T�P CHÍ Y D��C H�C C�N TH� � S� 29/2020 171 of Acquired Bìlateral Nevus of Ota Like Macules, Dermatologic surgery, 27(11), pp 937 942 6 Landi M T , Baccarelli A , Tarone R E , Pesatori A , Tucker M A[.]
T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 of Acquired Bìlateral Nevus of Ota-Like Macules, Dermatologic surgery, 27(11), pp 937942 Landi M T., Baccarelli A., Tarone R E., Pesatori A., Tucker M A., Hedayati M., et al (2002), DNA repair, dysplastic nevi, and sunlight sensitivity in the development of cutaneous malignant melanoma, Journal ofthe National Cancer Institute, 94(2), pp 94-101 Lauren A Baker A G P (2014), Drug-Induced Pigmentary changes In A G P Diane Jackson Richards (Ed.), Dermatology azlasfor skin of color, pp 39-43 Mizoguchi M, Murakami F, Ito M, et al (1997), Clinical, pathological, and etiologic aspects of acquired dermal melanocytosis Pigment Cell Res;10: pp 176-83 Park JM, Tsao H, Tsao S (2009), Acquired bilateral nevus of Ota-like macules (Hori nevus): etiologic and therapeutic considerations, J Am Acad Dermatol.;61(1): pp 88-93 10 Polnikorn N, Tanrattanakorn S, Goldberg DJ (2000), Treatment of Hori's nevus with the Qswitched Nd:YAG laser Dermatol Surg; 26: pp 477-80 11 Sun CC, Lu YC, Lee EF, et al (1987), Naevus fusco-caeruleus zygomaticus Br J Dermatol;1: pp 545-53 12 Wang B.-Q., Shen Z.-Y., Fei Y., Li, H., Liu J.-H., Xu H., et al (2011), A population-based study of acquired bilateral nevus-of-Ota-like macules in Shanghai, China, Journal of lnvestigative Dermatology, mm, pp 358-362 (Ngày nh n bài: 10/08/2020 - Ngày t ng: 09/09/2020) XÂY D NG QUY TRÌNH NH L NG NG TH I SIBUTRAMINE VÀ PHENOLPHTHALEIN TR N TRÁI PHÉP TRONG TH C PH M CH C N NG GI M CÂN B NG PH NG PHÁP HPLC-PDA Nguy n Thái Ng c Mai, Nguy n Th Ng c Vân* Tr ng i h c Y D c C n Th *Email: nguyenthingocvanct@gmail.com TÓM T T t v n : Sibutramine phenolphthalein hai ch t th ng xuyên c tr n trái phép s n ph m th c ph m ch c n ng gi m cân Tuy nhiên, chúng ã b lo i kh i th tr ng sibutramin gây tác d ng ph nghiêm tr ng lên tim m ch, phenolphthalein c phát hi n ch t gây ung th c ng c coi nguyên nhân gây nh ng thay i DNA M c tiêu: Xây d ng th m nh quy trình nh l ng ng th i sibutramine phenolphthalein th c ph m ch c n ng gi m cân b ng ph ng pháp HPLC ng th i ng d ng quy trình phân tích sibutramine phenolphthalein m t s m u th c ph m ch c n ng gi m cân thu th p th tr ng i t ng ph ng pháp: M u th c ph m ch c n ng mua th tr ng c xây d ng th m nh quy trình theo h ng d n c a AOAC K t qu : i u ki n s c ký: c t Restek C18 (250 mm x 4,6 mm; 5µm), pha ng: acid formic 0,1%/acetonitril – methanol – ammonium acetate 0,2%/methanol – n c (40:60), ch r a gi i gradient; quy trình c th m nh v i thu h i c a ph ng pháp t 91,87 – 96,46% RSD kho ng 1,48 – 4,11%, giá tr LOD LOQ l n l t 0,33 mg/kg mg/kg K t lu n: Quy trình nh l ng ng th i sibutramine phenolphthalein th c ph m ch c n ng gi m cân ã c xây d ng th m nh t yêu c u, ph ng pháp ã ng d ng thành công 10 m u th c ph m ch c n ng gi m cân th tr ng T khóa: sibutramin, phenolphthalein, th