Xây dựng quy trình định lượng đồng thời naringin và hesperidin trong quả bưởi non bằng sắc ký lỏng khối phổ hai lần (lc msms)

TẠP CHÍ Y häc viƯt nam tẬP 523 - th¸ng - sè - 2023 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI NARINGIN VÀ HESPERIDIN TRONG QUẢ BƯỞI NON BẰNG SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ HAI LẦN (LC-MS/MS) Hoàng Anh Việt1, Phạm Ngọc Liên1, Nguyễn Ngọc Phương Diễm2, Diệp Hoàng Vũ2, Trương Minh Nhựt1, Nguyễn Hữu Lạc Thủy1 TĨM TẮT 52 Mục tiêu: Xây dựng quy trình định lượng đồng thời naringin hesperidin bưởi non LC-MS/MS Đối tượng phương pháp: Naringin hesperidin bưởi non Quy trình định lượng xây dựng thẩm định phương pháp sắc ký lỏng đầu dò MS/MS Kết quả: Điều kiện sắc ký: cột C8, pha động methanol – acid acetic 0,1% (50 : 50), tốc độ dòng 0,6 ml/phút, nhiệt độ cột 30oC, nhiệt độ buồng tiêm mẫu 10oC, thể tích tiêm mẫu μl phát đầu dò MS/MS chế độ ESI (-), MRM Quy trình định lượng đạt tiêu thẩm định theo hướng dẫn ICH Kết luận: Có thể ứng dụng quy trình để xác định hàm lượng naringin hesperidin bưởi non Từ khóa: naringin, hesperidin, bưởi non, LCMS/MS SUMMARY STIMULTANEOUS DETERMINATION OF NARINGIN AND HESPERIDIN IN YOUNG POMELO POWDER BY LIQUID CHROMATOGRAPHY TANDEM MASS SPECTROMETRY (LC-MS/MS) Objectives: Stimultaneous determination the content of naringin and hesperidin in young pomelo Subjects and Methods: naringin an hesperidin in young pomelo The qualitative procedure by HPLCMS/MS was built and validated Results: Chromatographic conditions: C8 column, mobile phase methanol – acetic acid 0.1 % (50 : 50), flow rate 0.6 ml/min, column temperature 30 oC, autosampler temperature 10oC, injection volume μl, and MS/MS detector with ESI (-), MRM mode Validation results proved the proposed method was suitable for determining the content of naringin and hesperidin in young pomelo powder Conclusion: The procedure can be applied for stimultaneous determination the content of naringin and hesperidin in young pomelo Keywords: naringin, hesperidin, young pomelo, LC-MS/MS 1Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh 2Viện Chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Hữu Lạc Thủy Email: nguyenhuulacthuy@ump.edu.vn Ngày nhận bài: 01.12.2022 Ngày phản biện khoa học: 9.01.2023 Ngày duyệt bài: 6.2.2023 I ĐẶT VẤN ĐỀ Cây bưởi (Citrus maxima (L) Osbeck, họ Cam quýt Rutaceae) nhiều loại ăn trái trồng nhiều Việt Nam có sản lượng lớn số tỉnh thành Vĩnh Long, Bến Tre, Đồng Nai, Phú Thọ,… Các thành phần hóa học bưởi tinh dầu, coumarin, limonoid, flavonoid,… [1] thể nhiều tác dụng sinh học quý chống oxy hóa, kháng viêm, hạ lipid máu,… [3,5,8] Bưởi non non, chưa trưởng thành bưởi Trong bưởi non, naringin thành phần flavonoid chiếm tỷ lệ cao cao trưởng thành [7] Ngồi naringin hesperidin xác định có vỏ bưởi non, nhiên qua số kết thực nghiệm cho thấy hàm lượng hesperidin thấp thay đổi theo tháng tuổi bưởi Với hàm lượng hesperidin thấp nên để khảo sát đồng thời hàm lượng hoạt chất bưởi non, phương pháp LC-MS/MS xây dựng thẩm định Kết nghiên cứu ứng dụng khảo sát động thái tích luỹ naringin hesperidin bưởi non II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu - Nguyên liệu nghiên cứu: bưởi non, sau thu hái rửa sạch, cắt lát, phơi khơ xay thành bột thơ có độ ẩm xác định Bảo quản túi nhựa lọ thuỷ tinh chống ẩm Hàm ẩm xác định xây dựng phương pháp - Đối tượng nghiên cứu: naringin hesperidin bưởi non - Dung mơi, hóa chất: methanol LC-MS (J.T.Baker, Mỹ); acid acetic băng PA (Merck, Đức), nước dùng cho sắc ký lỏng, naringin (98,6 %, số lô: LC61115, AK Scientific, Mỹ); hesperidin (88,0 %, số lô: QT214 050321, Viện Kiểm nghiệm thuốc Thành phố Hồ Chí Minh) 2.2 Phương pháp nghiên cứu Quy trình xử lý mẫu: cân lượng mẫu thử bột bưởi non vào bình định mức 100 ml, thêm 60 ml methanol, chiết bể siêu âm 30 phút, để nguội điền đến vạch methanol, lắc Ly tâm 4000 vòng/phút phút, lấy 201 vietnam medical journal n02 - FEBRUARY - 2023 xác ml dịch cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung methanol đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,22 μm 2.2.1 Khảo sát điều kiện khối phổ Tiêm trực tiếp dung dịch naringin μg/ml hesperidin μg/ml vào hệ thống LC-MS/MS với nguồn ion hóa phun điện tử ESI âm Chọn chế độ khảo sát tự động để bắn phá ion phân tử thành ion chọn ion có cường độ cao cho q trình định lượng Tối ưu hóa Q1, lượng bắn phá (CE) Q3 tự động theo phần mềm LabSolutions thiết bị 2.2.2 Khảo sát điều kiện sắc ký Điều kiện sắc ký dự kiến: nhiệt độ cột 30 oC; nhiệt độ buồng tiêm mẫu 10 oC; thể tích tiêm mẫu μl tốc độ dòng 0,6 ml/phút Khảo sát điều kiện ảnh hưởng đến q trình phân tích cột sắc ký, thành phần tỷ lệ pha động: cột sắc ký: C8 C18; pha động: acetonitril – acid acetic 0,1 % methanol – acid acetic 0,1 % (50 : 50) 2.2.3 Thẩm định quy trình định lượng Từ điều kiện khối phổ điều kiện sắc ký lựa chọn, tiến hành thẩm định quy trình định lượng theo hướng dẫn ICH AOAC [2, 4] III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Điều kiện khối phổ Thiết bị khối phổ ba tứ cực với nguồn ion hóa phun điện tử, chế độ ion âm sử dụng để khảo sát điều kiện ion mẹ ion tối ưu Kết trình bày Bảng Bảng Các ion phân tử ion phân tích khối phổ Chất Mảnh mẹ Mảnh phân tích (m/z) (m/z) Naringin 579 271 Hesperidin 609 301 Q1 (V) 28 28 CE (V) 35 29 Q3 (V) 19 22 ion (hình bên phải) naringin Inten (x1,000,000) 7.0 6.0 5.0 609.30 4.0 3.0 2.0 610.30 1.0 131.00 100.90 116.90 0.0 100 741.20 611.35645.25 655.35 200 300 400 500 600 700 800 900 m/z 400 500 600 700 800 900 m/z Inten (x1,000,000) 2.5 2.0 1.5 301.15 1.0 0.5 0.0 100 200 300 Hình Phổ đồ [M-H]- ion mẹ (hình bên trái), ion (hình bên phải) hesperidin Các thơng số phân tích khối phổ khác tối ưu bao gồm: tốc độ khí phun 3,0 l/phút, tốc độ khí khơ 15,0 l/phút, nhiệt độ phận desolvation line 250 oC, nhiệt độ phận heating block 400 oC, giao diện 4500 V 3.2 Điều kiện sắc ký - Cột sắc ký khảo sát: Nucleoshell C18 (150 x 4,6 mm; 2,7 μm) Nucleodur C EC (150 x 4,6 mm; μm) Cột Nucleodur lựa chọn hai pic khảo sát tách nhau, hình dạng cân đối chiều cao phù hợp cho q trình phân tích 2000000 1750000 1500000 1250000 1000000 750000 500000 250000 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 200000 Inten (x1,000,000) 150000 7.5 100000 579.30 5.0 50000 2.5 580.30 0.0 100 191.05 134.90 132.85 200 281.10 267.10 300 3.00 625.30 581.30615.25 400 500 600 700 800 900 m/z Inten (x1,000,000) 1.50 1.25 1.00 271.15 0.75 0.50 151.05 0.25 0.00 100 200 579.25 459.25 177.10 300 400 500 600 700 800 900 m/z Hình Phổ đồ [M-H] ion mẹ (hình bên trái) 202 - 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.00 5.25 5.50 5.75 6.00 6.25 6.50 6.75 Hình Sắc ký đồ khảo sát cột sắc ký C18 (150 x 4,6 mm; 2,7 μm) (hình bên trái) C8 (150 x 4,6 mm; 3,0 μm) (hình phải) Kết sắc ký đồ Hình cho thấy pic naringin hesperidin rửa giải ghi nhận tín hiệu pic với pha động methanol – acid acetic 0,1 % (50 : 50) Dung môi methanol hiệu quy trình phân tích đồng thời naringin hesperidin với đầu dị MS/MS TẠP CHÍ Y häc viƯt nam tẬP 523 - th¸ng - sè - 2023 lại dung dịch thử Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống trình bày Bảng 17500 15000 12500 10000 Bảng Tính phù hợp hệ thống mẫu chuẩn (n = 6) mẫu thử (n = 6) 7500 5000 2500 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 60000 50000 40000 30000 20000 10000 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Hình Sắc ký đồ khảo sát pha động ACN – acid acetic 0,1 % (hình trái) MeOH – acid acetic 0,1 % (hình phải) 3.3 Dự thảo quy trình định lượng Mẫu thử: cân 0,15 g bột BN vào bình định mức 100 ml, thêm 60 ml methanol, chiết siêu âm 30 phút, để nguội điền đến vạch với dung môi, lắc Ly tâm 4000 vịng/phút phút Lấy xác ml lớp dung dịch cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung methanol đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,22 μm Mẫu chuẩn: hỗn hợp dung dịch chuẩn naringin hesperidin pha methanol để dung dịch chuẩn có nồng độ 4000,0 8,0 (ppb) Lọc qua màng lọc 0,22 μm Mẫu trắng: methanol Điều kiện sắc ký: Cột: Nucleodur C8 EC (150 x 4,6 mm; μm), pha động: methanol – acid acetic 0,1% (50:50), tốc độ dòng: 0,6 ml/phút, nhiệt độ cột: 30oC, nhiệt độ buồng tiêm mẫu: 10oC thể tích tiêm mẫu: 5μl Điều kiện khối phổ: chế độ: ESI (-), MRM, tốc độ khí phun: 3,0l/phút, tốc độ khí khơ: 15,0 l/phút, nhiệt độ desolvation line: 250 oC, nhiệt độ heat block: 400 oC giao diện: 4500 V Hàm lượng (mg/g) naringin/hesperidin mẫu tính theo cơng thức: tR (phút) S AS (< 2,0) Mẫu chuẩn 4,49 (RSD 3426688 Naringin 1,7 (Đạt) 0,06%) (RSD 1,42%) 4,82 (RSD 17118 (RSD Hesperidin 1,6 (Đạt) 0,08%) 2,38%) Mẫu thử 4,51(RSD 3696990 Naringin 1,8 (Đạt) 0,09%) (RSD 1,06 %) 4,88 (RSD 22235 (RSD Hesperidin 1,5 (Đạt) 0,08%) 3,74 %) Nhận xét: RSD (%) thời gian lưu, diện tích pic naringin hesperidin mẫu chuẩn mẫu thử < 5,3 % hệ số bất đối < 2,0 Kết luận: quy trình đạt tính phù hợp hệ thống 3.4.2 Độ đặc hiệu Tiến hành sắc ký mẫu trắng, mẫu thử, mẫu chuẩn mẫu thử thêm chuẩn Kết thử nghiệm độ đặc hiệu trình bày Hình Sắc ký đồ (SKĐ) mẫu trắng khơng xuất pic có thời gian lưu tương ứng với pic naringin hesperidin SKĐ mẫu chuẩn SKĐ mẫu thử có tín hiệu pic có thời gian lưu (4,51 4,88 phút) tương ứng với pic naringin hesperidin (4,49 4,82 phút) SKĐ mẫu chuẩn SKĐ mẫu thử thêm chuẩn có tăng diện tích pic (5627796 33736) so với SKĐ mẫu thử (3632997 21855) A B Trong đó: ST: diện tích pic dung dịch thử SC: diện tích pic dung dịch chuẩn CC: nồng độ dung dịch chuẩn (ppb) α: độ tinh khiết chuẩn (%) D: độ pha loãng dung dịch thử m: khối lượng cân mẫu thử (g) h: độ ẩm dược liệu (%) 3.4 Thẩm định quy trình định lượng 3.4.1 Tính phù hợp hệ thống Tiến hành sắc ký lần lặp lại dung dịch chuẩn lần lặp C D Hình SKĐ mẫu trắng (A), mẫu chuẩn (B), mẫu thử (C) mẫu thử thêm chuẩn (D) 203 vietnam medical journal n02 - FEBRUARY - 2023 Phổ MS mẫu trắng không xuất mảnh phổ khối m/z = 579,15 → 271,10 (naringin) m/z = 608,95 → 300,80 (hesperidin) 1.00 Phổ MS mẫu thử mẫu chuẩn có tín hiệu ion mẹ ion đặc trưng naringin (m/z = 579 → 271) hesperidin (m/z = 609 → 301) Kết luận: quy trình đạt độ đặc hiệu Inten (x100,000) 469.05 A 463.00 0.75 447.05 419.20 445.15 0.50 545.05 551.00 407.10 401.20 403.00 421.15 713.45 459.25 417.05 441.15 423.15 411.05 431.05 455.20 493.15 499.20 633.10 627.00 433.10 473.25 437.15 715.30 449.30 527.20 429.15 465.10 443.25461.10 501.25 435.30 0.25 409.15 413.15 611.00 479.10 495.10 505.15 507.20 457.20 531.05 485.10 415.15 503.15 439.10 477.05 487.20 453.10470.00 489.05 513.20 740.55 709.00 523.25 471.10 529.20 549.15 737.55 405.20420.20 425.00 539.05557.25 609.20 483.15 515.30 427.10 451.25 521.05 553.15 467.10 597.05 559.10 491.30 525.00 585.25 567.15 535.05 537.10 574.95 547.20 581.40 759.30 475.20 472.15 519.25 497.30 509.30 665.25 760.55 787.00 637.20 565.10 757.05 571.15 481.20 514.15 691.05 400.00 450.05 579.25 410.05 428.10 647.35 541.20 583.05 671.00 506.20 561.20 623.25 625.05 685.20 607.20 552.15 605.20 569.10 739.60 530.00 589.15 601.15 716.90 603.20 681.00 705.25 636.25 644.90 562.10 689.30 595.15 661.30 553.95 659.30 747.15 542.95 695.15 434.00 452.10 563.25 702.90 745.00 546.25 548.05 643.15 777.05 456.00 615.10 619.20 631.15 742.55 704.20 738.65 577.25 517.35 796.80 580.40 721.35 533.20 573.20 657.40 669.15 453.95 496.05511.05 586.30 612.90 629.10 663.10 771.25 639.15 701.25 778.85 599.05 634.20 652.40 655.45 675.25 717.65 587.40 621.00 494.05 556.05 727.35 781.35 785.15 751.00 564.10 697.40 725.35 752.95 672.30 592.30 606.10 617.35 518.05 532.20 622.30 635.30 743.45 777.85 660.15 731.10 641.20 678.30 693.10 7710.05 07.00 667.25 758.35 775.05 590.95 654.50 677.25 719.10 600.05 648.95 789.05 772.35 571.90 512.15 673.70 540.05555.10 645.90 795.15 676.25 687.10 764.75 792.35 640.20 769.65 790.60 656.10 735.00 763.30 699.10 765.85 711.35 782.15 783.00 736.25 766.70 696.35 749.05 0.00 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z Inten (x100,000) Inten (x100,000) 579.15 579.15 3.5 7.5 3.0 B 5.0 C 2.5 406.95422.95 2.0 1.5 580.20 2.5 615.10 581.25 401.15 425.20 445.15463.10 439.10 431.00 661.15 639.20 640.20 721.10 0.0 400 450 500 550 600 650 700 750 m/z 580.20 570.95 409.95 1.0 479.00 568.90 476.90 466.90 401.00 405.90 407.90424.00 420.90435.00 505.00 571.95 581.00 596.90 615.15 454.95 444.95 652.95 540.90554.95 0.5 410.90 469.00 488.95 448.90 650.95 457.00 639.20 442.90 539.00 622.90637.00 494.95 744.90 786.85 642.90 664.95 564.85 661.00 462.95 561.00 424.95 546.95 548.95 413.00 452.90 545.00 460.90 572.95 446.90 472.95 483.05 437.00 556.95 516.95 734.95 617.00 624.95 464.90 527.05 628.95 728.90 559.05 656.90 658.95 746.85758.95 784.80 477.90 563.05 677.05 458.90 440.95 529.05 428.90 485.00 600.90 487.00 552.90 633.00645.00 646.85 415.00 451.00 479.95 481.00 576.90 595.05 537.00 616.05 411.95 439.00 493.00 512.90 402.80 574.95 598.05 630.90 718.95 648.00 738.80 542.95 717.10 482.00 550.95 599.85 679.00693.15 710.95 618.95 654.95668.95 672.90 730.85 431.10 519.05 663.05 732.80 426.95 449.90 419.00 524.95 604.85 0.0 400.0 425.0 450.0 475.0 500.0 525.0 550.0 575.0 600.0 625.0 650.0 675.0 700.0 725.0 750.0 775.0 m/z Inten (x100,000) Inten (x10,000) 271.10 271.10 1.25 7.5 1.00 D 5.0 E 0.75 150.90 0.50 2.5151.00 459.10 0.25 313.05 235.10 0.0 150.0 175.0 200.0 225.0 275.0 300.0 325.0 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 475.0 m/z Inten (x10,000) 627.05 2.5 633.00 0.00 150.0 175.0 200.0 621.05 617.20619.05 611.25 605.15607.10 609.90 613.05 616.05 637.05 639.05 625.35 623.85 630.00 621.90 634.30 635.05 275.0 300.0 325.0 350.0 0.5 400.0 425.0 633.05 585.15587.15 589.00 583.20 1.5 647.00 641.10642.85 645.10 375.0 450.0 475.0 m/z 615.15 617.10 2.0 595.20 591.00 597.15 599.05 602.55 592.00 250.0 621.05 2.0 1.5 585.25 225.0 Inten (x10,000) 580.15 581.15 2.5 F 615.10 608.95 587.10589.15 1.0 459.15 313.20 250.0 639.20 643.05 627.10 G 605.10 593.00595.05 599.15 613.00 616.10 619.00 617.95 609.05611.05 603.10 631.20 636.85 648.10 1.0 0.5 0.0 585.0 590.0 595.0 600.0 605.0 610.0 615.0 620.0 625.0 630.0 635.0 640.0 645.0 m/z 580.0 Inten (x1,000) 590.0 595.0 600.0 605.0 610.0 615.0 620.0 625.0 205.00 245.00 219.50 221.10 223.05 198.90 259.10 266.60 225.0 263.30 250.0 275.0 304.60 300.0 0.50 363.30 293.30 302.70 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 475.0 m/z 0.00 150.0 