Chiết xuất, phân lập một số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat rễ mú từn ( rourea oligophlebia merr , họ connaraceae)

BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NHI CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT RỄ MÚ TỪN (Rourea oligophlebia Merr., HỌ CONNARACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI - 2020 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ NHI MÃ SINH VIÊN: 1501366 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYL ACETAT RỄ MÚ TỪN (Rourea oligophlebia Merr., HỌ CONNARACEAE) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Hà Vân Oanh ThS Lê Thị Loan Nơi thực hiện: Khoa Hóa Thực vật Viện Dƣợc liệu HÀ NỘI – 2020 LỜI CẢM ƠN Trong suốt quãng thời gian học tập nghiên cứu, em may mắn nhận bảo, giúp đỡ từ thầy cô, anh chị bạn bè Với kính trọng lịng biết ơn sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: TS Hà Vân Oanh, người dẫn dắt định hướng cho em từ em bắt đầu nghiên cứu khoa học; khơng truyền đạt kiến thức mà cịn hướng dẫn cho em cách lập kế hoạch làm việc hiệu Cô quan tâm, động viên tận tình giúp đỡ để em hồn thành xong khóa luận ThS Lê Thị Loan, người trực tiếp hướng dẫn em suốt trình thực đề tài Chị bảo giúp đỡ em từ điều nhỏ nhất; rèn luyện cho em tỉ mỉ cẩn thận công việc nghiên cứu; chia sẻ kinh nghiệm quý báu giúp trình làm thực nghiệm em dễ dàng Cơ PGS TS Đỗ Thị Hà, anh chị bạn làm việc Khoa Hóa Thực vật, người sẻ chia, đồng hành em, giúp em có thêm nhiều niềm vui kỉ niệm vơ đáng nhớ suốt thời gian thực khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu tồn thể thầy làm việc môn Dược học Cổ truyển - Trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi em thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên, giúp đỡ vào tạo động lực cho em suốt trình học tập Sự ủng hộ tin tưởng gia đình nguồn động lực to lớn giúp em vững bước đường phía trước Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 19 tháng 06 năm 2020 Sinh viên Nguyễn Thị Nhi MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ iii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Rourea Aubl 1.1.1 Vị trí phân loại chi 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Đa dạng phân bố 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Cơng dụng số lồi thuộc chi Rourea Aubl 1.1.6 Tác dụng sinh học 10 1.2 Tổng quan Mú từn (Rourea oligophlebia Merr.) 13 1.2.1 Đặc điểm thực vật 13 1.2.2 Sinh thái phân bố 14 1.2.3 Thành phần hóa học Mú từn 14 1.2.4 Công dụng tác dụng sinh học Mú từn 15 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tƣợng thiết bị nghiên cứu 17 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 17 2.1.3 Hóa chất, thuốc thử 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 18 2.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 19 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1 Chiết xuất 20 3.2 Phân lập hợp chất cao MTE (cao ethyl acetat) 22 3.2.1 S c cột cao MTE 22 3.2.2 S c cột phân đoạn 1M 22 3.2.3 S c cột phân đoạn 1D 23 3.3 Biện giải, xác định cấu trúc chất phân lập đƣợc 25 3.3.1 Nhận dạng cấu trúc hợp chất MT-2F1 25 3.3.2 Nhận dạng cấu trúc hợp chất MT-2F2 26 3.3.3 Nhận dạng cấu trúc hợp chất MT-3B1 27 3.4 Bàn luận 30 3.4.1 Acid protocatechuic 30 3.4.2 Acid syringic 30 3.4.3 Scopoletin 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 Kết luận 32 Kiến nghị 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ALAT