Phƣơng pháp đã xây dựng đƣợc áp dụng để xác định hàm lƣợng SB, DSB và DDSB trong 30 mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân trên thị trƣờng. Kết quả cho thấy phát hiện 02/7 mẫu trà túi lọc có chứa sibutramine, trong đó có 01 mẫu chứa đồng thời sibutramine và desmethyl sibutramine, 06/11 mẫu viên nang cứng có chứa sibutramine, 03 mẫu đồng thời chứa sibutramine và desmethyl sibutramine. Sắc đồ các mẫu có chứa sibutramine đƣợc thể hiện ở hình 3.19 và 3.20.
Hình 3.20. Sắc đồ các mẫu chứa desmethyl sibutramine
Kết quả định lƣợng SB, DSB và DDSB trong các mẫu thực phẩm chức năng hỗ trợ giảm cân đã đƣợc tiến hành lấy và phân tích đƣợc trình bày trong bảng 3.12.
Bảng 3.12. Kết quả định lượng SB, DSB và DDSB một số mẫu TPBVSK STT Quy cách Tên sản phẩm SB (mg/g) DSB (mg/g) DDSB (mg/g) 1 Trà Slimutea KPH KPH KPH 2 Trà Đại Gia KPH KPH KPH 3 FA2 KPH KPH KPH 4 Hera + 5,248 1,642 KPH 5 Tana porn KPH KPH KPH 6 Fasmine Tea 0,817 KPH KPH
7 Trà giảm cân Kingphar slim KPH KPH KPH
8 Viên nang mềm Giảm cân PV KPH KPH KPH 9 Change Body KPH KPH KPH 10 Viên nang cứng
Viên uống giảm cân
Sevendays 11,584 0,265 KPH
11 Slim Phục Linh 16,508 0,420 KPH
12 Minhon 10 KPH KPH KPH
13 Giảm béo Phục Linh Sao
Việt KPH KPH KPH
14 Áo Đình KPH KPH KPH
15 New Lishow 45 viên KPH KPH KPH
16 New Lishow 24 viên KPH KPH KPH
17 Slimatic collagen KPH KPH KPH
18 EVA 31,471 1,127 KPH
19 Super model KPH KPH KPH
Ghi chú: KPH - Không phát hiện
Qua bảng kết quả phân tích mẫu thực tế cho thấy có 06 mẫu viên nang cứng, 02 mẫu trà túi lọc có chứa SB, hàm lƣợng nằm trong khoảng 0,817 – 31,473 mg/g và 03 mẫu viên nang cứng, 01 mẫu trà túi lọc chứa DSB với hàm lƣợng nằm trong khoảng 0,265 - 1,642 mg/g; không phát hiện mẫu viên nang mềm chứa SB, DSB và DDSB (do hàm lƣợng nằm dƣới giới hạn phát hiện của phƣơng pháp đã đƣợc thẩm định). Nhƣ vậy, số lƣợng mẫu chứa SB chiếm 23,3% tổng số mẫu đƣợc phân tích, số lƣợng mẫu chứa DSB chiếm 13,3% tổng số mẫu kiểm nghiệm. Mẫu chứa SB tập trung vào dạng viên nang cứng. Qua kết quả nghiên cứu cũng cho thấy các nhà sản xuất cũng đã trộn thêm dẫn xuất của sibutramine vào trong sản phẩm của mình, tuy chƣa phát hiện đƣợc DDSB trong các mẫu, nhƣng phƣơng pháp xây dựng có ý nghĩa đi trƣớc trong nghiên cứu, đón đầu phát hiện các dẫn xuất của SB để kịp thời khuyến cáo cho ngƣời sử dụng.
21 Venus KPH KPH KPH 22 Vin Slim KPH KPH KPH 23 Miszz eva KPH KPH KPH 24 Change Body KPH KPH KPH 25 Betty Slim KPH KPH KPH 26 Forkilon mega KPH KPH KPH 27 Slim night 7,392 KPH KPH 28 Betty slim KPH KPH KPH 29 Đệ nhất dáng KPH KPH KPH 30 Green data 15,088 KPH KPH
KẾT LUẬN
Sau một thời gian nghiên cứu, luận văn thu đƣợc các kết quả sau:
1. Đã khảo sát và lựa chọn đƣợc điều kiện LC-MS/MS để phân tích đồng thời SB, DSB và DDSB: Cột tách sắc ký C18 (100 mm x 2,1 mm, 3,5 µm); pha động là gradient kênh A: ACN, kênh B: Ammoni acetate 2 mM trong acid formic 0,1%, tốc độ dòng 0,4 mL/phút.
2. Đã khảo sát đƣợc qui trình chiết và loại tạp màu cho mẫu: chiết lặp 2 lần mỗi lần bằng 20mL MeOH, rung siêu âm 15 phút; loại tạp bằng 25 mg than hoạt tính cho 15ml dịch chiết.
3. Đã thẩm định phƣơng pháp xác định đồng thời Sibutramine, Desmethylsibutramine và Didesmethylsibutramine với các kết quả:
Phƣơng pháp có tính đặc hiệu đạt yêu cầu.
Khoảng đƣờng chuẩn của cả 03 chất phân tích nằm trong khoảng nồng độ từ 5 ng/mL - 100 ng/mL, với hệ số tƣơng quan cao
Giới hạn phát hiện là 0,05 µg/kg, giới hạn định lƣợng là 0,15 µg/kg đối với SB; giới hạn phát hiện là 0,1 µg/kg, giới hạn định lƣợng là 0,3 µg/kg đối với DSB và DDSB trên cả 03 nền mẫu viên nang cứng, viên nang mềm và trà túi lọc.
Độ lặp lại và độ thu hồi của phƣơng pháp tốt với RSD% < 15% và độ thu hồi đạt đƣợc từ 84,9 đến 109,5% ở mức thêm chuẩn 10 µg/kg, đáp ứng yêu cầu của AOAC.
4. Đã áp dụng quy trình đƣợc thẩm định để xác định hàm lƣợng sibutramine, desmethyl sibutramine và didesmethyl sibutramine trộn trái phép trong 30 mẫu thực phẩm bảo vệ sức khỏe hỗ trợ giảm cân trên địa bàn Hà Nội. Kết quả cho thấy có 06/ 21 mẫu viên nang cứng, 02/7 mẫu trà túi lọc có chứa sibutramine, hàm lƣợng nằm trong khoảng 0,817 – 31,473 mg/g, 03/21 mẫu viên nang cứng, 01/7 mẫu trà túi lọc chứa desmethyl sibutramine với hàm lƣợng nằm trong khoảng 0,265 - 1,642 mg/g; không phát hiện mẫu viên nang mềm chứa sibutramine, desmethyl sibutramine và didesmethyl sibutramine.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1. Viện kiểm nghiệm ATVSTP Quốc Gia (2010), "Thẩm định phương pháp
trong phân tích hoá học và vi sinh vật", Hà Nội, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà
Nội.
2. Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Xuân Trung, Nguyễn Văn Ri (2003), ―Các phương pháp phân tích công cụ”, Nhà Xuất Bản Đại Học Quốc Gia Hà Nội.
Tài liệu tiếng Anh
3. Juan M Aceves-Hernández, Inés Nicolás Vázquez, Jaime Hinojosa-Torres, Guillermo Penieres Carrillo, Gabriel Arroyo Razo, và René Miranda Ruvalcaba (2013), "Sibutramine characterization and solubility, a theoretical study", Journal of Molecular Structure, 1038, pp. 163-169.
4. European Medicines Agency (2010), "European Medicines Agency
recommends suspension of marketing authorisation for sibutramine", 14(2),
pp. 11-13.
5. Shigeki Akamatsu và Takao Mitsuhashi (2013), "Simultaneous determination of pharmaceutical components in dietary supplements for weight loss by capillary electrophoresis tandem mass spectrometry", Drug testing and analysis, 6, pp. 15-23.
6. Etil Ariburnu, Mehmet Fazli Uludag, Huseyin Yalcinkaya, và Erdem Yesilada (2012), "Comparative determination of sibutramine as an adulterant in natural slimming products by HPLC and HPTLC densitometry", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 64, pp. 77-81.
7. J. Bhatt, B. Shah, S. Kambli, G. Subbaiah, S. Singh, và S. Ameta (2007), "Rapid and sensitive method for the determination of sibutramine active metabolites in human plasma by reversed-phase liquid chromatography- tandem mass spectroscopy", J Chromatogr Sci, 45 (2), pp. 91-96.
8. Maciej J Bogusz, Huda Hassan, Eid Al-Enazi, Zuhour Ibrahim, và Mohammed Al-Tufail (2006), "Application of LC–ESI–MS–MS for detection of synthetic adulterants in herbal remedies", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 41(2), pp. 554-564.
9. J. Chen, W. Lu, Q. Zhang, và X. Jiang (2003), "Determination of the active metabolite of sibutramine by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 785(2), pp. 197-203.
10. Y Chen, L Zhao, F Lu, Y Yu, Y Chai, và Y Wu (2009), "Determination of synthetic drugs used to adulterate botanical dietary supplements using QTRAP LC-MS/MS", Food Additives and Contaminants, 26(5), pp. 595-
603.
11. Marlus Chorilli, Rudy Bonfilio, Renata Chicarelli, và Herida Salgado (2011), "Development and validation of an analytical method by RP-HPLC for quantification of sibutramine hydrochloride in pharmaceutical capsules",
Anal. Methods, 3, pp. 985-990.
12. Li Ding, Xinyu Hao, Xin Huang, và Shengqiang Zhang (2003), "Simultaneous determination of sibutramine and its N-desmethyl metabolites in human plasma by liquid chromatography–electrospray ionization–mass spectrometry: Method and clinical applications", Analytica chimica acta,
492(1-2), pp. 241-248.
13. FDA (2010),"The FDA August 2010 drugs safety update", Journal of Pharmaceutical Analysis, pp. 152-155.
14. Stanley D Glick, Renee E Haskew, Isabelle M Maisonneuve, Jeffrey N Carlson, và Thomas P Jerussi (2000), "Enantioselective behavioral effects of sibutramine metabolites", European journal of pharmacology, 397(1), pp.
93-102.
15. Hayun Hayun, Baitha P Maggadani, và Nurul Amalina (2016), "Determination of sibutramine adulterated in herbal slimming products using TLC densitometric method", Indonesian Journal of Pharmacy, 27(1), p. 15.
16. Ziqiang Huang, Song Xiao, Dan Luo, Bo Chen, và Shouzhuo Yao (2008), "Simultaneous determination of sibutramine and N-di-desmethylsibutramine in dietary supplements for weight control by HPLC—ESI-MS", Journal of chromatographic science, 46(8), pp. 707-711.
17. Julia Jung, Maren Hermanns-Clausen, và Wolfgang Weinmann (2006), "Anorectic sibutramine detected in a Chinese herbal drug for weight loss",
Forensic science international, 161(2-3), pp. 221-222.
18. Tarita Kamardi, Irda Fidrianny, và A. Musadad (2016), "Development of analytical method for identification of sibutramine hydrochloride in traditional medicine using solid phase extraction: High-performance liquid chromatography", Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research,
9, pp. 201-209.
19. S Kanan, IA Abu-Yousef, C Gunasekar, N Abdo, và S Narasimhan (2009), "Detection and quantification of synthetic drugs in herbal slimming formula", Eur J Sci Res, 34, pp. 348-357.
20. W. Kang, K. Bae, và K. Noh (2010), "Enantioselective determination of sibutramine and its active metabolites in human plasma", J Pharm Biomed Anal, 51(1), pp. 264-267.
21. Marjan Khazan, Mehdi Hedayati, Farzad Kobarfard, Sahar Askari, Fereidoun Azizi (2014), "Identification and determination of synthetic pharmaceuticals as adulterants in eight common herbal weight loss supplements", Iranian Red Crescent Medical Journal, 16(3), pp. 17-21. 22. S. H. Kim, J. Lee, T. Yoon, J. Choi, D. Choi, D. Kim, và S. W. Kwon
(2009), "Simultaneous determination of anti-diabetes/anti-obesity drugs by LC/PDA, and targeted analysis of sibutramine analog in dietary supplements by LC/MS/MS", Biomed Chromatogr, 23(12), pp. 1259-1265.
23. Kuo-Chih Lai, Yi-Chu Liu, Mu-Chang Tseng, Yun-Lian Lin, và Jer-Huei Lin (2007), "Isolation and identification of a sibutramine analogue in a healthy food for weight loss", Journal of Food and Drug Analysis, 15(1),
24. Jianhui Li, Zhaohui Zhang, Xin Liu, Hua Yan, Shen Han, Haiyan Zhang, Shan Zhang, và Jia Cheng (2014), "Analysis of Fourteen beta-Agonists in Weight-Reducing Dietary Supplements Using QuEChERS-Based Extraction Followed by High Resolution UHPLC-MS", Food Analytical Methods, 7, pp. 25-28.
25. Yang Li, Feng Xue, Yuan Wang, Yong Xue, và Cheng-Jun Sun (2011), "Simultaneous determination of seven adulterants in slimming functional foods by high performance capillary electrophoresis", Chin. J. Anal. Chem,
39, pp. 1716-1720.
26. Daniela F Maluf, Paulo V Farago, Sandra MW Barreira, Carlos F Pedroso, và Roberto Pontarolo (2007), "Validation of an analytical method for determination of sibutramine hydrochloride monohydrate in capsules by UV- vis spectrophotometry", Latin American Journal of Pharmacy, 26(6), p. 909. 27. Caroline Mathon, Anita Ankli, Eike Reich, Stefan Bieri, và Philippe Christen
(2014), "Screening and determination of sibutramine in adulterated herbal slimming supplements by HPTLC-UV densitometry", Food Additives & Contaminants: Part A, 31(1), pp. 15-20.
28. Lung National Heart, and Blood Institute (1998), "Clinical Guidelines on the Identification, Evaluation, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults", National Heart, Lung, and Blood Institute, 6, pp. 29-31.
29. Lung National Heart, and Blood Institute (2013), "Managing Overweight and Obesity in Adults: Systematic Evidence Review from the Obesity Expert Panel", National Heart, Lung, and Blood Institute, 12, pp. 37-39.
30. World Health Organization (2000), "Obesity: preventing and managing the global epidemic", World Health Organization, 4, pp. 12-14
31. Panadda Phattanawasin, Uthai Sotanaphun, Tasamaporn Sukwattanasinit, Jariya Akkarawaranthorn, và Sarunyaporn Kitchaiya (2012), "Quantitative determination of sibutramine in adulterated herbal slimming formulations by TLC-image analysis method", Forensic Science International, 219(1-3), pp.
32. Venkata Suresh Ponnuru, BR Challa, và RamaRao Nadendla (2012), "Quantification of sibutramine and its two metabolites in human plasma by LC–ESI-MS/MS and its application in a bioequivalence study", Journal of pharmaceutical analysis, 2(4), pp. 249-257.
33. T Radhakrishna, Ch Lakshmi Narayana, D Sreenivas Rao, K Vyas, và G Om Reddy (2000), "LC method for the determination of assay and purity of sibutramine hydrochloride and its enantiomers by chiral chromatography",
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 22(4), pp. 627-639.
34. Herve Rebiere, Pauline Guinot, Corinne Civade, P-A Bonnet, và Alain Nicolas (2012), "Detection of hazardous weight-loss substances in adulterated slimming formulations using ultra-high-pressure liquid chromatography with diode-array detection", Food Additives & Contaminants: Part A, 29 (2), pp. 161-171.
35. S. H. Roh, Y. P. Kang, S. Park, Y. Huh, J. Lee, J. H. Park, D. Kim, và S. W. Kwon (2011), "Determination of tadalafil and N-desmethylsibutramine in health and dietary supplements using ultra-performance liquid chromatography (UPLC) coupled with quadrupole-time-of-flight mass spectrometry (Q-TOF MS)", Food Addit Contam Part A Chem Anal Control
Expo Risk Assess, 28(11), pp. 1475-82.
36. Sabina Strano‐Rossi, Cristiana Colamonici, và Francesco Botrè (2007), "Detection of sibutramine administration: a gas chromatography/mass spectrometry study of the main urinary metabolites", Rapid Communications
in Mass Spectrometry: An International Journal Devoted to the Rapid Dissemination of Up‐to‐the‐Minute Research in Mass Spectrometry, 21(2),
pp. 79-88.
37. A. Suthar, S. Dubey, và Sanjay Patel (2009), "A Validated Specific Reverse Phase Liquid Chromatographic Method for the estimation of Sibutramine Hydrochloride Monohydrate in bulk drug and capsule dosage forms",
38. Dan Wang, Ranru Man, Ming Shu, Huitao Liu, Yuan Gao, và Feng Luan (2016), "Detection of sibutramine and phenolphthalein in functional foods using capillary electrophoresis", Analytical Methods, 8(3), pp. 621-626. 39. H Wang, Y Wu, Y Zhao, W Sun, L Ding, B Guo, và B Chen (2012), "Rapid
screening of illicit additives in weight loss dietary supplements with desorption corona beam ionisation (DCBI) mass spectrometry", Food
Additives & Contaminants: Part A, 29(8), pp. 1194-1201.
40. Juan Wang, Bo Chen, và Shouzhuo Yao (2008), "Analysis of six synthetic adulterants in herbal weight-reducing dietary supplements by LC electrospray ionization-MS", Food additives and contaminants, 25(7), pp.
822-830.
41. Helena M Yano, Fernanda F Farias, Marcelo B Del Bianco, và Luz M Trujillo (2013), "Determination of the sibutramine content of dietary supplements using LC-ESI-MS/MS", Latin American Journal of Pharmacy,
32(8), pp. 1164-1169.
42. Zhou Yu, Qiang Wei, Qingsheng Fan, và Chunhua Wan (2010), "A simple and convenient method for simultaneous determination of four major species of illegal additives in slimming health food", Journal of liquid chromatography & related technologies, 33(4), pp. 452-461.
43. YP Yuen, CK Lai, WT Poon, SW Ng, Albert YW Chan, và Tony WL Mak (2007), "Adulteration of over-the-counter slimming products with pharmaceutical analogues-an emerging threat", Hong Kong Medical Journal, 13(3), p. 216.
44. Peng Zou, Sharon Sze‐Yin Oh, Kin‐Har Kiang, Min‐Yong Low, và Bosco Chen Bloodworth (2007), "Detection of sibutramine, its two metabolites and one analogue in a herbal product for weight loss by liquid chromatography triple quadrupole mass spectrometry and time‐of‐flight mass spectrometry",
Rapid Communications in Mass Spectrometry: An International Journal Devoted to the Rapid Dissemination of Up‐to‐the‐Minute Research in Mass Spectrometry, 21( 4), pp. 614-618.
PHỤ LỤC
Phụ lục 1. Các điều kiện MS/MS để phân tích SB, DSB và DDSB
PL1. Bảng thông số về điều kiện MS/MS phân tích SB, DSB và DDSB
Phụ lục 2. Các thông số tối ƣu của MS để phân tích SB, DSB và DDSB
Phụ lục 3. Kết quả khảo sát số lần chiết
PL3.1. Kết quả độ thu hồi của SB sau 1 lần chiết, 2 lần chiết, 3 lần chiết
PL3.3. Kết quả độ thu hồi của DDSB sau 1 lần chiết, 2 lần chiết, 3 lần chiết
Bảng PL 3.1. Độ thu hồi của SB, DSB, DDSB trên nền viên nang cứng
Số lần chiết SB DSB DDSB
Chiết 1 lần 60,4 73,4 70,1
Chiết 2 lần 89,3 82,2 82,7
Chiết 3 lần 91,5 85,1 82,9
Bảng PL3.2. Độ thu hồi của SB, DSB, DDSB trên nền viên nang mềm
Số lần chiết SB DSB DDSB
Chiết 1 lần 69,8 73,8 72,1
Chiết 2 lần 86,5 82,3 79,3
Bảng PL4.3. Độ thu hồi của SB, DSB, DDSB trên nền trà túi lọc
Số lần chiết SB DSB DDSB
Chiết 1 lần 69,8 73,8 72,1
Chiết 2 lần 86,5 82,3 79,3
Phụ lục 4. Danh sách các mẫu TPBVSK hỗ trợ giảm cân đƣợc
STT Quy cách Tên sản phẩm Số lô, hạn dùng
1 Trà Slimutea 160118 2 Trà Đại Gia 181902 3 FA2 200112 4 Hera + 10218 5 Tana porn 11022019 6 Fasmine Tea 23062019
7 Trà giảm cân Kingphar
slim 200419
8 Giảm cân PV 10210
9
Viên nang mềm
Change Body 20918
10 Viên uống giảm cân
Sevendays 20170318
11 Slim Phục Linh 20180203
12 Minhon 10 130920
13 Giarm béo Phục Linh
Sao Việt 20181219
14 Áo Đình 110620
15 New Lishow 45 viên 20101
16 New Lishow 24 viên 200611
17 Slimatic collagen 18092019
18 EVA 20180605
19 Super model 190408
20 DETOX slimming 20181106
21
Viên nang cứng Venus 210808
STT Quy cách Tên sản phẩm Số lô, hạn dùng 23 Miszz eva 200307 24 Change Body 20918 25 Betty Slim 2019061 26 Forkilon mega 11017