357.00368.80 264.90 280.80294.20 321.10 304.90 222.60 0.25 339.30 325.0 207.10 175.0 200.0 225.0 250.0 275.0 300.0 Hình Phổ MS thử nghiệm độ đặc hiệu Hình (A): mẫu trắng; Hình (B): ion mẹ naringin/mẫu chuẩn; Hình (C): ion mẹ naringin/mẫu thử; Hình (D): ion naringin mẫu chuẩn; Hình (E): ion naringin mẫu thử; Hình (F): ion mẹ hesperidin/mẫu chuẩn; Hình (G): ion mẹ hesperidin/mẫu thử; Hình (H): ion hesperidin/mẫu chuẩn; Hình (I): ion hesperidin/mẫu thử 3.4.3 Khoảng tuyến tính Pha chế dung 204 m/z 0.75 283.40 200.0 645.0 I 1.00 325.40 242.20 199.10 175.0 640.0 1.25 300.80 0.00 150.0 635.0 1.50 H 0.75 0.25 630.0 301.15 1.75 281.30 1.00 0.50 585.0 Inten (x1,000) 200.90 325.0 384.85 459.20 373.10 350.0 375.0 400.0 425.0 450.0 475.0 m/z dịch chuẩn hỗn hợp gốc naringin hesperidin methanol có nồng độ 40,00 0,08 (ppm) Từ dung dịch chuẩn hỗn hợp gốc, chuẩn bị mẫu chuẩn hỗn hợp có nồng độ naringin từ 1600,0 – 8000,0 (ppb) nồng độ hesperidin từ 3,2 – 16,0 (ppb) Pha loãng để dung dịch chuẩn naringin 0,1 ppb Xác định tương quan nồng độ naringin/hesperidin diện tích pic TẠP CHÍ Y häc viƯt nam tẬP 523 - th¸ng - sè - 2023 Bảng Kết khảo sát khoảng tuyến tính Naringin Hesperidin Nồng độ Nồng độ Diện Diện tích (ppb) (ppb) tích 0,10 3862 1571,29 1256886 3,11 7630 1964,11 1641729 3,89 8398 3928,22 3208170 7,78 20153 4713,87 3975110 9,34 23373 5892,34 4505491 11,67 29613 7856,45 6500121 15,56 39797 Phương trình hồi quy tuyến tính của: - Naringin: y = 811,8x + 6429,3 với x nồng độ naringin (ppb) có mẫu; y diện tích pic naringin; hệ số tương quan r = 0,9980 - Hesperidin: y = 2627,2x – 987,1 với x nồng độ hesperidin (ppb) có mẫu; y diện tích pic hesperidin; hệ số tương quan r = 0,9990 3.4.4 Độ xác Phân tích mẫu thử độc lập thực kiểm nghiệm viên STT Bảng Kết thử nghiệm độ xác (n = 12) STT Naringin Hesperidin Diện tích C (mg/g) Diện tích C (mg/g) Kiểm nghiệm viên 3687360 108,3 22667 0,21 3668775 108,0 22583 0,21 3656119 107,9 21549 0,20 3662623 107,5 22265 0,20 3696506 108,5 21354 0,19 3667556 107,8 21693 0,20 Kiểm nghiệm viên 3709620 108,7 19493 0,21 3705793 109,0 18185 0,19 3601040 106,8 18649 0,20 3597555 106,4 17434 0,19 3610152 106,3 19084 0,20 3559415 106,4 19191 0,21 Trung bình = 107,6 Trung bình = 0,2 mg/g RSD = 0,90 % mg/g RSD = 3,25 % RSD S pic hàm lượng naringin, hesperidin kiểm nghiệm viên < 5,3 % Quy trình đạt độ xác, hàm lượng naringin hesperidin bưởi non 107,6 0,2 (mg/g) 3.4.5 LOD LOQ Pha loãng mẫu chuẩn đến nồng độ cho tín hiệu phát (LOD) định lượng (LOQ) Pha chế mẫu thử tương ứng với nồng độ LOD LOQ, tiêm lặp lại lần dung dịch thử vào hệ thống sắc ký, kết trình bày Bảng Bảng Kết thử nghiệm LOD LOQ (n = 6) Giới hạn phát Giới hạn định lượng LOD LOQ S S/N S S/N (ppb) (ppb) Naringin 0,05 1238 5,5 0,10 4148 19,0 Hesperidin 1,56 3124 10,7 3,11 7513 19,8 Tín hiệu nhiễu (S/N) LOD LOQ đạt yêu cầu, LOD naringin hesperidin 0,05 1,56 (ppb) LOQ 0,10 3,11 (ppb) 3.4.6 Độ Độ thực phương pháp pha chế mẫu thử thêm lượng chuẩn tương ứng với mức nồng độ LOQ; 50; 100 150% so với nồng độ định lượng Mỗi mức nồng độ thực lần Phân tích xác định tỷ lệ phục hồi Kết thẩm định độ trình bày bảng Tỷ lệ phục hồi naringin hesperidin mức nồng độ thuộc giới hạn 80,0 – 110,0 (%) RSD ≤ 5,3 %, quy trình đạt độ [2] Bảng Kết thử nghiệm độ (n = 12) Mức LOQ 50% 100% 150% TT 3 Cthêm (ppb) 0,050 0,050 0,050 1060,6 1060,6 1060,6 2112,2 2112,2 2112,2 3181,9 3181,9 Naringin Ctìm lại S (ppb) 4507 0,050 4444 0,049 4462 0,049 1798415 1098,45 1818852 1105,66 1821341 1108,72 3610702 2202,01 3590274 2170,86 3566418 2135,48 5340714 3198,23 5417295 3304,54 TLPH (%) 97,0 94,8 95,1 103,6 104,2 104,5 103,8 102,3 100,7 100,5 103,9 Cthêm (ppb) 1,40 1,40 1,40 2,10 2,10 2,10 4,20 4,20 4,20 6,30 6,30 Hesperidin Ctìm lại S (ppb) 7525 1,19 7700 1,26 7603 1,23 10347 1,87 10445 1,87 10364 1,84 21756 4,12 20906 3,79 21143 3,87 30537 5,36 30000 5,18 TLPH (%) 85,2 89,7 87,7 89,0 89,2 87,7 98,1 90,1 92,0 85,1 82,2 205 vietnam medical journal n02 - FEBRUARY - 2023 3181,9 5367413 3243,09 101,9 6,30 30785 5,48 86,9 Trung bình 101,0 Trung bình 88,6 RSD (%) 3,50 RSD (%) 4,50 for Dietary Supplements and Botanicals”, 3.4.7 Khoảng xác định Khoảng xác định 2002;Section 3.4:17-22 phương pháp xác định từ kết khảo sát Chen L, Lai Y, Dong L, Kang S, Chen X., độ đúng: “Polysaccharides from Citrus grandis (L.) Osbeck - Khoảng nồng độ định lượng naringin: suppress inflammation and relieve chronic pharyngitis”, Microbial pathogenesis, 0,1 – 6000,0 (ppb) 2017;113:365-371 - Khoảng nồng độ định lượng hesperidin: ICH Harmonised Tripartite Guideline, 3,1 – 12,0 (ppb) “Validation of analytical procedures: text and IV KẾT LUẬN Quy trình định lượng đồng thời naringin hesperidin bưởi non phương pháp LC-MS/MS đạt yêu cầu thẩm định Có thể ứng dụng quy trình việc kiểm soát hàm lượng flavonoid bưởi non Hàm lượng naringin hesperidin bột bưởi non 107,6 0,2 (mg/g) TÀI LIỆU THAM KHẢO Anmol RJ, Marium S et al., “Phytochemical and Therapeutic Potential of Citrus grandis (L.) Osbeck: A Review”, J Evid Based Integr Med, 2021:12-15 AOAC International, “AOAC Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods methodology”, 2015:1-13 Mäkynen K, Jitsaardkul S, Tachasamran P, et al., “Cultivar variations in antioxidant and antihyperlipidemic properties of pomelo pulp (Citrus grandis (L.) Osbeck) in Thailand”, Food Chem, 2013;139(1-4):735-743 Xi W., Fang B., Zhao Q et al., “Flavonoid composition and antioxidant activities of Chinese local pummelo (Citrus grandis Osbeck.) varieties”, Food Chem, 2014;161:230-238 Yusof S., Ghazali H M., King G S J F C., “Naringin content in local citrus fruits”, Food Chem, 1990;37(2):113-121 Yuting C., Rongliang Z., Zhongjian J et al., “Flavonoids as superoxide scavengers and antioxidants”, Free Radical Biology and Medicine, 1990;9(1):19-21 MỘT SỐ CHỈ SỐ HUYẾT HỌC, ĐÔNG MÁU VÀ MỐI LIÊN QUAN Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔI NGUYÊN PHÁTTẠI VIỆN HUYẾT HỌC – TRUYỀN MÁU TRUNG ƯƠNG GIAI ĐOẠN 2020 – 2022 Nguyễn Khánh Hà1, Trần Thị Kiều My1,2, Đào Thị Thiết2 TÓM TẮT 53 Bệnh lý ung thư phổi nguyên phát bệnh lý ác tính ngồi hệ tạo máu; nhiên, nhiều nghiên cứu giới cho thấy biến đổi đa dạng huyết học đông máu phát sinh trình tiến triển điều trị bệnh Mục tiêu: (1) Mô tả số số huyết học, đông máu nhóm bệnh nhân ung thư phổi nguyên phát Viện Huyết học – Truyền máu Trung Ương giai đoạn 2020 – 2022 (2) Nhận xét mối liên quan số số huyết học, đông máu đặc điểm đối tượng nghiên cứu Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 34 bệnh nhân điều trị lần đầu địa điểm nghiên cứu thời gian nghiên cứu, chẩn đoán ung thư phổi trước thời điểm 1Trường 2Viện Đại học Y Hà Nội Huyết học – Truyền máu Trung Ương Chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Khánh Hà Email: ha.ngnkhnh@gmail.com Ngày nhận bài: 6.12.2022 Ngày phản biện khoa học: 11.01.2023 Ngày duyệt bài: 8.2.2023 206 nhập viện Kết nghiên cứu: Nhóm tuổi 50-64 chiếm tỉ lệ cao với 76.5% Tỉ lệ nam:nữ ~ 8:1 Tỉ lệ tăng bạch cầu lên tới 40% với số trung bình 16.13 ± 23.29 G/L Gần 50% đối tượng có tăng số lượng tiểu cầu với trung bình 511.35 ± 511.67 G/L 60% bệnh nhân có nguy huyết khối trung bình – cao theo thang điểm Khorana, cần điều trị dự phòng Chỉ số D-dimer tăng 82% bệnh nhân, 80% có tăng nồng độ fibrinogen với giá trị trung bình 2061.97 ± 2180.45 ng/ml 5.22 ± 1.33 g/l Chưa thấy có khác biệt mặt thống kê so sánh trung bình tỉ lệ tăng số huyết học, đơng máu hai nhóm đối tượng chưa điều trị ung thư phổi phương pháp khác Nồng độ Fibrinogen số lượng tiểu cầu đối tượng nghiên cứu có mối tương quan chặt chẽ với hệ số tương quan r=0,6 Kết luận: Đối tượng nghiên cứu có số số huyết học, đông máu xu hướng tăng cao với nguy huyết khối dựa theo thang điểm Khorana Fibrinogen tiểu cầu có mối tương quan chặt chẽ với Khơng có khác biệt nhóm điều trị chưa điều trị ung thư phổi Những bệnh nhân có tăng bạch cầu, tiểu cầu chưa rõ nguyên nhân nên phối hợp kiểm tra xét nghiệm đông máu tầm soát ung thư phổi  ... LUẬN Quy trình định lượng đồng thời naringin hesperidin bưởi non phương pháp LC-MS/MS đạt yêu cầu thẩm định Có thể ứng dụng quy trình việc kiểm soát hàm lượng flavonoid bưởi non Hàm lượng naringin. .. Từ điều kiện khối phổ điều kiện sắc ký lựa chọn, tiến hành thẩm định quy trình định lượng theo hướng dẫn ICH AOAC [2, 4] III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Điều kiện khối phổ Thiết bị khối phổ ba tứ cực... = 0,90 % mg/g RSD = 3,25 % RSD S pic hàm lượng naringin, hesperidin kiểm nghiệm viên < 5,3 % Quy trình đạt độ xác, hàm lượng naringin hesperidin bưởi non 107,6 0,2 (mg/g) 3.4.5 LOD LOQ Pha lỗng