Chƣơng 2 : NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2 Phƣơng tiện nghiên cứu
2.2.1. Thiết bị, dụng cụ 2.2.1.1. Thiết bị
Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ khối phổ LC/MS/MS bao gồm: HPLC 20 AXL của Shimadzu và khối phổ ABI 5500 QQQ của Aplied Biosystem: bộ phận bơm dung mơi, bộ loại khí, bộ phận điều nhiệt và detector MS.
Cột sắc ký C18 của Water (150mm × 4,6mm × 5μm). Máy lắc vortex.
Máy đồng nhất mẫu. Máy li tâm MIKRO 22R.
Cân phân tích (có độ chính xác 0,1mg và 0,01mg). Cân kĩ thuật (có độ chính xác 0,01g).
Máy cất quay chân không Eyela.
2.2.1.2. Dụng cụ
Pipet: 1, 2, 5, 10, 20ml.
Bình định mức: 5, 10, 500, 1000ml
Ống li tâm 50ml
Cột chiết pha rắn C18 và Floresil
Vial loại 1,8ml.
Pipet pasteur.
Ống đong, phễu, giấy lọc.
Pietman loại 200µl; 1000µl và đầu cơn.
2.2.2. Dung mơi, hóa chất
Tất cả các loại hóa chất sử dụng đều thuộc loại tinh khiết phân tích Chất Chuẩn nhóm Phenicol gồm có: Chloramphenicol; Florfenicol. Etylaxetat Amoniaxetat n-Hexan Metanol Axitaxetic Nƣớc cất hai lần Axeton Axetonitril
*/ Chuẩn bị dung dịch chất chuẩn
Dung dịch chất chuẩn gốc : CAP 214ppm và FF 100ppm (hai chất chuẩn đã đƣợc pha và bảo quản ở 0 – 50C tại phịng thí nghiệm từ trƣớc).
Dung dịch chất chuẩn trung gian:
- Dung dịch CAP 10ppm và 1ppm. Cách pha: Lấy chính xác 234µl dung dịch chuẩn gốc CAP 214ppm cho vào bình định mức 5ml, định mức tới vạch bằng Metanol thu đƣợc dung dịch CAP 10ppm. Lấy chính xác 500µl dung dịch CAP 1ppm cho vào bình định mức 5ml, định mức tới vạch bằng Metanol thu đƣợc dung dịch CAP 1ppm.
- Dung dịch FF 1ppm : Lấy chính xác 50μl dung dịch chuẩn gốc FF 100ppm cho vào bình định mức 5ml, định mức tới vạch bằng Metanol thu đƣợc dung dịch FF 1ppm.
Dung dịch CAP và FF 1ppm đƣợc bảo quản ở 0 – 8oC trong tủ lạnh.
Dung dịch chất chuẩn làm việc: Hỗn hợp dung dịch CAP và FF 10ppb. Lấy chính xác 100μl dung dịch CAP 1ppm và 100μl dung dịch FF 1ppm cho vào bình định mức 10ml, định mức tới vạch bằng Metanol thu đƣợc hỗn hợp dung dịch CAP và FF 10ppb.
*/ Chuẩn bị các dung dịch cho khảo sát phƣơng pháp:
- Axít Axetic 0,1%: Hút 1ml Axít axetic băng cho vào bình định mức 1000ml (đã có sẵn một ít nƣớc), định mức tới vạch bằng nƣớc cất hai lần (đã lọc qua bộ lọc dung môi chạy sắc ký), rung siêu âm, thu đƣợc dung dịch axit Axetic 0,1%
- Dung dịch Amoniaxetat 4%: Cân 20,83g amoniaxetat tinh thể hòa tan với 500 ml nƣớc thu đƣợc dung dịch Amoniaxetat 4%.
-Dung dịch Amoniaxetat 0,1%: Cân 1.0010 g Amoniaxetat tin thể hòa tan trong bình định mức 1000ml bằng nƣớc, định mức tới vạch.