phân lập một số hợp chất từ rễ đinh lăng (radix polyscias fruticosa (l ) harms araliaceae) để ứng dụng trong kiểm nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - LÊ MINH TÀI PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ ĐINH LĂNG (Radix Polyscias fruticosa (L.) Harms Araliaceae) ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - LÊ MINH TÀI PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ ĐINH LĂNG (Radix Polyscias fruticosa (L.) Harms Araliaceae) ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 Luận văn Thạc sĩ Dược học NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Nguyễn Ngọc Vinh TS Lê Thị Thu Cúc TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 ii LỜI CẢM ƠN Trên thực tế khơng có thành cơng mà khơng gắn liền với hỗ trợ, giúp đỡ dù hay nhiều, dù trực tiếp hay gián tiếp người khác Trong suốt thời gian từ bắt đầu học tập giảng đường đến nay, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ quý Thầy Cô, gia đình bạn bè Để thực hồn thành đề tài Luận văn này, nhận hỗ trợ, giúp đỡ tạo điều kiện từ nhiều cá nhân Luận văn hoàn thành dựa tham khảo, học tập kinh nghiệm từ kết nghiên cứu liên quan, tạp chí chuyên ngành nhiều tác giả trường Đại học, tổ chức nghiên cứu, … Trước hết, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy PGS TS Nguyễn Ngọc Vinh Cô TS Lê Thị Thu Cúc – người hướng dẫn khoa học trực tiếp dành nhiều thời gian, công sức hướng dẫn q trình thực nghiên cứu hồn thành Luận văn Tôi xin trân trọng cám ơn Thầy, Cô Bộ mơn Phân tích – Kiểm nghiệm tận tình truyền đạt kiến thức quý báu, giúp đỡ trình học tập nghiên cứu Mặc dù cố gắng hết khả mình, Luận văn không tránh khỏi nhiều thiếu sót, hạn chế Tơi kính mong q Thầy, Cơ Hội đồng chấm luận văn có ý kiến góp ý, giúp đỡ để Luận văn hoàn thiện Một lần xin chân thành cám ơn! Lê Minh Tài iii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Lê Minh Tài iv BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG VIỆT Mở đầu: Một nguyên nhân mà chất lượng sản phẩm từ Đinh lăng thị trường Việt Nam chưa kiểm sốt tốt nguồn chất chuẩn Mục tiêu: Đề tài phân lập vài saponin triterpenoid để làm chất đối chiếu từ nguồn nguyên liệu nước Phương pháp: Chiết xuất phương pháp ngâm lạnh, sắc kí cột cổ điển, tinh chế kỹ thuật kết tinh lại, kiểm tra cấu trúc chất tinh khiết đo phổ IR, MS, NMR Đánh giá tiêu chất phân lập để đạt tiêu làm chất đối chiếu Kết quả: Kết thu phổ hồng ngoại IR, phổ khối MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR, so sánh liệu phổ với chuẩn Chất phân lập thu được xác định hàm lượng tính theo phần trăm diện tích pic, đạt tiêu chuẩn chất đối chiếu Kết luận: Đã phân lập 265 mg Ladyginosid A (DL1), 270 ng 3-O--Dglucopyranosyl-(14)--D-glucuronopyranosyl-oleanolic acid 28-O--D- glucopyranosyl ester (DL2), 14 mg Polysciosid B (DL3) 13 mg Polysciosid E (DL4) từ rễ Đinh lăng từ nguồn nguyên liệu Công ty cổ phần BV pharma,thành phố Hồ Chí Minh cung cấp Sản phẩm đánh giá thêm số tiêu để đạt tiêu chuẩn làm chất đối chiếu phục vụ công tác kiểm nghiệm chế phẩm từ Đinh lăng Từ khóa: Phân lập sponin triterpen từ rễ Đinh lăng v BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG ANH Introduction: One of the main reasons why the quality of Polyscias fruticosa (L.) Harms related products are not well controlled is the resource of reference standard substance Aims: This study aims to isolate some saponin triterpenoides to use as a local reference standard substance Method: Extract components of Polyscias fruticosa (L.) Harms by percolation method, column chromatography, purify by preparative chromatography, characterize purified components by Infrared spectroscopy (IR), Mass spectrometry (MS) and Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy Results: The resulted IR, MS, NMR spectra were compared with the standard spectra The isolated component calculated based on pic percentage and meets the requirement of a reference standard substance Conclusion: This study successfully 265 mg Ladyginosid A (DL1), 270 ng 3-O-D-glucopyranosyl-(14)--D-glucuronopyranosyl-oleanolic acid 28-O--D- glucopyranosyl ester (DL2), 14 mg Polysciosid B (DL3) 13 mg Polysciosid E (DL4) from Polyscias fruticosa (L.) Harms This Polyscias fruticosa (L.) Harms material was supplied by BV Pharma Company, Ho Chi Minh City, Vietnam The purified saponin evaluated by some criteria meets the requirements of a reference standard substance which is potentially used for analysis of Polyscias fruticosa (L.) Harms related products vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii LỜI CAM ĐOAN iii BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG VIỆT iv BẢNG TÓM TẮT LUẬN VĂN BẰNG TIẾNG ANH v MỤC LỤC vi DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT viii DANH MỤC BẢNG x DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ xii DANH MỤC SƠ ĐỒ xiv ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY ĐINH LĂNG .3 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC .5 1.3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 1.4 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG ĐỊNH DANH DƯỢC LIỆU 12 1.5 TÌNH HÌNH CHẤT ĐỐI CHIẾU TRONG KIỂM NGHIỆM CHẤT LƯỢNG DƯỢC LIỆU – SẢN PHẨM TỪ DƯỢC LIỆU VÀ TỔNG QUAN VỀ SAPONIN TRITERPEN NHÓM OLEANAN 13 1.6 CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY ĐINH LĂNG 19 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 21 2.2 TRANG THIẾT BỊ DỤNG CỤ .22 vii 2.3 NƠI THỰC HIỆN 23 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 37 3.1 KIỂM TRA TÍNH ĐÚNG CỦA DƯỢC LIỆU 37 3.2 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP .44 3.3 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH ĐỘ TINH KHIẾT CỦA DL1 VÀ DL2 BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC QUY VỀ PHẦN TRĂM DIỆN TÍCH PIC 68 3.4 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 84 CHƯƠNG BÀN LUẬN .93 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 96 5.1 KẾT LUẬN .96 5.2 KIẾN NGHỊ 97 CHƯƠNG 6: TÀI LIỆU THAM KHẢO 98 CHƯƠNG : PHỤ LỤC PL - viii DANH MỤC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ tắt Từ nguyên Ý nghĩa tiếng Việt AcCN Acetonitrile Acetonitril DĐVN V Dược điển Việt Nam V Dược điển Việt Nam V EtOAc Ethyl acetate Ethyl acetat EtOH Ethanol Cồn HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng IR Infrared spectroscopy Quang phổ hồng ngoại Gal Galactose Galactose Glc Glucose Glucose GlcA Glucuronic acid Acid glucuronic MS Mass spectrum Phổ khối lượng MeOH Methanol Methanol NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân - 13C-NMR 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân - 1H-NMR - COSY - DEPT C - Nuclear Magnetic Resonance carbon 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân H - Nuclear Magnetic Resonance proton Correlation Spectroscopy Correlation Spectroscopy Distortionless enhancement by Distortionless enhancement by polarization transfer polarization transfer ix Chữ tắt Từ nguyên Ý nghĩa tiếng Việt - HMBC Heteronuclear Multiple Bond Heteronuclear Multiple Bond Correlation Correlation Heteronuclear Single-Quantum Heteronuclear Single-Quantum Correlation Correlation PĐ Phân đoạn Phân đoạn PDA Photodiode Array Dãy diod quang Rha Rhamnose Rhamnose SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo Tài liệu tham khảo - HSQC Kết kiểm tra độ lập chất DL2 PL - 28 Kết kiểm tra độ tái lập chất DL2 PL - 29 Kết kiểm tra LOD chất DL2 PL - 30 Kết kiểm tra LOQ chất DL2 PL - 31 Kết kiểm tra đồng lọ chất DL2 PL - 32 PL - 33 Kết trắc nghiệm Anova yếu tố xác định giá trị đồng lọ chất DL2 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Row Row Row Row Row Row Count 2 2 2 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0,0193 0,0141 Total 0,0334 Sum Average Variance 190,54 95,27 0,0055 190,47 95,235 0,0014 190,68 95,338 0,0008 190,61 95,304 0,0028 190,65 95,326 0,0022 190,7 95,35 0,0015 df MS 0,0039 0,0023 11 PL - 34 F 1,6495 Pvalue 0,2788 F crit 4,3874 Kết trắc nghiệm Anova yếu tố xác định giá trị ấn định chất DL2 Anova: Single Factor SUMMARY Groups Column Column Column Count Sum Average Variance 571,82 95,304 0,0069 571,08 95,18 0,0103 571,93 95,322 0,0219 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0,071 0,1955 Total 0,2666 df 15 MS 0,0355 0,013 17 PL - 35 F P-value 2,7241 0,0979 F crit 3,6823 Kết kiểm tra đánh giá liên phòng chất DL2 – Phịng thí nghiệm PL - 36 Kết kiểm tra đánh giá liên phòng chất DL2 – Phòng thí nghiệm PL - 37 Kết kiểm tra đánh giá liên phịng chất DL2 – Phịng thí nghiệm PL - 38 Kết thử nghiệm quy trình định lượng chất DL1 dược liệu PL - 39 Kết thử quy trình định lượng chất DL2 dược liệu PL - 40 Kết thử nghiệm quy trình định lượng đồng thời chất DL1 DL2 PL - 41 PL - 42 ... - LÊ MINH TÀI PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ RỄ ĐINH LĂNG (Radix Polyscias fruticosa (L. ) Harms Araliaceae) ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 Luận... tài ? ?Phân lập chất đối chiếu từ Đinh lăng (Polyscias fruticosa (L. ) Harms Arliaceae)” với mong muốn phân lập hợp chất saponin triterpen làm chất đánh dấu để kiểm tra chất lượng dược liệu Đinh lăng. .. liệu ứng dụng quy trình định lượng để phân tích Ladyginosid A rễ Đinh lăng tác giả Nguyễn Thị Huyền Trâm [23]; Nghiên cứu phân lập chất chuẩn từ Đinh lăng Folium Polyscias fructicosa (L. ) Harms