Chiết xuất, phân lập một số hợp chất từ phân đoạn n hexan phần trên mặt đất loài isodon lophanthoides (d don) hara, lamiaceae

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HỨA BÍCH NGỌC CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT LOÀI Isodon lophanthoides (D.Don) Hara, Lamiaceae KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2020 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HỨA BÍCH NGỌC 1501351 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT LỒI Isodon lophanthoides (D.Don) Hara, Lamiaceae KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Chử Thị Thanh Huyền Nơi thực hiện: Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Bộ môn Dược học cổ truyền HÀ NỘI - 2020 LỜI CẢM ƠN Trong suốt trình nghiên cứu hồn thành khóa luận tốt nghiệp Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu Bộ mơn Dược học cổ truyền, em nhận nhiều quan tâm, giúp đỡ, bảo tận tình Thầy Cơ, bạn bè gia đình Lời đầu tiên, với tất lịng biết ơn kính trọng, em xin gửi lời cám ơn chân thành tới PGS.TS Đỗ Thị Hà TS Chử Thị Thanh Huyền, người Thầy tận tình giúp đỡ em thời gian thực khóa luận Em xin chân thành cảm ơn cán nghiên cứu Khoa Hóa Thực vật – Viện Dược liệu tạo điều kiện sở vật chất nhiệt tình giúp đỡ em q trình hồn thành đề tài Em xin gửi lời cảm ơn Ban Giám hiệu Thầy Cô Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện giúp đỡ em trình thực đề tài Em xin gửi lời cám ơn đề tài Nghị định thư Việt – Hàn “Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư điều hòa miễn dịch số thuốc Việt Nam” 349/QĐBKHCN tài trợ kinh phí để em thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình bạn bè – người bên cạnh động viên, ủng hộ tạo điều kiện giúp đỡ em q trình học tập thực khóa luận Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn, khóa luận cịn có nhiều thiếu sót, em mong nhận góp ý Thầy Cơ, bạn bè để khóa luận hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 07 năm 2020 Sinh viên HỨA BÍCH NGỌC MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ……………… ……………………………………………………….1 CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại 1.2 Đặc điểm thực vật 1.3 Phân bố sinh thái 1.4 Thành phần hóa học 1.5 Tác dụng dược lý .12 1.5.1 Tác dụng chống oxy hóa .12 1.5.2 Tác dụng kháng khuẩn 12 1.5.3 Tác dụng kháng virus 13 1.5.4 Tác dụng chống ung thư .13 1.5.5 Tác dụng khác .14 1.6 Tính vị công dụng 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.2 Nguyên liệu 15 2.2.1 Hóa chất 15 2.2.2 Trang thiết bị nghiên cứu 16 2.3 Nội dung nghiên cứu 16 2.4 Phương pháp nghiên cứu 16 2.4.1 Định tính nhóm chất thường gặp mẫu dược liệu 16 2.4.2 Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc chất phân lập 16 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Định tính nhóm chất thường gặp mẫu dược liệu 19 3.1.1 Định tính chất béo 19 3.1.2 Định tính carotenoid .19 3.1.3 Định tính phytosterol 19 3.1.4 Định tính saponin 20 3.1.5 Định tính coumarin .20 3.1.6 Định tính flavonoid .21 3.1.7 Định tính acid hữu 21 3.1.8 Định tính acid amin 21 3.1.9 Định tính tanin 21 3.1.10 Định tính đường khử tự 22 3.1.11 Định tính polysarcharid 22 3.1.12 Định tính alcaloid .22 3.1.13 Định tính anthranoid 23 3.1.14 Định tính glycosid tim 23 3.2 Chiết xuất 25 3.3 Phân lập hợp chất cao n-hexan 26 3.3.1 Sắc ký cột cao n-hexan 27 3.3.2 Sắc ký cột phân đoạn 1E 28 3.3.3 Sắc ký cột phân đoạn 1IK 28 3.4 Xác định cấu trúc hợp chất .30 3.4.1 Hợp chất NRV-1E1 30 3.4.2 Hợp chất NRV-3B1 33 3.5 Bàn luận 35 3.5.1 Về kết định tính nhóm chất hữu có dược liệu 35 3.5.2 Về kết chiết xuất 35 3.5.3 Về kết phân lập hợp chất 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ…………… ……………………………………… 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ 13 Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt C-NMR nhân carbon 13) H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) A-549 Dòng tế bào ung thư phổi Ara Arabinofuranosid BuOH n-Butanol DCM Dichloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer (Phổ DEPT) DPPH 2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol Glc Glucopyranosid HDL High-density lipoprotein cholesterol (Lipoprotein tỷ trọng cao) HepG2 Tế bào ung thư gan người HL-60 Dòng tế bào ung thư bạch cầu người HPLC High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) IC50 Half-maximal