Xây dựng phương pháp định lượng notoginsenisid r1 và một số ginsenisid trong thực phẩm bảo vệ sức khoẻ bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀM THỊ THU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NOTOGINSENOSID R1 VÀ MỘT SỐ GINSENOSID TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀM THỊ THU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NOTOGINSENOSID R1 VÀ MỘT SỐ GINSENOSID TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ CHUYÊN NGÀNH 8720210 Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh HÀ NỘI 2021 LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Nguyễn Thị Kiều Anh, người thầy tận tình hướng dẫn, dành nhiều thời gian tâm huyết giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới Ban Giám hiệu, phòng Quản lý đào tạo sau đại học, đặc biệt thầy cô giáo giảng dạy mơn Hóa phân tích Độc chất - Trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện cho trau dồi kiến thức kinh nghiệm q báu suốt q trình học tập trường trình thực luận văn Tôi chân thành cảm ơn Ban Giám đốc tồn thể cán khoa Kiểm nghiệm Đơng dược - Dược liệu Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc, mỹ phẩm, thực phẩm Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi tơi hồn thành khóa học thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình, tồn thể bạn bè ln giúp đỡ động viên tơi q trình học tập nghiên cứu Hà Nội, Ngày 12 tháng năm 2021 Học Viên Đàm Thị Thu MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN ……………………………………………… 1.1 Tổng quan Notoginsenosid R1 ginsenosid …………… 1.1.1 Nguồn gốc ……………………………………………………… 1.1.2 Đặc điểm tính chất tác dụng ………………………………… 1.1.2.1 Notoginsenosid R1 ……………………………………… 1.1.2.2 Ginsenosid Rg1 ……………………………………………… 1.1.2.3 Ginsenosid Re ……………………………………………… 1.1.2.4 Ginsenosid Rb1 ……………………………………………… 10 1.2 Các nghiên cứu định lượng notoginsenosid R1 ginsenosid 1.2.1 Định lượng notoginsenosid R1 ginsenosid số chuyên luận Dược điển ………………………………………………… 12 12 1.2.2 Các nghiên cứu khác …………………………………………… 18 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ……… 22 2.1 Đối tượng phương tiện nghiên cứu ………………………… 22 2.1.1 Phương tiện nghiên cứu ………………………………………… 22 2.1.1.1 Chất chuẩn …………………………………………………… 22 2.1.1.2 Dung mơi, hóa chất …………………………………………… 22 2.1.1.3 Thiết bị, dụng cụ ……………………………………………… 22 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu …………………………………………… 23 2.1.2.1 Trong thẩm định phương pháp phân tích …………………… 23 2.1.2.2 Trong nghiên cứu mẫu thực ……………………………… 24 2.1.2.3 Dung dịch chuẩn……………………………………………… 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu ………………………………………… 24 2.2.1 Xây dựng quy trình phân tích …………………………………… 24 2.2.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký …………………………………… 24 2.2.1.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu ……………………………… 25 2.2.2 Thẩm định quy trình phân tích …………………………………… 25 2.2.2.1 Xác định độ đặc hiệu ………………………………………… 25 2.2.2.2 Độ thích hợp hệ thống …………………………………… 26 2.2.2.3 Khoảng tuyến tính đường chuẩn …………………………… 26 2.2.2.4 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) …… 27 2.2.2.5 Độ ……………………………………………………… 27 2.2.2.6 Độ xác phương pháp ……………………………… 28 2.2.3 Ứng dụng phương pháp phân tích số mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe chứa notoginsenosid R1 ginsenosid …………………… 28 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu ……………………………………… 29 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ………………………………… 30 3.1 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng Notoginsenosid R1, ginsenosid Rg1, Rb1, Re TPBVSK HPLC …………… 3.1.1 30 Xây dựng quy trình phân tích ………………………………… 30 3.1.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký …………………………………… 30 3.1.1.2 Khảo sát quy trình xử lý mẫu ……………………………… 34 3.1.2 39 Thẩm định quy trình phân tích ……………………………… 3.1.2.1 Độ đặc hiệu …………………………………………………… 39 3.1.2.2 Độ thích hợp hệ thống …………………………………… 42 3.1.2.3 Khoảng tuyến tính …………………………………………… 43 3.1.2.4 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ)…… 45 3.1.2.5 Độ ……………………………………………………… 46 3.1.2.6 Độ xác ………………………………………………… 49 3.2 Ứng dụng phương pháp phân tích số mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe chứa chất phân tích …………………………………………… Chương BÀN LUẬN ……………………………………………… 52 57 4.1 Về đối tượng phương pháp nghiên cứu ……………………… 57 4.2 Về kết thẩm định phương pháp ……………………………… 58 4.3 Về ứng dụng phân tích mẫu thực tế ……………………………… 60 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt TPBVSK AOAC HPLC Thực phẩm bảo vệ sức khỏe Association of Official Hiệp hội nhà hố phân Analytical Community tích thống High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao High performance thin layer Sắc ký lớp mỏng hiệu HPTLC chromatography cao UHPLC- Ultra-high performance liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu MS/MS chromatography tandem mass ghép khối phổ hai lần spectrometry LC- Liquid chromatography tandem Sắc ký lỏng ghép khối phổ MS/MS mass spectrometry hai lần LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng MS Mass spectrometry Khối phổ PDA Photo diode Array Mảng diod quang DAD Diode array Detector Detector chuỗi diod UV-VIS Ultraviolet-Visible Tử ngoại khả kiến CAD Charged Aerosol Detectors C18 Octadecyl ELSD Evaporative light Detector phun sương tích điện scattering Detector tán xạ ánh sáng detector ALP Alkaline phosphatase MAPK mitogen-activated protein kinase bay TLR4 Toll-like receptor TNF-α Tumor necrosis factors PEDF Pigment epithelium-derived factor RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối RSDr RSDR Repeatability relative standard Độ lệch chuẩn tương đối deviation lặp lại Reproducibility relative standard Độ lệch chuẩn tương đối tái deviation µl Microlit ACN Acetonitril TB lặp Trung bình SPE Solid phase extraction ISO International Organization for Tổ chức tiêu chuẩn hoá Standardization Chiết pha rắn quốc tế DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên Bảng Trang Bảng 1.1 Saponin dẫn chất 20(S) protopanaxadiol Bảng 1.2 Saponin dẫn chất 20(S) protopanaxatriol Bảng 1.3 Định lượng notoginsenosid R1 ginsenosid số chuyên luận Dược điển Bảng 2.1 12 Độ thu hồi chấp nhận, độ lệch chuẩn tương đối lặp lại (RSDr), độ lệch chuẩn tương đối tái lặp (RSDR) 28 nồng độ khác Bảng 3.1 Chương trình dung mơi 30 Bảng 3.2 Kết khảo sát độ đặc hiệu 41 Bảng 3.3 Kết kiểm tra độ thích hợp hệ thống 42 Bảng 3.4 Kết thẩm định khoảng tuyến tính phương pháp 44 Bảng 3.5 Kết thẩm định LOD, LOQ phương pháp 46 Bảng 3.6 Kết khảo sát độ phương pháp 48 Bảng 3.7 Kết khảo sát độ lặp lại 50 Bảng 3.8 Kết khảo sát độ xác trung gian 51 Bảng 3.9 Kết phân tích mẫu thực tế 52 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên Hình Hình Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo genin saponin triterpenoid tetracyclic Trang Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo Notoginsenosid R1 Hình 1.3 Cơng thức cấu tạo Ginsenosid Rg1 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo Ginsenosid Re Hình 1.5 Cơng thức cấu tạo Ginsenosid Rb1 10 Hình 3.1 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn (phía trên), dung dịch thử dạng dầu (phía dưới) theo chương trình pha động Hình 3.2 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn (phía trên), dung dịch thử dạng dầu (phía dưới) theo chương trình pha động Hình 3.3 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn (phía trên), dung dịch thử dạng dầu (phía dưới) theo chương trình pha động 31 32 32 Hình 3.4 Biểu đồ khảo sát quy trình xử lý mẫu 36 Hình 3.5 Biểu đồ khảo sát nhiệt độ chiết mẫu 37 Hình 3.6 Sơ đồ quy trình chiết mẫu 38 Hình 3.7 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn hỗn hợp 39 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu (trên) mẫu tự tạo (dưới) dạng rắn 40 Hình 3.9 Sắc ký đồ mẫu (trên) mẫu tự tạo (dưới) dạng dầu 40 Hình 3.10 Sắc ký đồ mẫu (trên) mẫu tự tạo (dưới) dạng lỏng Hình 3.11 Đồ thị khảo sát tương quan tuyến tính nồng độ diện tích pic chất phân tích 41 45 Hình 3.12 Sắc ký đồ mẫu viên nang cứng (M1) 54 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu cao lỏng (M2) 54 Hình 3.14 Sắc ký đồ mẫu viên nang mềm (M3) 55 Hình 3.15 Sắc ký đồ mẫu viên nang mềm (M5) 55 Hình 3.16 Sắc ký đồ mẫu Viên nang mềm (M15) 55 ... notoginsenosid R1 số ginsenosid thực phẩm bảo vệ sức khỏe sắc ký lỏng hiệu cao? ?? với mục tiêu sau: Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng notoginsenosid R1 số ginsenosid (Rg1, Re, Rb1) thực phẩm bảo vệ sức. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐÀM THỊ THU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NOTOGINSENOSID R1 VÀ MỘT SỐ GINSENOSID TRONG THỰC PHẨM BẢO VỆ SỨC KHỎE BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO. .. bột, lỏng? ?? chưa có phương pháp cơng bố Vì việc xây dựng phương pháp đáp ứng yêu cầu quy định hành để xác định hàm lượng notoginsenosid R1 ginsenosid mẫu TPBVSK cần thiết Phương pháp sắc ký lỏng hiệu