1.1.3 Tổng quan thực vật Rau đẳng biển Tên khác: Rau sam trắng, Rau sam đắng [9] Tên khoa học: Bacopa monnỉerỉ (L.) Wettst [9] Tên đồng nghĩa: Herpetis monnierỉ (L.) H.B.K., Gratỉola monniera L., Septas repens Lour., Bramỉa indỉca Lamk [9] Tên nước ngoài: Thyme - leaved gratiola (Anh) [9] Vị trí bảng phân loại thực vật Giới Plantae Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lóp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân lóp Hoa mơi (Lamiidae) Bộ hoa Mõm chó (Scrophulariales) Họ hoa Mõm chó (Scrophulariaceae) Chi Bacopa Lồi B monnieri (L.) Wettst [8] 1.1.4 Mô tả thực vật Cây thảo sống dai Thân nhẵn, mọc bò mang rễ dài 10-40 cm Các cành mọc đứng, mềm, không lông, đắng Lá mọc đối, khơng cuống, thn hình muỗng, dài cỡ cm, gân khó thấy Hoa mọc riêng lẻ nách lá, có cuống dài cm, đài không đều, cao 5-60 mm, cánh hoa trắng, gần nhau, dính thành ống, nhị Nhụy có bầu, khơng lơng Quả nang hình trứng, có mũi, nhẵn, có vịi tồn tại, nằm đài Hạt nhiều, nhỏ [7], A Hình ảnh cây; B Phần gốc rễ; c Gốc có lá; D Hoa; E Tràng hoa mở thấy nhị; F Bộ nhụy; G Lá bắc; H Lá đài sau; I J Lá đài bên; K L Lá đài Hình 1.2 Các phận loài B monnỉerỉ (L.) Wettst 1.1.5 Đặc điểm vỉ phẫu Thân Vi phẫu gần tròn Te bào biểu bì có kích thước khơng nhau, hình chữ nhật, cutin mỏng có cưa, biểu bì có nhiều lồ khí lơng tiết đa bào Dưới biểu bì mơ mềm xốp, hình đa giác hay hình bầu dục, kích thước khơng đều, xếp khơng thứ tự chừa khuyết to Thân già có nhiều tế bào nằm bên tế bào mô mềm, thân non khơng có Nội bì gồm lóp tế bào hình chữ nhật, khơng Trụ bì gồm lóp tế bào hình đa giác, xếp khít nhau, tạo thành vịng liên tục Các bó libe gồ tạo thành vịng liên tục, libe ngồi, gồ Tia tủy gồm 1-3 dải tế bào Libe tập trung thành đám Mạch gồ kích thước khơng Mô mềm tủy gồm CHCl3-MeOH-H2O (65:35:10, lớp dưới) uv 254 uv 365 vs Hình 3.9 Sắc ký đồ phân đoạn cột nhanh Nhận xét: Phân đoạn hòa lượng tối thiểu methanol, lọc, để lạnh 24h cho kết tinh Lọc rửa MeOH lạnh, thu bột vơ định hình màu trắng, đặt tên B-l (64,3 mg) B-l kiểm tra SKLM với hệ dung môi khác trước tiến hành xác định cấu trúc Trong số phân đoạn này, phân đoạn có thành phần đơn giản, vết tách rõ ràng nên lựa chọn để tiếp tục phân tách cột cổ điển 3.5.3 Phân lập phân đoạn sắc ký cột cổ điển • Cột sắc ký: cột thủy tinh, đường kính cột lớn (4 X 80 cm) • Pha tĩnh: 140 g silica gel cỡ hạt trung bình (40 - 63 pm) • Mầu: 14 g hoạt hóa với silicagel • Pha động: hệ CHCh-MeOH (100:0), tăng dần tỉ lệ MeOH đến CHCh-MeOH (8:2) • Thể tích hứng: 100 ml • Các phân đoạn thu sẽ kiểm tra sắc ký lóp mỏng với hệ dung môi CHCh-MeOH-LLO (65:35:10, lớp dưới), phát vết cách soi đèn uv 254 nm, 365 nm, nhúng thuốc thử vs Theo dõi sắc ký đồ gộp phân đoạn hứng có sắc ký đồ giống nhau, bay dung môi cân xác định khối lượng 31 Ket trình bày Bảng 3.3 Bảng 3.3 Các phân đoạn từ sắc ký cột cổ điển phân đoạn Phân đoạn Tỷ lệ dung môi (CHCh-MeOH) Khối lượng (g) 100:0 1,08 g 98:2 0,34 g 96:4 2,23 g 93:7 1,02 g 9:1 2,15 g 86:14 1,35 g 82:18 1,22 g 8:2 2,78 g uv 254 CHC13-MeOH-H2O (65:35:10, lớp dưới) uv 365 vs Hình 3.10 Sắc ký đồ phân đoạn cột cổ điển phân đoạn Nhận xét: phân đoạn phân lập thành phân đoạn nhỏ, phân đoạn 6.4 có kết tủa Đem tủa lọc rửa MeOH lạnh, thu bột vơ định hình màu trắng, đặt tên B-2 (40,2 mg) B-2 kiểm tra SKLM với hệ dung môi khác trước tiến hành xác định cấu trúc 3.5.4 Kiếm tra độ tinh khiết B-l, B-2 bang SKLM Kiểm tra tinh khiết B-1 SKLM với hệ dung mơi có độ phân cực khác nhau: • CHC13 - MeOH - H2O (65:35:10; lớp dưới) • EtoAc - MeOH - H2O (100:17:13) • CHCI3 - MeOH (8:2) Phát vết uv 254 nm, 365 nm thuốc thử vs 32 Hình 3.11 Sắc ký đồ thử tinh khiết B-l Nhận xét: B-l không tắt quang uv 254, không phát quang uv 365 cho màu với thuốc tử vs vết B-l mỏng gọn không xuất vết khác, sơ kết luận B-l chất tinh khiết SKLM Kiểm tra tinh khiết B-2 SKLM với hệ dung môi có độ phân cực khác nhau: • CHCh - MeOH - H2O (65:35:10; lớp duới) • EtoAc - MeOH - H2O (100:17:13) • CHC13 - MeOH (7:3) Phát vết uv 254 nm, 365 nm thuốc thử vs CHCb - MeOH - H2O CHCI3 - MeOH EtOAc - MeOH - H2O (65:35:10) (7:3) (100:17:13) Nhận xét: B-2 không phát quang uv 254, không phát quang uv 365 nm cho màu với thuốc tử vs vết B-2 mỏng gọn không xuất vết khác, sơ kết luận B-2 chất tinh khiết SKLM 33 Quá trình phân lập tóm tắt sơ đồ ở: Hình 3.13 Sơ đồ phân lập tinh chế 3.5.5 Xác định cẩu trúc B-l, B-2 3.5.5.1 Xác định cấu trúc B-l B-l phân lập từ cao zỉ-BuOH Rau đắng biển B-l thu dạng tinh thể trắng, không tắt quang uv 254 nm, không phát quang uv 365 nm có màu với thuốc thử vs Bl.l-Pyridine-1H Hình 3.14 Phổ *H-NMR (Pyridine-í/5) họp chất B-l phân lập 34 Bl.1-Pyridine-C13CPD Current Data Parameters NAME 11CMINH_B1.1 aXEND PROCNO F2 — Acquisition Parameters Date_ 20200107 Time 9.43 INSTRLH speet PRCSHD ran PAB8O BB/ PULEROCzgpg30 TD 6SS36 SOLVENT Pyr NS 128 DS SWH 31250.000 Hz FIDRES 0.476837 Hz AQ 1.0485760 sec RG 198.57 DW 16.000 usee DE 6.50 usee TE 303.3 K DI 2.00000000 sec Dll 0.03000000 sec TDO sroi NUC1 Pl PUỈ1 125.7864591 MHz 13C 10.00usee 88.00000000 w CHANNEL fc ’ SFO2 500.1910008 MHz NUC2 1H CPDPRG[2 waltz 16 PCPD2 80.00 usee PLH2 2.00000000 w PIM12 0.35764000 w PUỈ13 0.17989001 w F2 - Processing parameters SI 32768 SF 12S.77262S8 MHz wnu EM SSB LB 1-00 Hz GB PC 1-40 79 78 77 76 75 74 73 72 71 70 69 68 67 66 65 64 63 62 61 60 59 ppm Hình 3.15 Phổ 13C-NMR (Pyridine-í/5) hợp chất B-l phân lập Phổ NMR Nhận xét: Phổ 'H-NMR có tín hiệu H vị trí 4,55(m,lH); 4,73(d,lH); 4,45(dd,lH); 4,26(dd,lH) Phổ 13C-NMR cho thấy có tín hiệu c, có tín hiệu 72,87 ppm, 71,54 ppm 65,04 ppm nhận thấy có đối xứng c Bảng 3.4 Phổ NMR hợp chất B-l B-l ( Pyridine-tìh) Sh ppm mult (J/Hz) nH c ôc ppm 72,87 71,54 4,55 (1H, m) 4,73 (1H, d, 8) 65,04 Ha 4,45 (1H, dd, 4;ir> Hb 4,26 (1H, dd, 6; 11} Nhận xét Với phân tích biện luận dựa phổ NMR hợp chất B-l, xác nhận họp chất phân lập đuợc mannitol có cấu trúc hình: 35 Hình 3.16 Cơng thửc cấu tạo B-l (Mannitol) Phổ NMR Bảng 3.5 Dữ liệu phổ B-l STT DEPT >CH- >CH- 8c (ppm) ỖH (số H, độ bội, /=Hz) ppm HMBC COSY 72,87 4,55 (1H, m) C-2 H-3a H-3b 71,54 4,73 (1H, d;8) c-l C-3 H-l 65,04 Ha 4,26 (1H, dd;6;ll) Hb 4,45 (1H, dd-,4;ip c-l C-2 H-3 >CH2 3.5.5.2 Xác định cấu trúc B-2 B-2 phân lập từ phân đoạn nhỏ cao 77-BuOH Rau đắng biển B-2 thu dạng tinh thể trắng, không tắt quang uv 254 nm, không phát quang uv 365 nm có màu với thuốc thử vs 36 9/9/202017:13:11 /1 Shimadzu LCMSsolution Data Report 80000 ■