inhibitory concentration (Nồng độ ức chế 50%) IFN-γ gamma interferon IL-12 Interleukin-12 IL-6 Interleukin-6 ILHP I lophanthoides var.gerardianus (Bentham) H Hara ILHP-1 ILHP thô sấy khô ILHP-2 ILHP khử protein ILHP-3 ILHP khử màu J Hằng số tương tác (đơn vị Hz) KB Ung thư biểu mô LDL Low-density lipoprotein cholesterol (Lipoprotein tỷ trọng thấp) MCP-1 Monocyte chemoattractant protein-1 Me Methoxy (OCH3) MeOH Methanol NF-κB Nuclear Factor Kappa B (Yếu tố hạt nhân-kappa B) NMR Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân) ROS Reactive oxigen species (Các gốc oxy hóa tự do) Rut Rutinosid SKC Sắc ký cột STT Số thứ tự TLTK Tài liệu tham khảo TNF-α Tumor necrosis factor alpha (Yếu tố hoại tử khối u alpha) TT Thuốc thử VP-16 Etoposide (Một loại thuốc hóa trị liệu) Xyl Xylofuranosid d doublet q quartet s singlet t triplet v/v Thể tích/thể tích δ Độ dịch chuyển hóa học (đơn vị ppm) DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Đặc điểm số thứ loài Isodon lophanthoides Bảng 1.2 Phân bố thứ loài Isodon lophanthoides Bảng 1.3 Thành phần hóa học Nhị rối vằn Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất có phần mặt đất Nhị rối vằn phản ứng hóa học 24 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ hợp chất NRV-1E1 β-sitosterol 32 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ hợp chất NRV-3B1 acid ursolic 34 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc diterpenoid phân lập từ Nhị rối vằn .9 Hình 1.2 Cấu trúc sterol phân lập từ Nhị rối vằn 10 Hình 1.3 Cấu trúc triterpenoid phân lập từ Nhị rối vằn 10 Hình 1.4 Cấu trúc phenolic đơn giản phân lập từ Nhị rối vằn 10 Hình 1.5 Cấu trúc dihydrobenzofuran lignan phân lập từ Nhị rối vằn 11 Hình 1.6 Cấu trúc flavonoid phân lập từ Nhị rối vằn 11 Hình 3.1 Sắc ký đồ cao n-hexan (Hx) cao tổng EtOH 80% (E80) 27 Hình 3.2 Sắc ký đồ phân đoạn từ cao n-hexan 28 Hình 3.3 Sắc ký đồ hợp chất NRV-1E1 NRV-3B1 so với cao tổng 29 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất NRV-1E1 .31 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất NRV-3B1 .33 DANH MỤC SƠ ĐỒ Tên sơ đồ Trang Sơ đồ 3.1 Quy trình chiết xuất cao tổng cao phân đoạn từ Nhị rối vằn 26 Sơ đồ 3.2 Quy trình phân lập hợp chất từ cao n-hexan Nhị rối vằn 29 ĐẶT VẤN ĐỀ Isodon (D.Don) Hara chi quan trọng thuộc họ Bạc hà (Lamiaceae), Hoa mơi Chi có khoảng 150 lồi sống nước cỏ lâu năm, phân bố chủ yếu khu vực nhiệt đới cận nhiệt thuộc châu Á Nền y học cổ truyền Trung Quốc, Nhật Bản từ lâu đời sử dụng nhiều loài Isodon để làm thuốc chữa bệnh để trị viêm họng, bệnh đường hơ hấp, đường tiêu hóa, vàng da, sốt rét,…[27] Isodon biết đến chi giàu diterpenoid, chứa phenolic, triterpenoid, tinh dầu chất béo Với hoạt tính chống oxy hóa, chống viêm, kháng khuẩn,… [21] Nhị rối vằn (Isodon lophanthoides) loài thuộc chi Isodon mọc đồi, ven rừng, từ Sơn La, Lào Cai, Cao Bằng, Lạng Sơn, Bắc Kạn, Thái Ngun tận Lâm Đồng, có vị đắng, tính mát, có tác dụng nhiệt, lợi tiểu, lọc máu tán ứ, thường dùng để trị viêm gan vàng da cấp tính, viêm túi mật cấp, viêm ruột, [3]… Các nghiên cứu giới cho thấy, I lophanthoides có chứa nhóm chất diterpenoid [15], [27], sterol [21], triterpenoid [19], [21], phenolic đơn giản [39], lignan [8] flavonoid [7], [32] với tác dụng dược lý cao chiết hợp chất tinh khiết cơng bố chống oxy hóa [21], [31], kháng khuẩn [21], [39], kháng virus [21], [34], chống ung thư [7], [34],… Tuy nhiên nghiên cứu nước thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi cịn hạn chế Vì lý trên, đề tài: “Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn n-hexan phần mặt đất loài Isodon lophanthoides (D.Don) Hara, Lamiaceae” thực với mục tiêu: Định tính nhóm chất phần mặt đất loài Isodon lophanthoides (Nhị rối vằn) Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc hóa học số hợp chất từ phân đoạn n-hexan phần mặt đất loài Nhị rối vằn 22 Liu Y.H., Huang S.X., et al (2008), "A new ent-kauranoid from Isodon lophanthoides var geradianus", Natural Product Research, 22(10), pp.860864 23 Ma C.M., Cai S.Q., et al (2005), "The cytotoxic activity of ursolic acid derivatives", European Journal of Medicinal Chemistry, 40(6), pp.582-589 24 Mouffok S., Haba H., et al (2012), "Chemical constituents of Centaurea omphalotricha Coss & Durieu ex Batt & Trab", Records of Natural Products, 6(3), pp.292-295 25 Novotný L, Vachalkova A, et al (2001), "Ursolic acid: an anti-tumorigenic and chemopreventive activity Minireview", Neoplasma, 48(4), pp.241 26 Silva M , Goretti V., et al (2008), "Variation of ursolic acid content in eight Ocimum species from northeastern Brazil", Molecules, 13(10), pp.2482-2487 27 Sun H.D., Huang S.X., et al (2006), "Diterpenoids from Isodon species and their biological activities", Natural Product Reports, 23(5), pp.673-698 28 Takhtajan A (2009), Flowering Plants, Springer Netherlands, pp.573 29 Villaseñor I.M., Angelada J., et al (2002), "Bioactivity studies on β‐sitosterol and its glucoside", Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Pharmacological and Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives, 16(5), pp.417-421 30 Wei C.C., Wang X.D., et al (2013), "Chemical constituents from Isodon sculponeatus", Chemistry of Natural Compounds, 48(6), pp.1098-1099 31 Wen L., Lin L., et al (2011), "Ultrasound-assited extraction and structural identification of polysaccharides from Isodon lophanthoides var gerardianus (Bentham) H Hara", Carbohydrate Polymers, 85(3), pp.541-547 32 Xiang H.Y., Xie Y (2011), "Simultaneous determination of rutin and quercetin in Rabdosia lophanthoides (Buch.-Ham ex D Don) Hara by RP-HPLC", Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory, (3), pp.1170-1173 33 Xie W.D., Li X., et al (2012), "Abietane diterpenoids from Isodon inflexus", Phytochemistry, 81, pp.153-158 34 Yang L., Li L., et al (2011), "Anti-hepatitis B virus and cytotoxic diterpenoids from Isodon lophanthoides var gerardianus", Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 59(9), pp.1102-1105 35 Yunlong X., Dan W., et al (1989), "Abietane quinones from Rabdosia lophanthoides", Phytochemistry, 28(1), pp.189-191 36 Zhang L.S., Wang Y.L., et al (2018), "Three new 3, 4-seco-cycloartane triterpenoids from the flower of Gardenia jasminoides", Phytochemistry Letters, 23, pp.172-175 37 Zhengyi W., Raven P.H , et al (1994), Flora of China, 17, pp.269 - 291 38 Zhou W., Xie H., et al (2013), "Abietane diterpenoids from Isodon lophanthoides var graciliflorus and their cytotoxicity", Food chemistry, 136(2), pp.1110-1116 39 Zhou W., Xie H., et al (2014), "Phenolic constituents from Isodon lophanthoides var graciliflorus and their antioxidant and antibacterial activities", Journal of Functional Foods, 6, pp.492-498 PHỤ LỤC PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT NRV-1E1 PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT NRV-3B1 PHỤ LỤC KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH TÊN KHOA HỌC PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT NRV-1E1 Cấu trúc hóa học hợp chất NRV-1E1 Phụ lục 2.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất NRV-1E1 Phụ lục 2.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) hợp chất NRV-1E1 Phụ lục 2.3 Phổ DEPT hợp chất NRV-1E1 Phụ lục 2.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) hợp chất NRV-1E1 Phụ lục 2.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) hợp chất NRV-1E1 Phụ lục 2.3 Phổ DEPT hợp chất NRV-1E1 PHỤ LỤC DỮ LIỆU PHỔ CỦA HỢP CHẤT NRV-3B1 Cấu trúc hóa học hợp chất NRV-3B1 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3 & CD3OD) hợp chất NRV-3B1 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3 & CD3OD) hợp chất NRV-3B1 Phụ lục 3.3 Phổ DEPT hợp chất NRV-3B1 Phụ lục 3.1 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3 & CD3OD) hợp chất NRV-3B1 Phụ lục 3.2 Phổ 13C-NMR (125 MHz, CDCl3 & CD3OD) hợp chất NRV-3B1 Phụ lục 3.3 Phổ DEPT hợp chất NRV-3B1 ... HỌC DƯỢC HÀ NỘI HỨA BÍCH NGỌC 1501351 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ PHÂN ĐOẠN N-HEXAN PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT LOÀI Isodon lophanthoides (D.Don) Hara, Lamiaceae KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ... nước thành phần hóa học tác dụng sinh học lồi cịn hạn chế Vì lý trên, đề tài: ? ?Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ phân đoạn n-hexan phần mặt đất loài Isodon lophanthoides (D.Don) Hara, Lamiaceae? ??... lập hợp chất từ cao n-hexan cao phân đoạn lại (ethyl acetat n-butanol) từ phần mặt đất loài Nhị rối vằn - Nghiên cứu tác dụng sinh học cao tổng, cao phân đoạn hợp chất phân lập từ phần mặt đất loài