Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG MẠNH HÙNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ TERPEN LACTON TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE CHỨA GINKGO BILOBA BẰNG SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ HAI LẦN (LC- MS/MS) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI - 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG MẠNH HÙNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ TERPEN LACTON TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE CHỨA GINKGO BILOBA BẰNG SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ HAI LẦN (LC- MS/MS) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Đặng Thị Ngọc Lan, Trường Đại Học Dược Hà Nội TS Trần Cao Sơn, Viện Kiểm Nghiệm An Toàn Vệ Sinh Thực Phẩm Quốc Gia HÀ NỘI - 2022 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc tới TS Đặng Thị Ngọc Lan TS Trần Cao Sơn tâm huyết tận tình hướng dẫn, bảo tơi suốt thời gian thực hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành tới TS Đặng Thị Ngọc Lan cho lời khuyên quý báu, dành nhiều thời gian tạo điều kiện tối đa giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Trần Cao Sơn, DS Vũ Thị Thanh An anh chị, bạn khoa Nghiên cứu Phát triển – Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia tạo điều kiện nhiệt tình giúp đỡ thời gian thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám Hiệu, phịng Sau đại học, mơn Hóa phân tích-Độc chất – trường Đại học Dược Hà Nội, thầy cô giảng dạy giúp đỡ q trình học tập trường Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè – người đồng hành không thể thiếu học tập sống ln động viên khích lệ ngày qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Học viên Hoàng Mạnh Hùng MỤC LỤC MỤC LỤC - DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT - DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU - DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ - ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan dược liệu Bạch 1.1.1 Nguồn gốc đặc điểm thực vật học 1.1.2 Công dụng - Tác dụng của Bạch 1.1.3 Thành phần 1.2.Nhóm Ginkgo terpen lacton Bạch 1.2.1 1.2.2 1.2.3 Đặc điểm cấu trúc Nguồn gốc Tác dụng dược lý của nhóm ginkgo terpen lacton 1.3.Tổng quan phương pháp xác định hàm lượng nhóm Terpen lacton 1.4 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC – MS) 15 1.4.1 Nguyên tắc chung 15 1.4.2 Sơ đồ cấu tạo 16 1.4.3 Detector khối phổ ba tứ cực (Triple Quadrupole Detector) 17 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Chất chuẩn .19 2.2.2 Hóa chất, dung môi 19 2.2.3 Thiết bị, dụng cụ .19 2.3 Phương pháp nghiên cứu 20 2.3.1 Quy trình xử lý mẫu 20 2.3.2 Khảo sát điều kiện LC-MS/MS 20 2.3.3 Khảo sát điều kiện xử lý mẫu 21 2.3.4 Thẩm định phương pháp 21 2.4 Ứng dụng phương pháp để xác định hàm lượng Terpen lacton thực phẩm bảo vệ sức khỏe 22 2.5 Phương pháp xử lý số liệu 22 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 23 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích 23 3.1.1 Kết khảo sát điều kiện khối phổ 23 3.1.1.1 Khảo sát lựa chọn chế độ phân tích .23 3.1.1.2 Khảo sát lựa chọn điều kiện LC 24 3.1.1.3 Kháo sát ảnh hưởng của mẫu 26 3.1.2 Kết khảo sát điều kiện xử lý mẫu .27 3.1.2.1 Khảo sát dung môi chiết mẫu .27 3.1.2.2 Khảo sát số lần chiết mẫu 28 3.1.2.3 Khảo sát lựa chọn dung môi làm mẫu, làm giàu mẫu chiết 29 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 31 3.2.1 Độ đặc hiệu 31 3.2.1.1 Thời gian lưu 32 3.2.1.2 Số điểm IP 35 3.2.1.3 Tỷ lệ ion .35 3.2.2 Khoảng tuyến tính đường chuẩn 36 3.2.