vSo sánh hình thái của VN11-F0045 với các loài gần gũi
Trong khi nghiên cứu đa dạng vi nấm phân lập ở rừng Quốc gia Phú Quốc, chúng tôi đã phân lập được một chủng nấm có hình dạng đặc biệt, gồm một trục chính hình dấu hỏi và 3 nhánh ở phần đỉnh trục chính (Hình 3.9a, 3.10). Hình dạng chủng nấm này
đã được ghi chú là nấm mới tìm thấy ở lá cây mục vùng Kobe-Nhật Bản, nhưng nó không phân lập và nuôi cấy được [114] (Hình 3.9b). Bào tử tương tự cũng đã được quan sát thấy sự tồn tại của chúng trong các mẫu lá rụng ở Malaysia [124] và Hungary [61]. Tuy nhiên các tác giả này cũng đã không nuôi cấy được chúng trên môi trường nuôi cấy và vì vậy chúng chưa được quan sát thấy sự phát sinh hình thành bào tửđể mô tả và khẳng định đó là một chi nấm mới. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã phân lập
được chủng VN11-F0045 có hình dạng bào tử tương tự bào tử mà Matsushima, Nawawi và Gonczol đã mô tả trước đó. Nhưng điểm đặc biệt là VN11-F0045 có khả
năng phát triển và hình thành bào tử trên môi trường nuôi cấy, bào tử gồm một trục chính và 3 nhánh phụ thứ cấp của VN11-F0045 khiến chúng có hình gần giống với chi
Tripospermum (Lind) Hughes (1951) hoặc Tricladiella Ando & Tubaki (1984) hay
Radiatispora Matsush. (1996).
Quá trình phát sinh bào tử của VN11-F0045 hoàn toàn khác biệt: Tricladiella K. Ando & Tubaki: sau khi trục chính và nhánh phụ hình thành, chúng dồng thời cùng phát triển kéo dài, trục chính cong hình gần giống chữ S; Radiatispora Matsush. cũng trục chính có hình đồng xu (hình tròn), nhưng kích thước phần đỉnh và phần cuối trục chính của chủng tương đối bằng nhau, trong khi VN11-F0045 có kích thước phần đỉnh
trục chính bằng 1/3 phần gố đỉnh trục chính kéo dài, phần g sự hình thành và phát sinh bào t chi đồng dạng. Hình 3.9 So sánh hình thái của a. VN11-F0045. Hình 3.10 Các giai đoạn hình thành và phát tri 2. Trục chính hình thành và nhánh ph 3. Nhánh phụ 2 hình thành,
ốc; còn chi Tripospermum (Lind) S. Hughes thì có ph n gốc ngắn hơn. Như vậy về mặt hình thái, VN11
hình thành và phát sinh bào tử và hình dạng bào tử hoàn toàn khác bi
a VN11-F0045 với chủng không thể công bố của Matsushima 1975 F0045. b. Loài không thể công bố của [114]
n hình thành và phát triển bào tử củaHamatispora phuquocensis
c chính hình thành và nhánh phụ thứ nhất hình thành, 2 hình thành, 4,5. Bào tử trưởng thành, bar 10 μm.
(Lind) S. Hughes thì có phần t hình thái, VN11-F0045 có hoàn toàn khác biệt so với các Matsushima 1975 Hamatispora phuquocensis μm.
v Xây dựng cây phát sinh chủng loại dựa vào trình tự ADNr 28S đoạn D1D2
Hình 3.11 Cây phát sinh chủng loại giữa VN11-F0045 và các loài có mối quan hệ họ hàng gần dựa vào trình tự ADNr 28S đoạn D1D2
SAC|Lipomyces|1323|
Byssonectria terrestAY500531
Isthmolongispora lanceata NBRC1009 Triscelophorus acuminatus NBRC3123 VN11-F0045 Hamatisporaphuquocensis 100 VN05-0002-Radiatisporasp. VN08F0122-Tridentaria sp. Spirosphaera minuta HQ696659
Anungitopsis speciosa EU035401
PezizavesiculosaAF378367
94
Boudiera dennisii AY500529
100
85 98
100 54
Tubeufia cereaAY856907
Hysteropatella claviAY541493
Botryosphaeria luteaAY928043
Phoma herbarumAY293790
Trematosphaeria heterospora AY016369
Cochliobolus heterosAY544645
68
Pleomassaria sipariaAY004341
88
LojkaniaenaliaAY016363
92 100
Tripospermum myrtiGU323216
Mycosphaerella punctDQ470968
Aureobasidium pullulanAJ507454
100
60 81
Cryptosporiopsis eri AY442323
NeofabraeaHydrocina chaetocladorium malicortiAY544662AY789412
LachnumAY544646
Hyaloscypha daedalea Hyaloscypha vitreola EU940156AY789415
74
99 Lambertella tubulosa AY616237
62
100 69
Sclerotinia-sclerotia AF431951
90
Porpidia melinodes DQ314985
DQ782910|
Stictis radiataAY341361
94
100 94
VN05-0024_Tricladiella
Capronia pilosellaDQ823099
Dermatocar ponminiatAY584644
100
Arachnomyces minimusAB075350
Xanthothecium peruviAB053453
EurotiumrubrumU29556
100
Coccidioi desimmitisAY176713
100 98 92 Trichoderma amazonic JN939811 Hypocrea lixiiJN938866 Trichoderma aggressiJN939837 100
Melanconiella spodiaAF408370
Diaporthepu stulata AF408358
Diamantinia citrinaAY346278
CainiagraminisAF431949
100 63
100
Chaetomium sphaeraleAF286407
Farrowia longicolleaAF286408
Cercophora macrocarpAY780060
98
Schizothecium curvisAY346300
98 76
Melanochaeta aotearo AF466082
Chaetosphaeria racibAY436402
88 86 100 76 93 100 0.02
Kết quả phân tích trình tựu gen ADNr 28S đoạn D1D2 của VN11-F0045 bằng chương trình Blast search cho thấy độ tương đồng giữa chủng và các loài gần gũi nhất quá thấp: loài gần gũi nhất là Spirosphaera minuta GenBank HQ696659, độ
tương đồng = 486/569(85.4%), Gaps= 20/569(3.5%), và Anungitopsis speciosa
(GenBank EU035401; Identities = 483/565(85.5%), Gaps = 20/565(3.5%). Khi kiểm tra hình thái của các loài nấm có độ tương đồng về trình tự gen cao nhất thì thấy rằng giữa VN11-F0045 và các loài này có hình thái khác biệt nhau hoàn toàn: chi
Spirosphaera có bào tử hình xoắn ốc, cuộn chặt nhiều lần thành một búi trông giống búi sợi lưới thành hình cầu, còn Anungitopsis có bào tử hình trụ thuôn dài [156].
Như vậy, xét cả về các đặc điểm hình thái và phân tích trình tự ADNr28S đoạn D1D2, VN11-F0045 hoàn toàn có thể được kết luận VN11- F0045 là một chi mới.Tuy nhiên theo nghiên cứu của chúng tôi, VN11-F0045 có hình thái tương tự
một số chi nấm ưa nước như (Tripospermum, Tricladiella và Radiatispora), những chủng nấm này chưa có trình tự trong ngân hàng gen thế giới. Nhưng trong nghiên cứu này chúng tôi đã có cơ hội phân lập và phân tích trình tự ADNr 28S của các chi
đó, vì vậy chúng tôi đã tiến hành xây dựng cây phát sinh chủng loại dựa vào trình tự
ADNr 28S đoạn D1D2 của VN11-F0045 với các loài có hình thái tương đồng. Kết quả cho thấy VN11-F0045 nằm trên một nhánh riêng biệt, thuộc lớp Pezizomycetes, loài có vị trí trên cây chủng loại phát sinh gần gũi nhất đối với chúng là
Triscelosporus acuminatus và Radiatispora yuanaensis (Hình 3.11).