(LUẬN văn THẠC sĩ) xác định đồng thời sibutramine và một số dẫn xuất trong thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân bằng phương pháp LC MS MS​

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN DƢƠNG THỊ MAI HOA XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI SIBUTRAMINE VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE HỖ TRỢ GIẢM CÂN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC-MS/MS LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2020 download by : skknchat@gmail.com ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN DƢƠNG THỊ MAI HOA XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI SIBUTRAMINE VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE HỖ TRỢ GIẢM CÂN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC-MS/MS Chuyên ngành: Hóa Phân tích Mã số: 8440112.03 Cán hƣớng dẫn: PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo PGS TS Phạm Thị Ngọc Mai Hà Nội - 2020 download by : skknchat@gmail.com LỜI CẢM ƠN Đề tài đƣợc thực hoàn thành Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, 65 Phạm Thận Duật, Phƣờng Mai Dịch, Quận Cầu Giấy, Thành phố Hà Nội Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành gửi lời cảm ơn PGS.TS Lê Thị Hồng Hảo, PGS.TS Phạm Thị Ngọc Mai giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn giúp đỡ em trình thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn thầy cô mơn Hóa phân tích, trƣờng Đại học Khoa học tự nhiên nhiệt tình dạy dỗ, cung cấp cho em kiến thức quan trọng, cần thiết bổ ích Đồng thời, em xin cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, ThS Cao Công Khánh, phụ trách khoa Nghiên cứu phát triển, đồng nghiệp Viện tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, gia đình ngƣời thân quan tâm, động viên em suốt thời gian qua Trong trình thực đề tài, trình độ lý luận nhƣ kinh nghiệm thực tế cịn hạn chế nên đề tài khơng thể tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đƣợc góp ý q thầy bạn đồng nghiệp Xin chân thành cảm ơn! download by : skknchat@gmail.com MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu sibutramine dẫn xuất sibutramine 1.1.1 Sibutramine 1.1.2 N-desmethyl sibutramine N-didesmethyl sibutramine 1.2 Tình trạng thừa cân, béo phì số biện pháp điều trị, phịng ngừa thừa cân, béo phì 1.2.1 Tình trạng thừa cân, béo phì 1.2.2 Một số biện pháp điều trị, phòng ngừa thừa cân, béo phì 1.3 Phƣơng pháp xác định SB, DSB DDSB 1.3.1 Một số kỹ thuật xử lý mẫu 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 13 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.2.1 Khảo sát điều kiện LC-MS/MS 22 2.2.2 Khảo sát dung môi chiết, điều kiện chiết quy trình làm mẫu 22 2.2.3 Xác nhận giá trị sử dụng 23 2.2.4 Xác định hàm lƣợng sibutramine, desmethyl sibutramine didesmethyl sibutramine mẫu thực phẩm chức hỗ trợ giảm cân có mặt thị trƣờng 23 2.3 Thiết bị phân tích 23 2.4 Dụng cụ phân tích 24 download by : skknchat@gmail.com 2.5 Dung mơi, hóa chất 24 2.5.1 Dung môi 24 2.5.2 Chất chuẩn 24 2.5.3 Chuẩn bị dung dịch chuẩn 24 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.6.1 Phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC-MS/MS) 25 2.6.2 Phƣơng pháp xử lý mẫu 27 2.6.3 Phƣơng pháp thẩm định 29 2.6.4 Phƣơng pháp lấy mẫu 30 2.6.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 30 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết khảo sát điều kiện LC-MS/MS xác định đồng thời SB, DSB DDSB TPBVSK hỗ trợ giảm cân 31 3.1.1 Điều kiện MS/MS 31 3.1.2 Khảo sát điều kiện LC 32 3.2 Khảo sát trình chuẩn bị mẫu 36 3.2.1 Khảo sát dung môi chiết 36 3.2.2 Khảo sát thời gian siêu âm số lần chiết 36 3.2.3 Khảo sát quy trình làm mẫu 40 3.2.4 Khảo sát khối lƣợng than hoạt tính 42 3.3 Thẩm định phƣơng pháp 45 3.3.1 Độ đặc hiệu 45 3.3.