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 40 3.2.4 Độ lặp lại – Độ tái lặp .41 3.2.5 Độ thu hồi 50 3.3 Kết phân tích mẫu thực tế 58 Chương BÀN LUẬN 60 4.1 Xây dựng quy trình xử lý mẫu 60 4.2 Xây dựng phương pháp phân tích LC-MS/MS 60 4.3 Thẩm định phương pháp 60 4.4 Ứng dụng 61 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .62 Kết luận 62 Kiến nghị 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu AOAC CP Tên tiếng Anh Association of Official Hiệp hội Hợp tác phân tích Analytical Collaboration thức Chinese Pharmacopoeia Dược điển Trung Quốc DĐVN V ELSD GC-FID HPLC-FLD Dược điển Việt Nam V Evaporative Light Scattering Detector Detector tán xạ bay Gas chromatography Flame Sắc kí khí detector ion hóa Ionization Detector lửa High Performance Liquid Chromatography - Fluorescence Sắc ký lỏng hiệu cao - detector HPAEC-PAD Tên tiếng Việt High Performance Anion Exchange Chromatography Pulsed Amperometric Detection detector huỳnh quang Sắc ký trao đổi anion hiệu cao - detector điện hóa IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry Liên minh Quốc tế Hóa học Hóa học ứng dụng LC-MS/MS Liquid Chromatography – Mass Spectrometry Sắc ký lỏng khối phổ hai lần LOD Limit of Detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng MRM Multiple Reaction Monitoring Chế độ theo dõi đa phản ứng TLC Thin Layer Chromatography Sắc ký mỏng Thực phẩm bảo vệ sức khỏe TPBVSK USP UV-VIS United States Pharmacopoeia Dược điển Hoa Kỳ Ultraviolet Visible Spectrometry Quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU STT Bảng Nội dung Trang Bảng 1.1 Một số phương pháp xác định ginkgo terpen lacton Bảng 3.1 Điều kiện phân mảnh của ginkgo terpenlacton ở chế độ ESI (+) 24 Bảng 3.2 Điều kiện phân tích ginkgo terpen lacton 26 Bảng 3.3 Kết khảo sát dung môi chiết 29 Bảng 3.4 Kết khảo sát đường chuẩn Bilobalid 37 Bảng 3.5 Kết khảo sát đường chuẩn Ginkgolid A 38 Bảng 3.6 Kết khảo sát đường chuẩn Ginkgolid B 39 Bảng 3.7 Kết khảo sát đường chuẩn Ginkgolid C 40 Bảng 3.8 Kết khảo sát LOD LOQ 41 10 Bảng 3.9 Độ thu hồi Bilobalid mẫu 51 11 Bảng 3.10 Độ thu hồi Ginkgolid A mẫu 52 12 Bảng 3.11 Độ thu hồi Ginkgolid B mẫu 55 13 Bảng 3.12 Độ thu hồi Ginkgolid C mẫu 57 14 Bảng 3.13 Kết phân tích mẫu thực tế 59 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Nội dung STT Hình Trang Hình 1.1 Bộ phận dùng của Bạch Hình 1.2 Cấu trúc flavonon glycosid Ginkgo biloba Hình 1.3 Cấu trúc nhóm Terpen lacton Ginkgo biloba Hình 1.4 Cấu trúc Ginkgolic acid Hình 1.5 Sơ đồ cấu tạo của hệ thống sắc ký lỏng – khối phổ 16 Hình 1.6 Sơ đồ cấu tạo detector khối phổ ba tứ cực 18 Sắc ký đồ tối ưu hóa ginkgo terpen lacton Hình 3.1 (Bilobalid, Ginkgolid A, Ginkgolid B, Ginkgolid C) chế độ ESI (+) 25 Hình 3.2 Kết khảo sát LC 26 Hình 3.3 Kết khảo sát mẫu 28 10 Hình 3.4 Dịch chiết của mẫu GT.VNC.01 dung mơi 28 11 Hình 3.5 Kết khảo sát số lần chiết 30 12 Hình 3.6 Kết khảo sát dung môi làm 31 13 Hình 3.7 Đường chuẩn Bilobalid 38 14 Hình 3.8 Đường chuẩn Ginkgolid A 39 15 Hình 3.9 Đường chuẩn Ginkgolid B 40 16 Hình 3.10 Đường chuẩn Ginkgolid C 41 17 Hình 3.11 Sắc ký đồ Bilobalid, Ginkgolid A, Ginkgolid B, Ginkgolid C LOQ mẫu lỏng 42 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo Nghị định số 15/2018/NĐ-CP ngày 02/02/2018 của Chính phủ quy định chi tiết thi hành số điều của Luật an toàn thực phẩm, Thực phẩm bảo vệ sức khỏe (Health Supplement) sản phẩm dùng để bổ sung vào chế độ ăn uống hàng ngày nhằm trì, tăng cường, cải thiện chức của thể người, giảm nguy mắc bệnh Theo ước tính, có khoảng 3000 lồi thực vật có cơng thức của 55.000 sản phẩm thực phẩm bảo vệ sức khỏe sử dụng thị trường Thực phẩm bảo vệ sức khỏe (TPBVSK) có thể sản xuất ở nhiều dạng, bao gồm viên nén, viên nang, chất lỏng, viên nang mềm bột Thực phẩm bảo vệ sức khỏe sử dụng rộng rãi ở lứa tuổi trải khắp quốc gia toàn giới Hiện nước phát triển có xu hướng ưa chuộng dùng TPBVSK Chính vậy, có nhiều cơng ty sản xuất thuốc chuyển sang sản xuất TPBVSK tìm đối tượng tiêu thụ lớn Thị trường TPBVSK phát triển nhanh Năm 2000 có khoảng 60 sản phẩm của 15 sở nhập có tới 3.600 doanh nghiệp sản xuất kinh doanh, với 57% sản phẩm sản xuất nước 90% nhà thuốc bán TPBVSK Đi với tăng trưởng lo ngại nguy tiềm ẩn sức khỏe cộng đồng liên quan đến nồng độ, thành phần chất gây ô nhiễm của thực phẩm bảo vệ sức khỏe tương tác của chúng với thuốc hoặc với chế độ ăn uống khác, ngày gia tăng Chính thế, phương pháp phân tích chất lượng thực phẩm bảo vệ sức khỏe vấn đề quan trọng cần tiến hành cụ thể nhóm đối tượng mẫu Tại Việt Nam, dược liệu Ginkgo biloba, hay cịn gọi Bạch quả, khơng cịn dược liệu xa lạ thuốc cổ truyền với tác dụng điều hịa khí huyết, tăng cường cải thiện tuần hoàn máu não Các tác dụng dược lý của Bạch phải kể đến cải thiện tuần hoàn máu não tuần hoàn ngoại biên, cải thiện chức tiền đình thính giác, hoạt hóa tính của tiểu cầu, chống loại bỏ gốc tự Vì lợi ích mà bạch đem đến, có nhiều loại sản phẩm thực phẩm bảo vệ sức khỏe có chứa dược liệu bạch hoặc cao Bạch cung cấp thị trường Các nghiên cứu thành phần hoạt chất bạch bao gồm flavonon glycosid (rutin, chlorogenic acid, quercetin, kaempferol, Isorhamnetin,…), terpen lacton (Ginkgolid A, Ginkgolid B, Ginkgolid C, Bilobalid,…) Hiện nay, để kiểm tra chất lượng của sản phẩm có chứa Bạch quả, tiêu chất lượng chủ yếu lựa chọn kiểm soát nhóm flavonon glycosid Đây cách thức đơn giản, dễ thực hiện, nhiên, có thể dễ dàng chiết tách phát nên dễ bị nhầm lẫn nhóm flavonon glycosid có mặt nhiều loại dược liệu khác Ngoài ra, hệ thống Dược điển USP [8], CP [19] DĐVN V [1], nhóm hoạt chất flavonon glycosid, nhóm hoạt chất Terpen lacton cịn lại đưa tiêu chí để đánh giá chất lượng của dược liệu Bạch Tuy nhiên, phần lớn sản phẩm TPBVSK Việt Nam thường chứa nhiều thành phần dược liệu khác nhau, việc thực phân tích nhóm chất cần nghiên cứu, đánh giá sâu hơn, phù hợp với đối tượng phân tích Chính thế, đề tài “Nghiên cứu xác định đồng thời số Terpen lacton thực phẩm bảo vệ sức khỏe chứa Ginkgo biloba sắc ký lỏng khối phổ hai lần” thực với mục tiêu chính: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng đồng thời số Terpen lacton TPBVSK chứa Ginkgo biloba LC-MS/MS Áp dụng phương pháp để phân tích mẫu TPBVSK chứa Ginkgo biloba thị trường ... HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG MẠNH HÙNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ TERPEN LACTON TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE CHỨA GINKGO BILOBA BẰNG SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ HAI LẦN (LC- MS/MS) LUẬN VĂN THẠC... nghiên cứu, đánh giá sâu hơn, phù hợp với đối tượng phân tích Chính thế, đề tài ? ?Nghiên cứu xác định đồng thời số Terpen lacton thực phẩm bảo vệ sức khỏe chứa Ginkgo biloba sắc ký lỏng khối phổ. .. MS nghiên cứu thực hiện, định sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ để xây dựng thẩm định phương pháp định lượng số ginkgo terpen lacton thực phẩm bảo vệ sức khỏe 1.4 Tổng quan phương pháp sắc
Ngày đăng: 14/08/2022, 13:20
Xem thêm:
