I. Đ iều tra sự có inặt củ a en zim giới hạn ở m ột số cluing vi siiilì vật pliAn
lậ p ở Việt N a m
N h ằm tìm kiếm các chủng vi sinh vật chứa enzim giới hạn, chúng lôi tiến hành điểu Ira sơ bộ một số chủng vi khuẩn và xạ kliuíỉn phân lạp ở Viẹt Nỉiin.
20 chủng vi sinh được nuôi cấy trên đĩa thạch trong môi trường Isịi 4 để thu lấv khuẩn lạc. Một trong nhũng hình ảnh vi khuẩn được nuôi cấy trên cĩĩa (hạch trong môi trường Isp 4 được thể hiện ở hình 1
Sau khi các k h u ẩ n lạc đã m ọ c trên đĩa thạch (hình 1), thu lííy vi sinli vạt và chuyển vào nuôi cấy trong môi trường dịch thể LB. Các tế bào vi sinh VÍU nuôi trong môi trường dịch thể LB được sử dụng làm nguồn cung cấp ciư.im. Với phương pháp này, cần phải tăng sinh khối tế bào trong ít nhất !à 1000 ml môi trường LB. Các bình nuôi cấy giữ ở 3 7 ° c và phải được lắc liẽn tục. Tuv thuộc từng ch ủn g m à thời gian nuôi cấy trong môi trường khác nhau. Có chủng chỉ nuôi trong 24 giờ, có nh ững chủng khác phải nuôi cấy trong 36 giờ đến 48 giờ mới thu đủ sinh khối để thí nghiệm. Thu sinh khối bằng cách Iv tâm và ch o tan lại trong 5 ml đ ệ m phá t ế bào. Cuối cùng chỉ dùng 30 fil dịch thô đã pha loãng 1/81 lần để xác định enzim giới hạn. Chúng tôi cũng nuôi ch ủng trên môi trường đĩa thạch và thu sinh khối trực tiếp. Bước thí nghiệm này đơn giản hơn so với phương pháp dịch lỏng vì không phải ly tam nhiều lần để thu sinh khối. Mặt khác, đĩa thạch dược ủ trong tủ ổn nliiệl bíio đảm 37° c, vi khuẩn được tăng diện tích tiếp xúc với không khí nên phát triển tôi hơn và đặc biệt trong một thời gian ngắn (24 giờ) có thể thu dược sinli khỏi de xác định enzirn