(LUẬN văn THẠC sĩ) xác định đồng thời dư lượng kháng sinh nhóm phenicol trong một số loại thực phẩm tươi sống trên địa bàn hà nội bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC MS MS)

Luận văn thạc sĩ Hóa học ĐẠI HỌC Q́C GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 12/2011 Hà Nội - Năm Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học ĐẠI HỌC Q́C GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Vũ Thị Ngân XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI DƯ LƯỢNG KHÁNG SINH NHÓM PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/MS/MS) Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã sớ: 604429 ḶN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Xuân Trung Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download Hà Nội:- skknchat@gmail.com Năm Luận văn thạc sĩ Hóa học MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH, BIỂU ĐỒ MỞ ĐẦU .1 Chƣơng 1: TỔNG QUAN 12 1.1 Kháng sinh vấn đề liên quan 12 1.1.1 Khái niệm phân loại kháng sinh 12 1.1.1.1 Khái niệm kháng sinh 12 1.1.1.2 Phân loại thuốc kháng sinh [7] 12 1.1.2 Các vấn đề có liên quan đến tồn dƣ kháng sinh sản phẩm có nguồn gốc từ động vật 17 1.1.2.1 Tồ n dƣ kháng sinh .17 1.1.2.2 Tình hình tồn dƣ kháng sinh [7] 18 1.1.2.3 Nguyên nhân tồn dƣ kháng sinh thực phẩm 20 1.1.2.5 Tình hình quản lý sử dụng kháng sinh [7] 21 1.2 Nhóm kháng sinh phenicol [9, 12, 14] 22 1.2.1 Nguồn gốc 22 1.2.2 Phân loại: Cấu tạo đặc tính 23 1.2.2.1 Chloramphenicol (C11H12 Cl2 N2O5)(CAP) .23 1.2.2.2 Thiamphenicol : (C12H15Cl2NO5S) (TAP) .27 1.2.2.3 Florfenicol: (C12H14ClFNO4S) (FF) 27 1.2.3 Giới hạn tồn dƣ cho phép nhóm Phenicol 28 1.3 Một số phƣơng pháp phân tích cơng cụ phân tích tồn dƣ kháng sinh 30 1.3.1 Phƣơng pháp tách làm giàu .30 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 31 1.3.2.1 Phƣơng pháp sinh hóa .31 1.3.2.2 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ phân tử 32 1.3.2.3 Phƣơng pháp Sắc ký lỏng hiệu cao 33 1.3.2.4 Phƣơng pháp sắc ký khối phổ 34 1.3.2.4.1 Nguyên tắc hoạt động HPLC .36 1.3.2.4.2 Pha tĩnh HPLC [11] .36 1.3.2.4.3 Pha động HPLC [11] .37 1.3.2.4.5 Detector HPLC [11, 15] 38 1.3.2.5 Detector khối phổ (Mass Spectrometry) [15, 17] 38 Chƣơng : NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Đối tƣợng nội dung nghiên cứu 42 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 42 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 42 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học 2.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 43 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ 43 2.2.1.1 Thiết bị 43 2.2.1.2 Dụng cụ 43 2.2.2 Dung mơi, hóa chất 44 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu .45 2.3.1 Lựa chọn mẫu cho khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu sơ .45 2.3.2 Phƣơng pháp khảo sát điều kiện tách chiết mẫu 46 2.3.3 Tối ƣu hóa điều kiện chạy sắc ký 48 2.3.3.1 Điều kiện phân tích LC-MS .48 2.3.3.2 Phân tích định tính định lƣợng LC-MS/MS .49 2.4 Phƣơng pháp đánh giá [16] 49 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu thực nghiệm 50 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 3.1 Tối ƣu điều kiện xác định Phenicol thiết bị LC/MS/MS .51 3.1.1 Tối ƣu điều kiện chạy detector khối phổ (MS) 51 3.1.2 Pha tĩnh 54 3.1.3 Khảo sát hệ pha động chƣơng trình gradient 54 a/ Thành phần pha động 54 b/Tỉ lệ pha động .59 c/ Chƣơng trình Gradient .63 d/ Tốc độ dòng pha động .65 3.2 Đánh giá phƣơng pháp .68 3.2.1 Khoảng tuyến tính lập đƣờng chuẩn 68 3.2.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) phƣơng pháp 70 3.2.3 Độ xác phép đo 72 3.2.4 Độ lặp lại độ thu hồi 73 3.3 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu .76 3.3.1 Lựa chọn mẫu cho khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu sơ .76 3.3.2 Khảo sát dung môi tách chiết ban đầu làm giàu sơ 77 3.3.4 Khảo sát loại cột chiết 79 3.3.5 Khảo sát thể tích rửa giải 80 3.4 Phân tích mẫu thực tế 82 Chƣơng 4: KẾT LUẬN .85 TÀI LIỆU THAM KHẢO 86 PHỤ LỤC Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitrile CAP Chloramphenicol CV Hệ số biến thiên (Coefficient of Variation) FF Florfenicol GC-MS Sắc ký khí – Khối phổ (Gas Chromatography – Mass Spectrometry) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) KPH Không phát LC-MS Sắc ký lỏng – Khối phổ (Liquid Chromatography – Mass Spectrometry) LOD Giới hạn phát (Limit Of Detection) LOQ Giới hạn định lƣợng (Limit Of Quantitation) MRL Giới hạn tồn dƣ cho phép lớn (Maximum Residue Limit) MDL Giới hạn phát phƣơng pháp (Method Detection Limit) SD Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) TAP Thiamphenicol VSATTP Vệ sinh an toàn thực phẩm Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Giới hạn tồn dƣ cho phép lớn nhất(MRL) Florfenicol số nƣớc 29 Bảng 2.1 Đặc điểm lý hóa số loại dung môi 47 Bảng 3.1 Điều kiện chạy nguồn ion hóa ESI 51 Bảng 3.2 Kết bắn phá ion mẹ .52 Bảng 3.3 Kết tối ƣu tự động điều kiện chạy MS/MS 52 Bảng 3.4 Các thông số tối ƣu cho phân tích định tính định lƣợng CAP FF MS/MS 53 Bảng 3.5 Kết qả khảo sát thành phần pha động 58 Bảng 3.6 Kết khảo sát tỉ lệ pha động 62 Bảng 3.7 Chƣơng trình gradient tối ƣu cho pha động phân tích CAP FF 64 Bảng 3.9 Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ Phenicol .69 Bảng 3.10 Sai số độ lặp lại phép đo nồng độ khác 73 Bảng 3.11 Độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp mức nồng độ .75 khác 75 Bảng 3.12 Một số thành phần đối tƣợng mẫu phân tích 76 Bảng 3.13 Kết khảo sát dung môi tách chiết ban đầu 78 Bảng 3.14 Kết khảo sát với hai loại cột chiết pha rắn .79 Bảng 3.15 Kết khảo sát mức thể tích rửa giải chiết pha rắn 80 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học DANH MỤC HÌNH VẼ, BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Sơ đồ thiết bị lỏng khối phổ (LC/MS) 27 Hình 1.2 Kĩ thuật ESI bắn phá với chế độ ion dƣơng 30 Hình 1.3 Kĩ thuật APCI bắn phá với chế độ ion dƣơng 31 Hình 3.1 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha độngkhảo sát MeOH – CH3COOH 0,1% 47 Hình 3.2 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát MeOH – H2O 48 Hình 3.3 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát MeOH – CH3COONH4 0,1% 48 Hình 3.4 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát ACN – H20 49 Hình 3.5 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát ACN – CH3COOH 0,1% 49 Hình 3.6 Sắc đồ mảnh ion CAP FF với pha động khảo sát ACN – CH3COONH4 0,1% 49 Hình 3.7 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 30:70 (v/v) 51 Hình 3.8 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 50:50 (v/v) 52 Hình 3.9 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 60:40 (v/v) 52 Hình 3.10 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 70:30 (v/v) 53 Hình 3.11 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 80:20 (v/v) 53 Hình 3.12 Sắc đồ hai mảnh ion định lƣợng CAP FF với tỉ lệ pha động khảo sát MeOH:CH3COOH 0,1% = 90:10 (v/v) 54 Hình 3.13 Sắc đồ mảnh ion định lƣợng FF CAP (lần lƣợt theo thứ tự từ trái sang phải) chạy chƣơng trình gradient bảng 3.7 57 Hình 3.14 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tốc độ dòng 0,2mL/phút58 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Hình 3.15 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tốc độ dòng 0,3mL/phút58 Hình 3.16 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tốc độ dòng 0,4mL/phút58 Hình 3.17 Sắc đồ mảnh ion CAP FF chạy tốc độ dòng 0,5mL/phút59 Hình 3.18 Sắc đồ hai mảnh định lƣợngcủa CAP FF thêm chuẩn mẫu trắng phƣơng pháp với nồng độ 0,03 ng/ml 63 Hình 3.19 Tƣơng quan hiệu suất thu hồi với dung môi tách chiết 70 Hình 3.20 Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào thể tích rửa giải chiết pha rắn 73 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học MỞ ĐẦU Hiện nay, mức sống ngƣời dân bƣớc đƣợc nâng cao thì vệ sinh an toàn thực phẩm trở thành vấn đề đƣợc quan tâm toàn xã hội Đặc biệt, Việt Nam gia nhập WTO thì thách thức to lớn Vệ sinh an tồn thực phẩm khơng rào cản khắc nghiệt hàng hóa xuất mà cịn làm giảm sức cạnh tranh thị trƣờng tiêu thụ nội địa Trong khoảng 10 năm trở lại đây, ngành nghề chăn nuôi đƣợc mở rộng, suất sản lƣợng sản phẩm chăn ni ngày cao, góp phần đáng kể vào việc cung cấp nguyên liệu cho xuất nhƣ thị trƣờng nội địa, tạo công ăn việc làm, xóa đói giảm nghèo nâng cao mức sống cho ngƣời dân Tuy nhiên, phát triển mang tính tự phát, phân tán nhỏ lẻ, thiếu qui hoạch kiểm sốt mơi trƣờng làm cho dịch bệnh diễn biến ngày phức tạp Trong điều kiện đó, với thiếu hiểu biết, ý thức cộng đồng nên ngƣời chăn ni coi hóa chất thuốc thú y giải pháp để tăng suất sản lƣợng Điều đó, đồng nghĩa với việc hóa chất thuốc thú y đƣợc sử dụng thƣờng xuyên Trên thực tế điều tra cho thấy việc sử dụng kháng sinh không nguyên tắc, lạm dụng mức chăn nuôi nuôi trồng thủy sản tiếp diễn (Phạm Kim Đăng, 2007, 2011) Việc lạm dụng, sử dụng bất hợp pháp sử dụng sai nguyên tắc thuốc thú y nói chung kháng sinh nói riêng chăn ni ni trồng thủy sản gây tƣợng nhờn thuốc gây tồn dƣ sản phẩm ảnh hƣởng xấu đến sức khỏe cộng đồng, môi trƣờng nhƣ hiệu điều trị bệnh Để tăng cƣờng kiểm soát dƣ lƣợng, nƣớc phát triển có qui định chặt chẽ kiểm soát nghiêm ngặt Chẳng hạn, EU ban hành định số 2377/90 EC đƣợc thay định 37/2010 quy định giới hạn tồn dƣ cho phép thuốc thú y sản phẩm động vật (CE, 1990; 2010), theo sản phẩm có nguồn gốc từ động vật phải đƣợc kiểm soát tuân thủ quy trình thị số 96/23 EC (EU, 1996) 10 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Những năm gần đây, vệ sinh an toàn thực phẩm chủ đề đƣợc Chính phủ, bộ, ngành liên quan đặc biệt quan tâm vấn đề nóng đƣợc đƣa chất vấn thảo luận kỳ họp Quốc hội gần Chính vì thế, ngành liên quan liên tục hoàn thiện ban hành quy định nhiều thị để hƣớng dẫn kiểm soát dƣ lƣợng, định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/02/2005, số 26/2005/QĐ – BTS ngày 18/8/2005 Bộ thủy sản (nay Nông nghiệp Phát triển nông thôn, gần thông tƣ 69/2010/TTBNNPTNT ngày 6/12/2010 liên quan đến danh mục hóa chất kháng sinh cấm hạn chế sử dụng chăn nuôi nuôi trồng thủy sản Tồn dƣ tối đa hóa chất, thuốc thú y, độc tố thực phẩm đƣợc Bộ Y tế quy định định N046/2007/QĐ-BYT ngày 19/12/2007 [1, 2, 3, 4] Để kiểm sốt dƣ lƣợng hóa chất nói chung kháng sinh nói riêng, có nhiều phƣơng pháp phân tích đƣợc khuyến cáo sử dụng Nhƣng với đặc điểm ƣu việt độ xác nên phƣơng pháp phân tích sắc ký khối phổ (GCMS, LC-MS) đƣợc coi phƣơng pháp phân tích khẳng định, có giá trị pháp lý để phát định lƣợng nồng độ chất tồn dƣ, đặc biêt nhóm chất cấm cần đƣợc kiểm sốt lƣợng vết hay siêu vết Tuy nhiên, tích chất phức tạp, tính đặc hiệu phƣơng pháp nên việc ứng dụng, vận hành ổn định giá thành phân tích ln thách thức ngƣời làm cơng tác phân tích Để giảm thiểu chi phí phân tích xu hƣớng chung nƣớc phát triển chuẩn hóa phƣơng pháp phân tích có khả phát định lƣơng đồng thời nhiều chất lần phân tích Vì vậy, để góp phần nâng cao lực phân tích chiến lƣợc kiểm soát dƣ lƣợng kháng sinh nƣớc ta, việc nghiên cứu tối ƣu chuẩn hóa phƣơng pháp phân tích nói chung phƣơng pháp khẳng định lý hóa nói riêng nhƣ phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ cần thiết Xuất phát từ thực tế đó, đề tài đƣợc thực nhằm tối ƣu hóa phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS có khả xác định đồng thời hai chất nhóm Phenicol (Chloramphenicol Florfenicol) tồn dƣ số thực phẩm tƣơi sống đƣợc bán thị trƣờng Hà Nội 11 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Đồ thị cho thấy rõ Etyl axetat cho độ thu hồi với hai chất cao Đây dung mơi có độ phân cực trung bình thấp dung môi khảo sát Với dung môi thì thành phần mẫu protein khoáng, phần nƣớc phần lipit bị loại Đồng thời so với dung môi độ chọn lọc hợp chất tan cao Axeton Axetonitril Tuy nhiên, chất có độ phân cực tƣơng đƣơng với (các chất màu, lipit tạp…) bị chiết sang Do sau làm bay dung mơi Etylaxetat, hịa cắn CH3COONH4 4% loại mỡ n-hexan, cần tiếp tục đƣợc làm giàu làm thêm Ở sử dụng chiết pha rắn phù hợp 3.3.4 Khảo sát loại cột chiết Vì tính chất nhóm Phenicol tan tốt dung môi phân cực vừa nên khảo sát trình làm giàu làm với hai loại cột chiết pha rắn C18 Florisil Các cột đƣợc chế tạo sẵn, có phần thể tích trống (khơng chứa chất nhồi) 3ml Do chúng tơi hoạt hóa cột 3ml MeOH 3ml H2O dùng MeOH làm dung môi rửa giải với V=3ml Thêm chuẩn tƣơng tự nhƣ khảo sát dung môi tách chiết Kết khảo sát nhƣ sau: Bảng 3.14 Kết khảo sát với hai loại cột chiết pha rắn Dung môi Cột C18 Cột Florisil CAP FF Thông số đánh giá 15600 257000 Diện tích pic Sp 0,91 8,49 Nồng độ thu đƣợc C(ppb) 91 84,9 Hiệu suất thu hồi R% 1111 28900 Sp 0,04 0,715 C 7,15 R% 79 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Ở khảo sát đƣợc với loại dung môi rửa giải MeOH thì độ thu hồi sử dụng hai loại cột hoàn toàn khác biệt Điều hoàn toàn phù hợp với độ phân cực CAP FF Do chúng tơi lựa chọn cột C18 cho phân tích nhóm phenicol 3.3.5 Khảo sát thể tích rửa giải Thể tích rửa giải chiết pha rắn ảnh hƣởng trực tiếp đến khả thu hồi phƣơng pháp Thể tích rửa giải đƣợc lựa chọn cho độ thu hồi đạt đƣợc tối đa đảm bảo khơng gây lãng phí dung môi rửa giải Trong nghiên cứu này, lựa chọn MeOH dung môi rửa giải (đây dung mơi có đọ phân cực vừa, đƣợc sử dụng phần lớn nghiên cứu nhóm phenicol), bốn mức thể tích rửa giải đƣợc khảo sát 1; 2; 3; 4ml Kết khảo sát đƣợc tổng kết bảng sau: Bảng 3.15 Kết khảo sát mức thể tích rửa giải chiết pha rắn Thể tích rửa giải CAP Thơng số đánh giá FF 1ml 24700 490000 Diện tích pic Sp CAP (3ppb) 1,45 16,4 Nồng độ thu đƣợc C(ppb) 48,3 54,8 Hiệu suất thu hồi R% 17100 332000 Sp 1,00 11,1 C 66,7 73,8 R% 14800 255000 Sp 0,86 8,42 C FF (30ppb) 2ml CAP (1,5ppb) FF (15ppb) 3ml CAP (1ppb) 80 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học FF (10ppb) 86,0 84,2 R% 4ml 11300 214000 Sp 0,65 6,35 C 86,0 84,7 R% CAP (0,75ppb) FF (7,5ppb) Kết mối tƣơng quan thể tích rửa giải hiệu suất thu hồi đƣợc biểu diễn đồ thị sau: Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào thể tích rửa giải 100 90 hiệu suất thu hồi (%) 80 70 60 CAP 50 FF 40 30 20 10 0 thể tích rửa giải (ml) Hình 3.20 Sự phụ thuộc hiệu suất thu hồi vào thể tích rửa giải chiết pha rắn Nhƣ từ 3ml hiệu suất thu hồi ổn định tƣơng đối cao, vì chúng tơi chọn thể tích rửa giải cho phƣơng pháp 3ml Từ bƣớc khảo sát trên, lựa chọn điều kiện tối ƣu, chúng tơi đƣa quy trình phân tích đồng thời CAP FF nhƣ sơ đồ sau: 81 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Cân 10g mẫu/ ống ly tâm 50ml Thêm chuẩn hỗn hợp CAP FF + 20ml Etyl axetat Đồng Lắc vortex phút Chiết lặp với 10ml EtA Ly tâm 6000v/phút (5 phút) Gạn lớp vào bình cô quay 100ml, cô quay tới cạn 400C Phần cắn Hòa cắn 12 ml CH3COONH4 4% Loại béo ml n-hexan, chiết lặp hai lần Qua cột chiết pha rắn C18 3.4 Phân tích mẫu thực tế - Hoạt hóa =3ml H20 3ml MeOH -Nạp mẫu - Rửa tạp 2ml H2O - Rửa giải 3ml MeOH LC/MS/MS 82 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Sau nghiên cứu tối ƣu phƣơng pháp phân tích Để củng cố với đối tƣợng tơm, thịt gà, thịt lợn; tiến hành sƣu tầm mẫu trắng (là mẫu từ động vật nuôi nguồn thức ăn khơng bổ sung nhóm kháng sinh này), phân tích lặp lần thu đƣợc độ thu hồi mẫu đảm bảo khả định lƣợng phƣơng pháp: Độ thu hồi trung bình mẫu trắng thịt lợn, gà, tôm mức nồng độ 1ppb cao 80% Chúng thu thập tiếp khoảng 22 mẫu thịt đƣợc bán chợ quận huyện Long Biên, Gia Lâm, Hoàng Mai, Đông Anh khoảng thời gian tháng 8, năm 2011 Tiến hành xử lý mẫu nhƣ chƣơng đề cập, sử dụng phƣơng pháp nghiên cứu, chúng tơi thu đƣợc kết phân tích theo bảng sau: Nồng độ phân tích mẫu (ng/g mẫu) Mẫu CAP FF Thịt lợn mẫu trắng KPH KPH Thịt lợn (CGL2) KPH KPH Thịt lợn (DAL5) KPH KPH Thịt