Alanine aminotransferase ASAT Aspartate aminotransferase BuOH Butanol DCM Diclometan DPPH 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl EtOAc Ethyl acetat FRAP Ferric Reducing Antioxidant Power IC50 Half-maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50%) IHA Inhibition halos average (Đường ính trung bình vịng vơ huẩn) MeOH Methanol TB Total bilirubin (bilirubin toàn phần) TT Thuốc thử SKLM S c m/v Khối lượng/thể tích v/v Thể tích/thể tích Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt H-NMR lớp mỏng nhân proton) 13 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13) DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (Phổ DEPT) d doublet s singlet δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) i DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Tên nhóm chất hợp chất lồi thuộc chi Rourea Aubl.3 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ MT-2F1 acid 3,4-dihydroxybenzoic 26 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ MT-2F2 acid 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoic 27 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ MT-3B1 6-methoxy-7-hydroxycoumarin 28 ii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Ảnh chụp Mú từn thu hái huyện Quế Phong, tỉnh Nghệ An .14 Hình 1.2 Một số hợp chất phân lập từ rễ Mú từn 15 Hình 2.1 Hình ảnh rễ Mú từn khơ thu hái Nghệ An 17 Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất rễ Mú từn 21 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 24 Hình 3.3 S c đồ chất phân lập từ cao EtOAc 25 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học MT-2F1 26 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học MT-2F2 27 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học MT-3B1 29 iii ĐẶT VẤN ĐỀ Với hệ sinh thái phong phú, nguồn thực vật đa dạng, Việt Nam đánh giá quốc gia có tiềm lớn dược liệu khu vực Đông Nam Á giới Từ lâu đời, cộng đồng dân tộc nước ta tích lũy nhiều kinh nghiệm việc sử dụng loại làm thuốc chữa bệnh Những tri thức địa sở quan trọng nhằm hỗ trợ cho việc sàng lọc, nghiên cứu loài thực vật mới; đặc biệt bối cảnh thuốc dược liệu sử dụng ngày nhiều việc nghiên cứu, khai thác loài quan tâm Mú từn (Rourea oligophlebia Merr.) phân bố chủ yếu tỉnh Tuyên Quang, Thái Nguyên, Thừa Thiên Huế, Đà Nẵng Nghệ An [2] Theo kinh nghiệm dân gian, đồng bào dân tộc sử dụng thân rễ Mú từn ngâm rượu uống có tác dụng tăng ham muốn, ích thích, tráng dương; hỗ trợ điều trị thối hóa đốt sống, bệnh gout; hỗ trợ điều trị nhức mỏi chân tay, đau nhức xương hớp, đau lưng, phong thấp, cầm máu [1], [46], [49]… Bên cạnh đó, Mú từn dùng để tăng cường bồi bổ sức khỏe cho người bị suy nhược thể, thường xuyên căng thẳng, mệt mỏi [49] Các nghiên cứu loài Rourea oligophlebia Merr giới Việt Nam chưa quan tâm, cơng trình khoa học cơng bố lồi Với mục đích làm sáng tỏ mặt hóa học nhằm góp phần chứng minh kinh nghiệm sử dụng dân gian người dân tộc Thái định hướng cho người dân sử dụng dược liệu cách an toàn hơn, đề tài “Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat rễ Mú từn (Rourea oligophlebia Merr., họ Connaraceae)” thực với mục tiêu sau: Chiết xuất, phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat rễ Mú từn Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chi Rourea Aubl 1.1.1 Vị trí phân loại chi Theo tài liệu [4], [6], [47], chi Rourea Aubl xếp vào họ Dây khế (Connaraceae) Trong hệ thống phân loại thực vật, chi Rourea Aubl thuộc: Ngành Ngọc lan – Magnoliophyta (Angiospermae) Lớp Ngọc lan – Magnoliopsida (Dicotylendone) Phân lớp Hoa hồng – Rosidae Liên Cam – Rutanae Bộ Dây khế – Connarales Họ Dây khế – Connaraceae Chi – Rourea Aubl [48] 1.1.2 Đặc điểm thực vật Cây thuộc chi Rourea Aubl thường có dạng bụi leo, nhỏ thân gỗ; nhánh có mơ phân sinh [3], [5], [45] Lá kép lơng chim lẻ, gặp có chét; mép phẳng ngồi, gân thứ cấp thường phân nhánh, gân phụ liên kết ngang chéo [5], [45] Cụm hoa có dạng hình chùm hình chùy, mọc nách gần Hoa lưỡng tính, mẫu 5, tiền khai hoa vặn [5], [45], [48] Lá đài lợp, nhọn, hình trái xoan, có lơng mi mép, lơng mịn mặt râu đỉnh [48] Cánh hoa mỏng hình giáo, khơng có lơng, dài gấp đến lần đài [5], [48] Nhị 10 bao gồm dài ng n; nhị dính gốc, khơng có lơng [5], [45], [48] Bộ nhụy có nỗn tách rời, thơng thường - noãn phát triển thành [5], [45]; bầu nhụy hình trứng, có lơng nhung nhẵn; vịi nhụy mảnh, hơng có lơng; đầu nhụy chia thùy [48] Quả đại (quả đơn, gặp đôi), hơng lơng, hơng cuống, hình trứng, cong lưng, có hía dọc; vỏ dai cứng; hạt 1, hạt khơng có nội nhũ, có áo hạt phát triển [5], [45], [48] 1.1.3 Đa dạng phân bố Chi Rourea Aubl xác định có 65 lồi 129 giống phân bố kh p nước nhiệt đới [25], [35]; phân bố rộng rãi khu vực Thái Bình Dương, Amazon, Phụ lục 2.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất MT-2F1 Phụ lục 2.3 Phổ DEPT hợp chất MT-2F1 Inten.(x1,000,000) 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 339.30 3.5 3.0 325.30 2.5 2.0 153.10 1.5 1.0 0.5 111.20 0.0 100 267.10 189.05 150 200 250 297.25 300 353.30 350 400 Phụ lục 2.4 Phổ khối (ESI-MS) hợp chất MT-2F1 450 m/z PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT MT-2F2 Cấu trúc hóa học hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.3 Phổ DEPT hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.4 Phổ khối (ESI-MS) hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất MT-2F2 Phụ lục 3.3 Phổ DEPT hợp chất MT-2F2 Inten.(x1,000,000) 5.0 325.30 4.5 4.0 3.5 311.30 3.0 2.5 2.0 197.10 1.5 1.0 297.25 0.5 0.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 Phụ lục 3.4 Phổ khối (ESI-MS) hợp chất MT-2F2 m/z PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT MT-3B1 Cấu trúc hóa học hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.3 Phổ DEPT hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.4 Phổ khối (ESI-MS) hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất MT-3B1 Phụ lục 4.3 Phổ DEPT hợp chất MT-3B1 Inten.(x1,000,000) 191.10 7.0 6.0 339.30 5.0 4.0 3.0 2.0 311.30 1.0 0.0 125.0 150.0 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 Phụ lục 4.4 Phổ khối (ESI-MS) hợp chất MT-3B1 m/z ... hơn, đề tài ? ?Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat rễ Mú từn (Rourea oligophlebia Merr. , họ Connaraceae)? ?? thực với mục tiêu sau: Chiết xuất, phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl. .. (số H, độ bội, J=Hz) ppm δC (ppm) δ Hc (số H, độ bội, J=Hz) ppm δCd (ppm) - 16 4,1 - - 6,2 1 (1 H, d, J = 9,5 Hz) 11 2,4 6,2 0 (1 H, d, J = 9,5 Hz) 11 3,9 7,8 8 (1 H, d, J = 9,0 Hz) 14 6,2 7,7 7 (1 H, d,... = 9,5 Hz) 14 5,2 7,1 3 (1 H, s) 11 0,0 7,1 1 (1 H, s) 11 0,3 - 14 7,3 - 14 6,1 - 15 1,6 - 15 1,7 6,7 9 (1 H, s) 10 4,0 6,8 4 (1 H, s) 10 4,0 - 11 2,4 - 11 1,8 10 - 15 1,6 - 15 1,5 OCH3 3,9 3 (3 H, s) 5 6,8 3,9 2 (3 H,