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng (LOQ) 47 3.3.3 Xây dựng đƣờng chuẩn 49 3.3.4 Độ lặp lại độ thu hồi 51 3.4 Phân tích mẫu thực tế 52 KẾT LUẬN 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO download by : skknchat@gmail.com PHỤ LỤC Phụ lục Các điều kiện MS/MS để phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Các thơng số tối ƣu MS để phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Kết khảo sát số lần chiết Phụ lục Danh sách mẫu TPBVSK hỗ trợ giảm cân đƣợc download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt, ký hiệu Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng việt ACN Acetone nitril Acetone nitril DDSB Didesmethyl sibutramine Didesmethyl sibutramine DSB Desmethyl sibutramine Desmethyl sibutramine EtOH Ethanol Ethanol MeOH Methanol Methanol HCl Acid chlorhidric Axít clohidric KH2PO4 Potassium dihydrophotphate Kali dihydro phốt phát NH4OH Ammonium hydoxide Amoni hydoxit HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao HPTLCUV High performance thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng hiệu cao LC Liquid chromatography Sắc ký lỏng LC-EISMS LC-MS hay HPLC MS LCMS/MS Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry Sắc ký lỏng khối phổ ion hóa phun điện tử Liquid chromatography-mass spectrometry or Sắc ký lỏng khối phổ hay High performance liquid chromatography sắc ký lỏng hiệu cao mass spectrometry khối phổ Liquid chromatography with tandem mass spectrometry Sắc ký lỏng hai lần khối phổ LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantitation Giới hạn định lƣợng GCB Graphitized carbon black Than hoạt tính RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối S/N Signal to noise Tín hiệu/nhiễu SB Sibutramine Sibutramine SPE - Solid phase extraction – hydrophilic lipophilic Chiết pha rắn – cột HLB download by : skknchat@gmail.com Viết tắt, ký hiệu HLB Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng việt balance SPE SCX Solid phase extraction – strong cation exchange TPBVSK Health supplement food UHPLC Ultra-high performance liquid chromatography Chiết pha rắn – cột trao đổi cation mạnh Thực phẩm bảo vệ sức khỏe Sắc ký lỏng siêu hiệu UV Vis Ultra violet - visible Tử ngoại – khả kiến IS (V) Ion Spray Voltage Thế phun ion TEM (oC) Temperature Nhiệt độ GS1 (psi) Ion Source Gas Khí nguồn ion GS2 (psi) Ion Source Gas Khí nguồn ion EP (V) Entrance potential Thế đầu vào Curtain Gas Khí màng Collision Gas Khí va chạm CUR (psi) CAD (psi) download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Sibutramine dẫn xuất sibutramine Bảng 1.2 Tổng hợp kết số kỹ thuật xử lý mẫu 12 Bảng 2.1 Quy trình làm mẫu 28 Bảng 3.1 Các điều kiện MS/MS phân tích SB, DSB, DDSB 31 Bảng 3.2 Các thơng số tối ƣu MS để phân tích SB, DSB DDSB 32 Bảng 3.3 Chƣơng trình gradient dung mơi phân tích SB, DSB, DDSB 33 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng pha động đến diện tích píc chất phân tích 34 Bảng 3.5 Chƣơng trình dung mơi tối ƣu 34 Bảng 3.6 Kết hiệu suất thu hồi (H%) SB, DSB DDSB 36 Bảng 3.7 Hiệu suất thu hồi SB, DSB DSB sau làm 41 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng lƣợng GCB đến hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB 42 Bảng 3.9 Tỷ lệ ion sai số cho phép 45 Bảng 3.10 Khoảng đƣờng chuẩn độ chệch 50 Bảng 3.11 Độ lặp lại (RSD%) độ thu hồi (R%) SB, DSB DDSB mẫu 51 Bảng 3.12 Kết định lƣợng SB, DSB DDSB số mẫu TPBVSK 54 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo sibutramine Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo N- desmethyl sibutramine Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo N-didesmethyl sibutramine Hình 2.1 Thiết bị LC-MS/MS 5500QQQ đƣợc lựa chọn sử dụng 26 Hình 3.1 Sắc ký đồ SB (3.1a), DSB (3.1b) DDSB (3.1c) sau tối ƣu hóa chƣơng trình dung mơi pha động 35 Hình 3.2 Kết hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB viên nang cứng 37 Hình 3.3 Kết hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB viên nang mềm 37 Hình 3.4 Kết hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB trà túi lọc 38 Hình 3.5 Hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết / viên nang cứng 39 Hình 3.6 Hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết / viên nang mềm 39 Hình 3.7 Hiệu suất thu hồi SB, DSB, DDSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết / trà túi lọc 40 Hình 3.8 Dung dịch mẫu trƣớc sau sử dụng làm GCB 42 Hình 3.9 Quy trình tối ƣu xác định SB, DSB DDSB mẫu 44 Hình 3.10 Sắc đồ mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn SB 46 Hình 3.11 Sắc đồ mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn DSB 46 Hình 3.12 Sắc đồ mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn DDSB 47 Hình 3.13 Sắc đồ mẫu trắng thêm chuẩn SB (0,05 µg/kg) mẫu nang mềm 48 Hình 3.14 Sắc đồ mẫu trắng thêm chuẩn DSB (0,1 µg/kg) mẫu nang mềm 48 Hình 3.15 Sắc đồ mẫu trắng thêm chuẩn DDSB (0,1 µg/kg) 48 Hình 3.16 Đƣờng chuẩn SB 49 Hình 3.17 Đƣờng chuẩn DSB 50 Hình 3.18 Đƣờng chuẩn DDSB 50 Hình 3.19 Sắc đồ mẫu có chứa sibutramine 52 Hình 3.20 Sắc đồ mẫu chứa desmethyl sibutramine 53 download by : skknchat@gmail.com 21 Venus KPH KPH KPH 22 Vin Slim KPH KPH KPH 23 Miszz eva KPH KPH KPH 24 Change Body KPH KPH KPH 25 Betty Slim KPH KPH KPH 26 Forkilon mega KPH KPH KPH 27 Slim night 7,392 KPH KPH 28 Betty slim KPH KPH KPH 29 Đệ dáng KPH KPH KPH 30 Green data 15,088 KPH KPH Ghi chú: KPH - Không phát Qua bảng kết phân tích mẫu thực tế cho thấy có 06 mẫu viên nang cứng, 02 mẫu trà túi lọc có chứa SB, hàm lƣợng nằm khoảng 0,817 – 31,473 mg/g 03 mẫu viên nang cứng, 01 mẫu trà túi lọc chứa DSB với hàm lƣợng nằm khoảng 0,265 - 1,642 mg/g; không phát mẫu viên nang mềm chứa SB, DSB DDSB (do hàm lƣợng nằm dƣới giới hạn phát phƣơng pháp đƣợc thẩm định) Nhƣ vậy, số lƣợng mẫu chứa SB chiếm 23,3% tổng số mẫu đƣợc phân tích, số lƣợng mẫu chứa DSB chiếm 13,3% tổng số mẫu kiểm nghiệm Mẫu chứa SB tập trung vào dạng viên nang cứng Qua kết nghiên cứu cho thấy nhà sản xuất trộn thêm dẫn xuất sibutramine vào sản phẩm mình, chƣa phát đƣợc DDSB mẫu, nhƣng phƣơng pháp xây dựng có ý nghĩa trƣớc nghiên cứu, đón đầu phát dẫn xuất SB để kịp thời khuyến cáo cho ngƣời sử dụng 55 download by : skknchat@gmail.com KẾT LUẬN Sau thời gian nghiên cứu, luận văn thu đƣợc kết sau: Đã khảo sát lựa chọn đƣợc điều kiện LC-MS/MS để phân tích đồng thời SB, DSB DDSB: Cột tách sắc ký C18 (100 mm x 2,1 mm, 3,5 µm); pha động gradient kênh A: ACN, kênh B: Ammoni acetate mM acid formic 0,1%, tốc độ dòng 0,4 mL/phút Đã khảo sát đƣợc qui trình chiết loại tạp màu cho mẫu: chiết lặp lần lần 20mL MeOH, rung siêu âm 15 phút; loại tạp 25 mg than hoạt tính cho 15ml dịch chiết Đã thẩm định phƣơng pháp xác định đồng thời Sibutramine, Desmethylsibutramine Didesmethylsibutramine với kết quả:  Phƣơng pháp có tính đặc hiệu đạt yêu cầu  Khoảng đƣờng chuẩn 03 chất phân tích nằm khoảng nồng độ từ ng/mL - 100 ng/mL, với hệ số tƣơng quan cao  Giới hạn phát 0,05 µg/kg, giới hạn định lƣợng 0,15 µg/kg SB; giới hạn phát 0,1 µg/kg, giới hạn định lƣợng 0,3 µg/kg DSB DDSB 03 mẫu viên nang cứng, viên nang mềm trà túi lọc  Độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp tốt với RSD% < 15% độ thu hồi đạt đƣợc từ 84,9 đến 109,5% mức thêm chuẩn 10 µg/kg, đáp ứng yêu cầu AOAC Đã áp dụng quy trình đƣợc thẩm định để xác định hàm lƣợng sibutramine, desmethyl sibutramine didesmethyl sibutramine trộn trái phép 30 mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân địa bàn Hà Nội Kết cho thấy có 06/ 21 mẫu viên nang cứng, 02/7 mẫu trà túi lọc có chứa sibutramine, hàm lƣợng nằm khoảng 0,817 – 31,473 mg/g, 03/21 mẫu viên nang cứng, 01/7 mẫu trà túi lọc chứa desmethyl sibutramine với hàm lƣợng nằm khoảng 0,265 - 1,642 mg/g; không phát mẫu viên nang mềm chứa sibutramine, desmethyl sibutramine didesmethyl sibutramine 56 download by : skknchat@gmail.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Viện kiểm nghiệm ATVSTP Quốc Gia (2010), "Thẩm định phương pháp phân tích hố học vi sinh vật", Hà Nội, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Xuân Trung, Nguyễn Văn Ri (2003), ―Các phương pháp phân tích cơng cụ”, Nhà Xuất Bản Đại Học Quốc Gia Hà Nội Tài liệu tiếng Anh Juan M Aceves-Hernández, Inés Nicolás Vázquez, Jaime Hinojosa-Torres, Guillermo Penieres Carrillo, Gabriel Arroyo Razo, René Miranda Ruvalcaba (2013), "Sibutramine characterization and solubility, a theoretical study", Journal of Molecular Structure, 1038, pp 163-169 European Medicines Agency (2010), "European Medicines Agency recommends suspension of marketing authorisation for sibutramine", 14(2), pp 11-13 Shigeki Akamatsu Takao Mitsuhashi (2013), "Simultaneous determination of pharmaceutical components in dietary supplements for weight loss by capillary electrophoresis tandem mass spectrometry", Drug testing and analysis, 6, pp 15-23 Etil Ariburnu, Mehmet Fazli Uludag, Huseyin Yalcinkaya, Erdem Yesilada (2012), "Comparative determination of sibutramine as an adulterant in natural slimming products by HPLC and HPTLC densitometry", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 64, pp 77-81 J Bhatt, B Shah, S Kambli, G Subbaiah, S Singh, S Ameta (2007), "Rapid and sensitive method for the determination of sibutramine active metabolites in human plasma by reversed-phase liquid chromatographytandem mass spectroscopy", J Chromatogr Sci, 45 (2), pp 91-96 download by : skknchat@gmail.com Maciej J Bogusz, Huda Hassan, Eid Al-Enazi, Zuhour Ibrahim, Mohammed Al-Tufail (2006), "Application of LC–ESI–MS–MS for detection of synthetic adulterants in herbal remedies", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 41(2), pp 554-564 J Chen, W Lu, Q Zhang, X Jiang (2003), "Determination of the active metabolite of sibutramine by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 785(2), pp 197-203 10 Y Chen, L Zhao, F Lu, Y Yu, Y Chai, Y Wu (2009), "Determination of synthetic drugs used to adulterate botanical dietary supplements using QTRAP LC-MS/MS", Food Additives and Contaminants, 26(5), pp 595603 11 Marlus Chorilli, Rudy Bonfilio, Renata Chicarelli, Herida Salgado (2011), "Development and validation of an analytical method by RP-HPLC for quantification of sibutramine hydrochloride in pharmaceutical capsules", Anal Methods, 3, pp 985-990 12 Li Ding, Xinyu Hao, Xin Huang, Shengqiang Zhang (2003), "Simultaneous determination of sibutramine and its N-desmethyl metabolites in human plasma by liquid chromatography–electrospray ionization–mass spectrometry: Method and clinical applications", Analytica chimica acta, 492(1-2), pp 241-248 13 FDA (2010),"The FDA August 2010 drugs safety update", Journal of Pharmaceutical Analysis, pp 152-155 14 Stanley D Glick, Renee E Haskew, Isabelle M Maisonneuve, Jeffrey N Carlson, Thomas P Jerussi (2000), "Enantioselective behavioral effects of sibutramine metabolites", European journal of pharmacology, 397(1), pp 93-102 15 Hayun Hayun, Baitha P Maggadani, Nurul Amalina (2016), "Determination of sibutramine adulterated in herbal slimming products using TLC densitometric method", Indonesian Journal of Pharmacy, 27(1), p 15 download by : skknchat@gmail.com 16 Ziqiang Huang, Song Xiao, Dan Luo, Bo Chen, Shouzhuo Yao (2008), "Simultaneous determination of sibutramine and N-di-desmethylsibutramine in dietary supplements for weight control by HPLC—ESI-MS", Journal of chromatographic science, 46(8), pp 707-711 17 Julia Jung, Maren Hermanns-Clausen, Wolfgang Weinmann (2006), "Anorectic sibutramine detected in a Chinese herbal drug for weight loss", Forensic science international, 161(2-3), pp 221-222 18 Tarita Kamardi, Irda Fidrianny, A Musadad (2016), "Development of analytical method for identification of sibutramine hydrochloride in traditional medicine using solid phase extraction: High-performance liquid chromatography", Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 9, pp 201-209 19 S Kanan, IA Abu-Yousef, C Gunasekar, N Abdo, S Narasimhan (2009), "Detection and quantification of synthetic drugs in herbal slimming formula", Eur J Sci Res, 34, pp 348-357 20 W Kang, K Bae, K Noh (2010), "Enantioselective determination of sibutramine and its active metabolites in human plasma", J Pharm Biomed Anal, 51(1), pp 264-267 21 Marjan Khazan, Mehdi Hedayati, Farzad Kobarfard, Sahar Askari, Fereidoun Azizi (2014), "Identification and determination of synthetic pharmaceuticals as adulterants in eight common herbal weight loss supplements", Iranian Red Crescent Medical Journal, 16(3), pp 17-21 22 S H Kim, J Lee, T Yoon, J Choi, D Choi, D Kim, S W Kwon (2009), "Simultaneous determination of anti-diabetes/anti-obesity drugs by LC/PDA, and targeted analysis of sibutramine analog in dietary supplements by LC/MS/MS", Biomed Chromatogr, 23(12), pp 1259-1265 23 Kuo-Chih Lai, Yi-Chu Liu, Mu-Chang Tseng, Yun-Lian Lin, Jer-Huei Lin (2007), "Isolation and identification of a sibutramine analogue in a healthy food for weight loss", Journal of Food and Drug Analysis, 15(1), pp.19-22 download by : skknchat@gmail.com 24 Jianhui Li, Zhaohui Zhang, Xin Liu, Hua Yan, Shen Han, Haiyan Zhang, Shan Zhang, Jia Cheng (2014), "Analysis of Fourteen beta-Agonists in Weight-Reducing Dietary Supplements Using QuEChERS-Based Extraction Followed by High Resolution UHPLC-MS", Food Analytical Methods, 7, pp 25-28 25 Yang Li, Feng Xue, Yuan Wang, Yong Xue, Cheng-Jun Sun (2011), "Simultaneous determination of seven adulterants in slimming functional foods by high performance capillary electrophoresis", Chin J Anal Chem, 39, pp 1716-1720 26 Daniela F Maluf, Paulo V Farago, Sandra MW Barreira, Carlos F Pedroso, Roberto Pontarolo (2007), "Validation of an analytical method for determination of sibutramine hydrochloride monohydrate in capsules by UVvis spectrophotometry", Latin American Journal of Pharmacy, 26(6), p 909 27 Caroline Mathon, Anita Ankli, Eike Reich, Stefan Bieri, Philippe Christen (2014), "Screening and determination of sibutramine in adulterated herbal slimming supplements by HPTLC-UV densitometry", Food Additives & Contaminants: Part A, 31(1), pp 15-20 28 Lung National Heart, and Blood Institute (1998), "Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults", National Heart, Lung, and Blood Institute, 6, pp 29-31 29 Lung National Heart, and Blood Institute (2013), "Managing Overweight and Obesity in Adults: Systematic Evidence Review from the Obesity Expert Panel", National Heart, Lung, and Blood Institute, 12, pp 37-39 30 World Health Organization (2000), "Obesity: preventing and managing the global epidemic", World Health Organization, 4, pp 12-14 31 Panadda Phattanawasin, Uthai Sotanaphun, Tasamaporn Sukwattanasinit, Jariya Akkarawaranthorn, Sarunyaporn Kitchaiya (2012), "Quantitative determination of sibutramine in adulterated herbal slimming formulations by TLC-image analysis method", Forensic Science International, 219(1-3), pp 96-100 download by : skknchat@gmail.com 32 Venkata Suresh Ponnuru, BR Challa, RamaRao Nadendla (2012), "Quantification of sibutramine and its two metabolites in human plasma by LC–ESI-MS/MS and its application in a bioequivalence study", Journal of pharmaceutical analysis, 2(4), pp 249-257 33 T Radhakrishna, Ch Lakshmi Narayana, D Sreenivas Rao, K Vyas, G Om Reddy (2000), "LC method for the determination of assay and purity of sibutramine hydrochloride and its enantiomers by chiral chromatography", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 22(4), pp 627-639 34 Herve Rebiere, Pauline Guinot, Corinne Civade, P-A Bonnet, Alain Nicolas (2012), "Detection of hazardous weight-loss substances in adulterated slimming chromatography with formulations using ultra-high-pressure diode-array detection", Food liquid Additives & Contaminants: Part A, 29 (2), pp 161-171 35 S H Roh, Y P Kang, S Park, Y Huh, J Lee, J H Park, D Kim, S W Kwon (2011), "Determination of tadalafil and N-desmethylsibutramine in health and dietary supplements using ultra-performance liquid chromatography (UPLC) coupled with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry (Q-TOF MS)", Food Addit Contam Part A Chem Anal Control Expo Risk Assess, 28(11), pp 1475-82 36 Sabina Strano‐Rossi, Cristiana Colamonici, Francesco Botrè (2007), "Detection of sibutramine administration: a gas chromatography/mass spectrometry study of the main urinary metabolites", Rapid Communications in Mass Spectrometry: An International Journal Devoted to the Rapid Dissemination of Up‐to‐the‐Minute Research in Mass Spectrometry, 21(2), pp 79-88 37 A Suthar, S Dubey, Sanjay Patel (2009), "A Validated Specific Reverse Phase Liquid Chromatographic Method for the estimation of Sibutramine Hydrochloride Monohydrate in bulk drug and capsule dosage forms", International Journal of ChemTech Research, 1, pp 57-59 download by : skknchat@gmail.com 38 Dan Wang, Ranru Man, Ming Shu, Huitao Liu, Yuan Gao, Feng Luan (2016), "Detection of sibutramine and phenolphthalein in functional foods using capillary electrophoresis", Analytical Methods, 8(3), pp 621-626 39 H Wang, Y Wu, Y Zhao, W Sun, L Ding, B Guo, B Chen (2012), "Rapid screening of illicit additives in weight loss dietary supplements with desorption corona beam ionisation (DCBI) mass spectrometry", Food Additives & Contaminants: Part A, 29(8), pp 1194-1201 40 Juan Wang, Bo Chen, Shouzhuo Yao (2008), "Analysis of six synthetic adulterants in herbal weight-reducing dietary supplements by LC electrospray ionization-MS", Food additives and contaminants, 25(7), pp 822-830 41 Helena M Yano, Fernanda F Farias, Marcelo B Del Bianco, Luz M Trujillo (2013), "Determination of the sibutramine content of dietary supplements using LC-ESI-MS/MS", Latin American Journal of Pharmacy, 32(8), pp 1164-1169 42 Zhou Yu, Qiang Wei, Qingsheng Fan, Chunhua Wan (2010), "A simple and convenient method for simultaneous determination of four major species of illegal additives in slimming health food", Journal of liquid chromatography & related technologies, 33(4), pp 452-461 43 YP Yuen, CK Lai, WT Poon, SW Ng, Albert YW Chan, Tony WL Mak (2007), "Adulteration of over-the-counter slimming products with pharmaceutical analogues-an emerging threat", Hong Kong Medical Journal, 13(3), p 216 44 Peng Zou, Sharon Sze‐Yin Oh, Kin‐Har Kiang, Min‐Yong Low, Bosco Chen Bloodworth (2007), "Detection of sibutramine, its two metabolites and one analogue in a herbal product for weight loss by liquid chromatography triple quadrupole mass spectrometry and time‐of‐flight mass spectrometry", Rapid Communications in Mass Spectrometry: An International Journal Devoted to the Rapid Dissemination of Up‐to‐the‐Minute Research in Mass Spectrometry, 21( 4), pp 614-618 download by : skknchat@gmail.com download by : skknchat@gmail.com PHỤ LỤC Phụ lục Các điều kiện MS/MS để phân tích SB, DSB DDSB PL1 Bảng thông số điều kiện MS/MS phân tích SB, DSB DDSB Phụ lục Các thơng số tối ƣu MS để phân tích SB, DSB DDSB PL2 Bảng thông số tối ƣu MS thu đƣợc để phân tích SB, DSB DDSB download by : skknchat@gmail.com Phụ lục Kết khảo sát số lần chiết PL3.1 Kết độ thu hồi SB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết PL3.2 Kết độ thu hồi DSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết download by : skknchat@gmail.com PL3.3 Kết độ thu hồi DDSB sau lần chiết, lần chiết, lần chiết Bảng PL 3.1 Độ thu hồi SB, DSB, DDSB viên nang cứng Số lần chiết SB DSB DDSB Chiết lần 60,4 73,4 70,1 Chiết lần 89,3 82,2 82,7 Chiết lần 91,5 85,1 82,9 Bảng PL3.2 Độ thu hồi SB, DSB, DDSB viên nang mềm Số lần chiết SB DSB DDSB Chiết lần 69,8 73,8 72,1 Chiết lần 86,5 82,3 79,3 Chiết lần 88,5 84,5 81,2 download by : skknchat@gmail.com Bảng PL4.3 Độ thu hồi SB, DSB, DDSB trà túi lọc Số lần chiết SB DSB DDSB Chiết lần 69,8 73,8 72,1 Chiết lần 86,5 82,3 79,3 Chiết lần 88,5 84,5 81,2 download by : skknchat@gmail.com Phụ lục Danh sách mẫu TPBVSK hỗ trợ giảm cân đƣợc Tên sản phẩm Số lô, hạn dùng Slimutea 160118 Trà Đại Gia 181902 FA2 200112 Hera + 10218 Tana porn 11022019 Fasmine Tea 23062019 Trà giảm cân Kingphar slim 200419 Giảm cân PV 10210 Change Body 20918 10 Viên uống giảm cân Sevendays 20170318 11 Slim Phục Linh 20180203 12 Minhon 10 130920 13 Giarm béo Phục Linh Sao Việt 20181219 Áo Đình 110620 15 New Lishow 45 viên 20101 16 New Lishow 24 viên 200611 17 Slimatic collagen 18092019 18 EVA 20180605 19 Super model 190408 20 DETOX slimming 20181106 Venus 210808 Vin Slim 20181103 STT 14 21 22 Quy cách Trà Viên nang mềm Viên nang cứng download by : skknchat@gmail.com Tên sản phẩm Số lô, hạn dùng 23 Miszz eva 200307 24 Change Body 20918 25 Betty Slim 2019061 26 Forkilon mega 11017 27 Slim night 200223 28 Betty slim 1909132 29 Đệ dáng 20181226 30 Green data 3062019 STT Quy cách download by : skknchat@gmail.com ... ? ?Xác định đồng thời sibutramine số dẫn xuất thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân phương pháp LC- MS/ MS‖ đƣợc thực với mục tiêu nhƣ sau: Xây dựng thẩm định phƣơng pháp xác định đồng thời sibutramine. .. desmethyl sibutramine didesmethyl sibutramine thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân LC- MS/ MS Ứng dụng phƣơng pháp để phát định lƣợng SB số dẫn xuất SB thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân. .. HOA XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI SIBUTRAMINE VÀ MỘT SỐ DẪN XUẤT TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE HỖ TRỢ GIẢM CÂN BẰNG PHƢƠNG PHÁP LC- MS/ MS Chun ngành: Hóa Phân tích Mã số: 8440112.03 Cán hƣớng dẫn: PGS.TS