c ph m ch c n ng gi m cân, HPLC-PDA 171 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 ABSTRACT SIMULTANEOUS DETERMINATION OF SIBUTRAMINE AND PHENOLPHTHALEIN IN NATURAL WEIGHT LOSS SUPPLEMENTS BY HPLC-PDA Nguyen Thai Ngoc Mai, Nguyen Thi Ngoc Van* Can Tho University of Medicine and Pharmacy Background: Sibutramine and phenolphthalein are two substances that are frequently illegally mixed in weight loss supplements However, they were removed from the market due to the serious cardiovascular side effects of sibutramine, phenolphthalein found to be a carcinogen and also considered the cause of changes in DNA Objectives: Determination and validation simultaneous sibutramine and phenolphthalein in weight loss supplements by HPLC and applying the procedure to analyze sibutramine and phenolphthalein in some weight loss supplement samples collected in market Materials and Methods: sibutramine and phenolphthalein in weight loss supplements, the method was validated under AOAC guidance Results: Chromatography condition: Restek C18 column (250mm x 4,6mm; 5µm) with a gradient mode using formic acid 0,1%/acetonitrile – methanol – ammonium acetate 0,2%/methanol – water (40:60) as mobile phase The recovery of method ranged 91.87 – 96.46% and RSD is from 1.48 – 4.11%, the LOD and LOQ were 0.33 mg/kg - mg/kg, respectively Conclusion: The results of the study showed that the proposed HPLC-PDA methods precise and accurate The method was helpful for identification and quantification of the prohibited substances in weight loss supplements in the market Keywords: sibutramine, phenolphthalein, slimming dietary supplements, HPLC-PDA I TV N È Theo T ch c Y t Th gi i (World Health Organization – WHO), tình tr ng béo phì th gi i ã t ng g n g p ba l n k t n m 1975 [9] V i tình tr ng th a cân béo phì t ng cao cu c s ng b n r n hi n thay th c hi n ch n u ng t p luy n lành m nh, nhi u ng i l i tìm n nh ng s n ph m gi m cân v i mong mu n gi m c cân n ng m t cách nhanh chóng M t m t, vi c s n xu t, kinh doanh, xu t nh p kh u s n ph m thu c gi m cân d i d ng th c ph m ch c n ng ang phát tri n nhanh, m nh ngày a d ng nh ng n c ta nói chung B Y t nói riêng ch a th c s a sách qu n lý nghiêm c ng nh nh ng quy nh c th i v i lo i m t hàng Các lo i thu c gi m cân ch y u d ng u ng, có nh h ng tr c ti p n bên c th s c kh e c a ng i Ngoài ra, s n ph m làm p th tr ng nh ng s n ph m m c ích thu c l i nhu n cao nên khó tránh kh i m t s nhà s n xu t mu n y m nh tiêu th , có th tr n trái phép ho t ch t tân d c ho c m t s ch t c m vào s n ph m thu c gi m cân c ghi có ngu n g c th o d c chúng t o hi u qu nhanh chóng h n Theo FDA nhi u báo c a tác gi c công b , ch t th ng c tr n vào s n ph m gi m cân sibutramine phenolphthalein, nh ng ch t có th gây tác d ng ph c c k nghiêm tr ng cho s c kh e ng i, th m chí có th d n n t vong [6], [8], [9] Do ó, nghiên c u c th c hi n nh m xây d ng th m nh quy trình nh l ng ng th i sibutramine phenolphthalein có th c ph m ch c n ng gi m cân b ng ph ng pháp s c ký l ng hi u n ng cao II NGUYÊN V T LI U VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 Nguyên li u 172 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 - Ch t chu n sibutramine hydroclorid monohydrat (HPC): Lot: 794648; tinh ki t ≥ 99,9% (HPLC) Ch t chu n phenolphthalein (LGC): Lot: W1016520; tinh t ≥ 99,82% (HPLC) Ch t chu n clenbuterol (LGC): Lot: G1023427; tinh t 97,08% (HPLC) - Methanol, acetonitrile, n c c t t chu n HPLC (Merck) Acid formic, ammonium acetate, NaCl, MgSO4 khan, dung d ch ammoniac 25% (Fisher) 2.2 Thi t b Máy s c ký l ng hi u n ng cao HPLC Shimadzu (LC 20AD) g m h th ng tiêm m u t ng, b m, lò c t trang b u dò PDA, c t Restek C18 (250 mm x 4,6 mm; 5µm) thi t b khác 2.3 Ph ng pháp nghiên c u Chu n b m u phân tích H n h p chu n g c: Cân xác 10mg sibutramine, phenolphthalein hịa tan bình nh m c 10mL v i methanol, l c k , b sung dung môi n v ch, thu c dung d ch h n h p chu n g c có n ng m i ch t chu n 1000µg/mL M u th : Cân xác kho ng 0,5g m u th chi t l n, m i l n v i 5mL MeOH, siêu âm 10 phút G p d ch chi t em i th i khô dung môi Ti n hành lo i t p phân c c b ng ph ng pháp chi t l ng-l ng Ti p t c lo i t p phân c c b ng cách l c v i hexan Cu i l c vào vial r i tiêm vào h th ng s c ký Kh o sát i u ki n s c ký: Các i u ki n s c ký c nh nh c t s c ký Restek C18 (4,6 x 250mm; 5µm), th tích tiêm 20µL t c dịng 1mL/phút Ti n hành kh o sát i u ki n s c ký bao g m ch ng trình r a gi i, b c sóng phát hi n, thành ph n t l pha ng l a ch n i u ki n s c ký t i u 2.4 N i dung nghiên c u Xây d ng th m nh quy trình phân tích Th m nh quy trình phân tích theo h ng d n c a AOAC bao g m ch tiêu: tính t ng thích h th ng, tính c hi u, kho ng n tính, gi i h n phát hi n (LOD) gi i h n nh l ng (LOQ), xác ng [3] ng d ng nh l ng sibutramin phenolphthalein 10 m u th c ph m ch c n ng gi m cân th tr ng III K T QU NGHIÊN C U 3.1 K t qu kh o sát, l a ch n i u ki n s c ký 173 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 B ng i u ki n s c ký C t s c ký Pha ng A Pha ng B Pha ng C Ch ng trình gradient Restek C18 (4,6 x 250mm; 0,5µm) Acetonitrile/0,1% formic acid Methanol Methanol – water (40:60)/0,2% ammonium acetate Th i gian (phút) Pha ng A (%) Pha ng B (%) 5,5 13 14 19 mL/phút T c dịng 20 µL Th tích tiêm 30oC Nhi t c t B c sóng phát hi n 225nm Hình 1: S c ký 0 25 25 70 90 30 10 35 65 30 10 h n h p chu n sibutramine, phenolphthalein n i chu n s c ký l a ch n Pha (%) ng C 70 90 40 10 0 i u ki n 3.2 K t qu th m nh quy trình phân tích Tính t ng thích h th ng Ti n hành tiêm l p l i l n m u h n h p chu n siburamine phenolphthalein n ng 20ppm n i chu n n ng 20ppm v i i u ki n HPLC ã ch n K t qu cho th y RSD th i gian l u di n tích nh th p (< 2%) RSD c a t l di n tích pic c a ch t phân tích n i chu n áp ng yêu c u theo h ng d n c a AOAC (RSD < 15%) 174 T P CHÍ Y D B ng Tính t Phenolpthalein Sibutramine C H C C N TH S 29/2020 ng thích h th ng TB SD RSD% TB SD RSD% Th i gian l u (tR) 6,74 0,004 0,05 15,94 0,012 0,08 Di n tích H s nh (S) b t i (As) 1206546 1,145 1177 0,001 0,1 0,11 442991 1,137 5106 0,01 1,15 0,84 phân gi i (Rs) 11,053 0,102 0,92 39,776 0,05 0,13 H s dung l ng (k’) 2,744 0,002 0,07 7,856 0,007 0,09 S a lý thuy t (N) 8056 14,919 0,19 154326 1365 0,88 c hi u Ti n hành phân tích m u chu n, m u tr ng, m u th gi l p, m u dung mơi hịa tan, m u dung môi pha ng, m u dung môi chi t K t qu phân tích c trình bày hình cho th y s c ký m u tr ng, m u dung mơi hịa tan, m u dung môi pha ng, m u dung môi chi t không xu t hi n pic trùng th i gian l u v i ch t c n phân tích so v i s c ký c a h n h p ch t chu n Trên s c ký c a m u th thêm chu n có xu t hi n pic có th i gian l u trùng v i ch t phân tích m u chu n Nh v y ph ng pháp có tính c hi u t u c u Hình 2: S c ký th m nh tính c hi u (1: Dung môi pha ng; 2: Dung môi hịa tan; 3: Dung mơi chi t; 4: M u chu n clenbuterol; 5: M u chu n phenolphthalein; 6: M u chu n sibutramine; 7: M u h n h p chu n; 8: M u tr ng; 9: M u th thêm chu n) Tính n tính Ti n hành phân tích m u th gi l p có n ng t – 80ppm, n ng n i chu n c nh 20ppm v i i u ki n HPLC ã ch n Xây d ng ph ng trình h i quy th hi n m i t ng quan gi a n ng di n tích pic c a phenolphthalein sibutramine 175 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 LOD LOQ LOD LOQ c xác nh d a vào giá tr s tín hi u/ nhi u (S/N) t i n ng nh t mà S/N l n l t 10 B ng K t qu th m nh tính n tính, LOD LOQ Phenolpthalein Sibutramine Ph ng trình h i qui y = 146066x - 122622 y = 41104x - 10455 R2 LOD (ppm) 0,33 0,33 0,9989 0,9999 th p LOQ (ppm) 1 K t qu th m nh cho th y kho ng n ng 1-80 ppm có s t ng quan n tính gi a n ng di n tích pic c a ch t phân tích v i h s t ng quan R2 > 0,995 LOD LOQ c a hai ch t c n phân tích giá tr t ng i th p (0,33 - ppm) úng xác Thêm vào m u tr ng m t l ng xác nh h n chu n sibutramine phenolphthalein t ng ng v i ba m c n ng 4ppm, 8ppm, 12ppm ng c xác nh d a % l ng ch t thu h i so v i l ng chu n ã thêm vào m i n ng c phân tích l p l i l n m i ngày, ngày liên ti p B ng K t qu th m nh ng xác 4ppm 8ppm 12ppm 93,55 96,46 93,97 xác (8ppm) (n = 6) Trong ngày Liên ngày RSD % RSD % 1,48 2,46 91,87 94,43 92,02 2,24 thu h i (%) Ch t phân tích Phenolpthalein Sibutramine 3,10 thu h i kho ng 91,87 – 96,46% RSD% c a phân tích ngày liên ngày u th p Nh v y, ph ng pháp ã xây d ng có thu h i xác t yêu c u theo quy nh AOAC 3.3 ng d ng quy trình nh l ng sibutrmine phenolphthalein m t s th c ph m ch c n ng th c t th tr ng Quy trình phân tích sau th m nh t yêu c u c ng d ng nh l ng ch t c m 10 m u th c ph m ch c n ng gi m cân K t qu phân tích c trình bày b ng B ng K t qu nh l ng sibutramine phenolphthalein m t s s n ph m Ch t phân tích Phenolpthalein Sibutramine S l ng m u nhi m Kho ng n ng nhi m (mg/kg) 21,07 – 16349,46 17,51 – 14460,69 K t qu t b ng cho th y phenolphthalein có 4/10 m u, sibutramine phát hi n 8/10 m u v i kho ng n ng t 17,51 – 16349,46 mg/kg IV BÀN LU N Th c ph m ch c n ng m t n n m u ph c t p, ch t c m tr n trái phép n ng r t nh nên vi c l a ch n quy trình x lý m u thi t b phân tích ph i ịi h i có kh n ng làm s ch m u, phân tích ng th i ch t phân tích v i nh y c hi u cao D ch chi t c lo i t p phân c c b ng ph ng pháp chi t l ng - l ng dùng dung môi h u c 176 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 lo i t p phân c c K t qu cho th y ph ng pháp x lý m u n gi n nh ng cho hi u su t thu h i cao, l p l i n nh Chu n n i dùng nghiên c u clenbuterol áp ng yêu c u phân tích có tính ch t t ng t ch t phân tích nên lo i b c nh h ng t i trình x lý phân tích m u Trên th gi i Vi t Nam ã có r t nhi u nghiên c u a ph ng pháp xác nh riêng ho c ng th i sibutramine phenolphthalein v i nhi u k thu t phân tích khác nh : S c ký khí ghép kh i ph (GC-MS) [3]; S c ký l ng ghép kh i ph (LC-MS/MS) [7]; S c ký l ng siêu cao áp (UHPLC-DAD) [10]; S c ký l ng hi u n ng cao (HPLC) [1], [2], [4], [8] Tuy nhiên, nghiên c u l a ch n HPLC k thu t ph bi n, th ng quy, có xác cao phân tích sibutramine phenolphthalein th c ph m ch c n ng gi m cân Ph ng pháp ã xây d ng có kh n ng nh tính nh l ng c ng th i ch t nghiên c u v i LOD LOQ kho ng t 0,33 - ppm So sánh v i nghiên c a ã công b c a tác gi Ma Wei c ng s , giá tr LOD c a ph ng pháp xây d ng th p h n ch ng t quy trình t nh y cao h n [8] Tình tr ng s n ph m th c ph m ch c n ng gi m cân l u hành th tr ng Vi t Nam nhi m ch t c m nhi u n ng cao, so v i nghiên c u ã công b tr c ó hàm l ng ch t c m c tr n cao h n g p nhi u l n [2], [10] V K T LU N Nghiên c u ã ng d ng ph ng pháp HPLC - PDA xây d ng quy trình nh l ng ng th i sibutramine phenolpthalein tr n trái phép th c ph m ch c n ng gi m cân Ph ng pháp áp ng yêu c u phân tích ch t tr n trái phép v i ch n l c cao, kho ng n tính v i h s t ng quan cao, gi i h n phát hi n gi i h n nh l ng th p, t ng xác Ph ng pháp ã ng d ng xác nh ch t sibutramine phenolphthalein tr n trái phép m t s m u th c ph m ch c n ng gi m cân th tr ng TÀI LI U THAM KH O Lê ình Chi, Lê Th H ng H o (2015), “Xác nh sibutramine có m t trái phép th c ph m ch c n ng gi m béo b ng ph ng pháp s c ký l ng hi u n ng cao”, T p chí Khoa h c Cơng ngh Vi t Nam, 4B, tr 60-64 Nguy n Ti n Luy n (2014), Xác nh ch t c m Sibutramine th c ph m ch c n ng gi m béo b ng ph ng pháp HPLC, Lu n v n th c s khoa h c, Tr ng i h c Khoa h c t nhiên, Hà N i AOAC International (2012), “Appendix K: Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals”, AOAC Official Methods of Analysis, pp 1-14 FDA (2018), Tainted Weight Loss Products [Internet], 11/21/2018 [accessed 12/29/2018], Available from: URL: https://www.fda.gov/Drugs/ResourcesForYou/Consumers/BuyingUsingMedicineSafely/ MedicationHealthFraud/ucm234592.htm Ma Wei, Wang Hai-bo et al (2010), “Simultaneous Determination of Phenolphthalein and Sibutramine Illegally Added to Weight Loss Functional Foods”, FOOD SCIENCE, 31(4), pp 156-160 Yun J, Choi J et al (2018),” Detection of Synthetic Anti-Obesity Drugs, Designer Analogues and Weight- Loss Ingredients as Adulterants in Slimming Foods from 2015 to 2017”, J Chromatogr, 9(1), pp 396 177 T P CHÍ Y D C H C C N TH S 29/2020 Robert Ancuceanu, Mihaela Dinu, Corina Arama (2013), “Weight loss food supplements: Adulteration and multiple quality issues in two products of Chinese origin”, Farmacia, 61(1), pp 28-44 Kevin Tran, Douglas Monroe et al (2015), “Method Validation for the Analysis of Multiple Weight Loss Drugs in Dietary Supplement Materials by LC-MS/MS”, Journal of Regulatory Science, 2, pp 15–19 Ebtisam AR Alabdoolo, Preetha J Shetty et al (2017), “Detection of Illicit Substances in Slimming Products Available in UAE”, Journal of Nutrition and Health Sciences, 4(1), pp 1-5 10 WHO (2020), Obesity and overweight, [Internet], 04/01/2018 [accessed 09/09/2020] Available from: URL: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/obesity-andoverweight Ngày nh n bài: 30/08/2020 - Ngày t NGHIÊN C U T NG H P VÀ XÁC Tr ng: 08/09/2020) NH C U TRÚC VINIFERIFURAN Th Thu H ng1*, Bùi Linh Chi1, ng Quang nh1, Tr n Lê Uyên1, Võ c Duy2 Khoa D c, i h c Y d c C n Th Tr ng i h c Uppsala, Th y i n *Email: dothuhang0509@gmail.com TÓM T T t v n : Viniferifuran h p ch t chuy n hóa th c p thu c nhóm h p ch t dimer c a stilben polyphenol, có ch a vòng benzofuran c u trúc H p ch t c cơng b có tác d ng sinh h c a d ng nh ch ng oxy hóa, kháng viêm, kháng ung th , b o v t bào t n th ng b i s chi u x M c tiêu nghiên c u: Trong nghiên c u này, nhóm nghiên c u ti n hành t ng h p viniferifuran t monomer resveratrol quy mơ phịng thí nghi m i t ng ph ng pháp nghiên c u: Viniferifuran c t ng h p qua giai o n ph n ng: T resveratrol th c hi n ph n ng biomimetic, xúc tác FeCl3 t o thành h n h p s n ph m; Ti n hành tinh ch b ng s c ký c t c i n thu c h n h p viniferin; Acetyl hóa h n h p ti p t c cho ph n ng th m hóa v i 2,3Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ) chuy n vịng dihydrobenzofuran thành vịng benzofuran; Sau ó, ki m hóa s n ph m s thu c viniferifuran tinh t; S n ph m sau t ng h p c ti n hành xác nh c u trúc b ng ph ng pháp ph hi n i MS NMR K t qu : Qua giai o n ph n ng tinh ch , nhóm nghiên c u ã t ng h p thành công viniferifuran t resveratrol Nghiên c u ã mô t quy trình th c hi n, i u ki n c a t ng giai o n ph n ng ng th i k t qu bi n gi i ph c u trúc K t lu n: Nghiên c u ã xây d ng thành cơng quy trình t ng h p viniferifuran quy mơ phịng thí nghi m theo i u ki n th c nghi m c th t i tr ng i h c Y d c C n Th K t qu nghiên c u có ti m n ng c áp d ng nghiên c u t ng h p hóa d c, ph c v vi c nghiên c u t ng h p h p ch t ti m n ng m i có ho t tính sinh h c cao T khóa: viniferifuran, polyphenol, resveratrol, h p ch t thiên nhiên, t ng h p h u c , ph ng pháp quang ph phân tích, NMR 178 ... ng ph ng pháp HPLC - PDA xây d ng quy trình nh l ng ng th i sibutramine phenolpthalein tr n trái phép th c ph m ch c n ng gi m cân Ph ng pháp áp ng yêu c u phân tích ch t tr n trái phép v i ch... hi n nh m xây d ng th m nh quy trình nh l ng ng th i sibutramine phenolphthalein có th c ph m ch c n ng gi m cân b ng ph ng pháp s c ký l ng hi u n ng cao II NGUYÊN V T LI U VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN... p Nh v y, ph ng pháp ã xây d ng có thu h i xác t u c u theo quy nh AOAC 3.3 ng d ng quy trình nh l ng sibutrmine phenolphthalein m t s th c ph m ch c n ng th c t th tr ng Quy trình phân tích