lợn (DAL8) 0,46 KPH Thịt lợn (CGL6) KPH KPH Thịt lợn (DAL6) KPH 403 Thịt lợn (VDL) KPH KPH Cá mẫu trắng KPH KPH Cá (FHN1) KPH KPH Cá (FHN12) 0,46 0,66 Cá (FHN10) KPH KPH Cá (FHN8) KPH KPH 83 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Cá (FHN4) KPH KPH Cá (FHN6) 0,03 KPH Cá (FVD) 0,44 KPH Tôm mẫu trắng KPH KPH Tôm (SHN2) KPH KPH Tôm (SHN5) KPH KPH Tôm (SHN6) KPH KPH Tôm (SHN17) KPH KPH Tôm (SHN12) KPH 0,3 Tôm (SHN8) 0,12 KPH Tôm (SVD) KPH KPH Thịt gà trắng KPH KPH Thịt gà (DAG1) 0,02 KPH Thịt gà (GNC) KPH KPH Trong số 22 mẫu khảo sát thì phát thấy 6/22 mẫu dƣơng tính với Chloramphenicol nồng độ định lƣợng đƣợc khơng cao 0,02 đến 0,46ng/g mẫu; 3/22 mẫu dƣơng tính với FF đặc biệt mẫu DAL6 có hàm lƣợng FF cao vƣợt giới hạn tồn dƣ cho phép EU Các mẫu khác mức thêm chuẩn 1ng/ml lớn 80% 84 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Chƣơng 4: KẾT LUẬN Trên sở kết thực nghiệm nghiên cứu để xác định dƣ lƣợng kháng sinh nhóm phenicol số loại thịt làm thực phẩm phổ biến phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ, thu đƣợc kết sau: Nghiên cứu tối ƣu hóa đƣợc điều kiện chạy sắc ký lỏng khối phổ nhƣ: pha động, cột sắc ký, detector Nghiên cứu đánh giá đƣợc khoảng tuyến tính, giới hạn phát giới hạn định lƣợng Chloramphenicol Florfenicol, độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp Nghiên cứu đƣa điều kiện để tách chiết CAP FF số loại thịt làm thực phẩm Đƣa quy trình phân tích xác định đồng thời tồn dƣ kháng sinh CAP FF số loại thực phẩm tƣơi sống phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ Tiến hành phân tích 22 mẫu thịt mẫu trắng đối chứng địa bàn Hà Nội, xác định độ thu hồi mẫu khác Từ kết thu đƣợc chúng tơi nhận thấy áp dụng phân tích tồn dƣ kháng sinh nhóm phenicol với độ tin cậy cao Đây phƣơng pháp có nhiều ƣu điểm phân tích đồng thời nhóm phenicol chi phí cho phân tích cịn cao Nếu có thể, mong tiếp tục nghiên cứu xác định đồng thời hai chất cịn lại (ít phổ biến hơn) thuộc nhóm phenicol 85 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học TÀI LIỆU THAM KHẢO A Tiếng Việt Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2009), Quyết định số 15/2009/TT- BNN ngày 17 tháng năm 2009, Cấm số hóa chất, kháng sinh nhập khẩu, sản xuất, kinh doanh sử dụng thuốc thú y Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (2010), Thông tƣ 69/2010/TT- BNNPTNT ngày 03 tháng 12 năm 2010 Danh mục thuốc thú y, chế phẩm sinh học, vi sinh vật, hóa chất dùng thú y thủy sản đƣợc phép lƣu hành Việt Nam Bộ Thủy sản (2006), Công điện Bộ trƣởng Bộ thủy sản số: 01/BTS-VP, ngày 12 tháng năm 2006 Bộ Y tế (2007), Quyết định số 03/2002QD-BTS, Quy chế quản lý thuốc thú y hóa chất sử dụng ni trồng thủy sản Phạm Kim Đăng, Marie-Louise Sippo, Guy Degand, Caroline Douny, Guy Maghuin-Rogister (2007), “Chuẩn hóa phƣơng pháp sàng lọc định tính kiểm sốt tồn dƣ kháng sinh thực phẩm có nguồn gốc động vật theo quy định số 2002/657/EC (bài tổng hợp)“, Tạp chí KHKT Nơng nghiệp, ĐHNN I, tập V, số 1/2007, tr.24-30 Phạm Kim Đăng, Guy Degand, Phạm Hồng Ngân, Guy Maghuin-Rogister, Marie-Louise Scippo (2008), “Ứng dụng phƣơng pháp ELISA để phân tích tồn dƣ kháng sinh nhóm quynolone tơm số tỉnh ven biển khu vực phía Bắc“ Tạp chí Khoa học Phát triển, ĐHNN HN, tập VI, số 3/2008; tr.261-267 Phạm Kim Đăng (2011), Nghiên cứu ứng dụng phương pháp vi sinh vật phát dư lượng số nhóm kháng sinh tơm, Báo cáo tổng kết đề tài khoa học công nghệ cấp bộ, Hà Nội Nguyễn Minh Đức (2006), Sắc ký lỏng hiệu cao số ứng dụng vào kiểm nghiên cứu, kiểm nghiệm dược phẩm, dược liệu hợp chất tự nhiên, NXB Y học, Thành phố Hồ Chí Minh Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp (1997), Giáo trình dược lý học, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 86 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học 10 Phạm Khắc Hiếu, Lê Thị Ngọc Diệp (1999), Dược lý học thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 11 Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xn Trung (2003), Giáo trình mơn học Hóa học phân tích (phần Các phương pháp phân tích cơng cụ), Khoa Hóa học – Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN, Hà Nội 12 Hoàng Tích Huyền, Đào Văn Phán, Nguyễn Trọng Thơng (2001), Giáo trình dược lý học, NXB Y học, Hà Nội 13 Nguyễn Văn Kiệm, Phạm Kim Đăng (2009), “Ảnh hƣởng thức ăn công nghiệp đến tăng trọng, chất lƣợng, tồn dƣ kim loại nặng kháng sinh thịt lợn“, Tạp chí khoa học phát triển, ĐHNNHN, Tập VII, Số 4/2009; tr 476 – 483 14 Trƣơng Công Quyền (1972), Sơ lược kháng sinh, Phòng nghiên cứu kháng sinh trƣờng Đại học Dƣợc khoa, tr.2-5 15 Nguyễn Văn Ri (2009), Giáo trình mơn học Các phương pháp tách, Khoa Hóa học – Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN, Hà Nội 16 Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình mơn học Thống kê hóa phân tích, Khoa Hóa học – Đại học Khoa học tự nhiên – ĐHQGHN, Hà Nội 17 Phạm Hùng Việt (2005), Sắc ký khí – Cơ sở lý thuyết khả ứng dụng, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội, Hà Nội B Tiếng Anh 18 Barbara K Neuhaus, Jeffrey A Hurlbut and Walter Hammack (2002), “LC/MS/MS Analysis of Chloramphenicol in Shrimp”, FDA/ORA/DFS, No 4290 19 Bogaerts, R., Wolf, F (1980) “A standardized method for the detection of residues of antibacterial substances in fresh meat – A report of the working group of the Scientific Veterinary Commission of the European Communities concerning a proposal for a common microbiological method, the so-called EEC four-plate method”, Fleischwirtschaft, 1980, 60, pp 667-669 87 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học 20 Chukwuenweniwe J Eboka, Johnson Smart and Sunday A Adelusi (2003), “An alternative colorimetric method for the determination of chloramphenicol”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, December 2003, 2(2), pp 215-221 21 Cooper, A D., Tarbin, J A., Farrington, W H H., Shearer, G (1998) “Effects of extraction and spiking procedures on the determination of incurred residues of oxytetracycline in cattle kidney”, Food Additives and Contaminants, 15, pp 645-650 22 Fuad Al-Rimawi and Maher Kharoaf (2011), “Analysis of chloramphenicol and its related Compound 2-Amino-1-(4-nitrophenyl)propane-1,3-diol by ReversedPhase High-Performance Liquid Chromatography with UV-Detection”, Chromatography Research International, Vol 2011, Acticle ID 482308 23 James S Stuart, Heidi S Rupp and Jeffery A Hurlbut (2003), “LC/MS/MS Analysis of Chloramphenicol in Crawfish Meat”, FDA/ORA/DFS, No 4303 24 Koenen-Dierick, K., Okerman, L., Zutter, L.D., Degroodt, J M., Hoof, J.V., Srebrnik, S (1995), “A one-plate microbiological screening test for antibiotic residue testing in kidney tissue and meat: an alternative to the EEC four-plate method?”, Food Additives and Contaminants, 1995, 12, pp 77-82 25 Limian Zhao, Carol Haney Ball (2004), Determination of Chloramphenicol, Florfenicol, and Thiamphenicol in Honey Using Agilent SampliQ OPT Solid-Phase Extraction Cartridges and Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry, Applycation note, Agilent Technologies, USA 26 Maximum Residue Limit, http ://www.mrldatabase.com 27 MS/MS, Http://www.appliedbiosystems.com/service/training/ 28 Myllyniemi, A.L., Rintala, R., Backman, C., Niemi, A (1999), “Microbiological and chemical identification of antimicrobial drugs in kidney and muscle samples of bovine cattle and pigs”, Food additives & Contaminants, 16, 339-351 29 Phenicols, http://en.wikipedia.org 88 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học 30 Rebecca S Nicolich, Eduardo Werneck-Barroso, Marlice A Sípoli Marques (2006), “Food safety evaluation: Detection and confirmation of chloramphenicol in milk by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry”, Analytica Chimica Acta, 565, pp 97-102 31 Robert L Thies and Lawrence J.Fischer (1978), “High Performance LiquidChromatographic Assay for Chloramphenicol in Biological Fluids”, Clinical Chemistry, 24(5), pp 778-781 89 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học PHỤ LỤC Sắc đồ chạy dung mơi phân tích số mẫu thực tế Sắc đồ mảnh định tính định lượng CAP FF chạy dung môi MeOH Sắc đồ mảnh định tính định lượng CAP FF chạy mẫu trắng hóa chất (reagent blank) 90 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Sắc đồ mảnh định tính định lƣợng CAP FF chạy mẫu cá trắng Sắc đồ phân tích mẫu thịt lợn DAL6 (dương tính FF) 91 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học Sắc đồ phân tích mẫu tơm SHN12 (dƣơng tính FF ) Sắc đồ phân tích mẫu tơm SHN8 (dƣơng tính CAP) 92 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com Luận văn thạc sĩ Hóa học 93 Vũ Thị Ngân TIEU LUAN MOI download : skknchat@gmail.com ... PHENICOL TRONG MỘT SỐ LOẠI THỰC PHẨM TƯƠI SỐNG TRÊN ĐỊA BÀN HÀ NỘI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ (LC/ MS/ MS) Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã sớ: 604429 ḶN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng... phƣơng pháp khẳng định lý hóa nói riêng nhƣ phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ cần thiết Xuất phát từ thực tế đó, đề tài đƣợc thực nhằm tối ƣu hóa phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ LC /MS/ MS có khả xác. .. kết, sắc ký phân bố lỏng- lỏng sắc ký trao đổi ion lỏng – rắn, sắc ký hấp phụ lỏng – rắn (trong dạng đặc biệt sắc ký lực) v.v [11] Trong LC /MS, phần sắc ký lỏng đóng vai trị tách chất để đƣa vào MS