- Chỉ số OD
2.3.3.Sắc ký trao đổi ion trên cột DEAE Xenluloza
Dịch chiết rút thỏ được trực tiếp tinh sạch bằng phương pháp qua cột trao đổi ion. T h ử ng h iệ m sơ bộ được tiến hành trên cột D E A E - Xenluloza với
phương pháp đđy phẩn hấp phụ bằng gradient nồng độ NaCI tìr 0 . 0 5 M - 1 M pha (rong đ ệm TB. Kết qu ả (hình 20) thu được 3 đỉnh protein tương (lõi sát nhau trong dỏ cỏ I đỉnh prolcin thứ 2 có hoại lính được (lảy ra khoáng nồng độ 0,15M - 0,2M. Sau đó, bước tinh sạch chính thức dược thực hiện bằng cáeli đẩy phần hấp phụ bằng đệm TB có NaC! với các nồng đọ 0 , 1M; (),2M; 0.3M; 0,4M; 0,5M; 0,6M. K ết quả thu được 6 đỉnh protein (hình 21, 22). Hoạt tính thể hiện rõ ờ dinh protein 2 đẩy ở nồng độ muối U,2M NaCI. Giong Iihir kct quả ớ mục 3 . 3 . 1.2, ứ đỉnh protein 1 có sự gắn cạnh tranh giữa RR và miclca/a không đặc hiệu và RE ở đỉnh protein 1 và 2 có thể cùng là isoschi/omcr cua
Mae 111 cùim có trong chủng vi khuẩn 5. Trong điều kiện phòng thí n g h i ê m ,
chúng tôi chí dừng lại ở bước Ihăm dò phương pháp tinh sạch, clura có khii Măng í!i sAn nghiên cứu cấu trúc để cổ thể khẳng định kêl t|ii;i mộ! c ;k h chíic chắn ỉKín.
• r ii â II d 0 :i 11 p. -
^ ____ !< ir a ---— —- Đ ã > --- ►
H ì n h 20: s ác ký qua cột DEAR - xenlu lo/a cua dịch đniM thô. Đẩy gradient nồng độ 0 .0 5M 0,6 M NaCI.
Phânđoạn
Rửa ►4 Đẩv
Hình 21: Sắc ký qua cột D E A E - xenluloza của dich chiết thỏ.
Đẩy từng bước: 0,1M, 0,2M, 0,3M, 0,4M. 0,5M, 0.6M
4 5
- r ĩ
■
Hình 22: Phổ điện di cua A D N trên gel agaroza dưới tác dụng enzym
các phân đoạn qua cột D E A E Xenluloza.
/. Phàn iỉoọn 24; 2. Phán C Ỉ O L U Ì 3 Ỉ : 3. Phán líoạn 32: 4. Phún (loạn 33: 5. Phăn (loạn 43; 6. Phan CỈOƠIÌ 54: