I, Nghiên cứu sử dụng lizozim phá màng tế bào vi khuíỉn để tách cliiêt enzim giới hạn
1. Định loại enziin giới hạn
Tro ng s ố 20 ch ủ ng vi sinh vật phân lập được điều tra sơ bộ trên dịch chiết thô và nh ận thấy ch ủn g vi khuẩn 5 có hoạt tính của enzim giới bạn. Ch úng tôi tiến hành xác định x em enzim giới hạn của chủng vi kluiẢii 5 là enzim mới hay đồng nh ận biết với enzim giới hạn nào.
Đối chiếu phổ điện đi củ a enziin phân tích từ chủng vi khuẩn 5 với các bring của ỉ i a e I!I c h ú n g tôi thấy c h ú n g hoàn toàn giống nhau (hình Ị). H oc IU là một enzim giới hạn cắt ADNẰ, tại 149 vị trí, cắt ỘXỈ 74 tại 1 1 vị In' do vây sẽ có lất nhiều băng có kích Ihước nhỏ k hôn g phát hiện được trên pho <1iện di.
1 2 4 5 6
\v ' ,'J ■ * «i • »‘
I l ì n l i 1: Phổ điện di cùa ADN Ằ cắt bởi enzim giới hạn 1 - H in d m + EcoRỈ cắt A i m Ằ; 2 - Xho I cắt A D N Ã ; 3 - Mae III cắt A D N Ằ; ... 4 - B a m H l cní A D N Ẫ; tx-.ụt ! 5 - H in d III cat A D N Ả;
r , • ị 6 - E ĩu im nghiên cứu cắt A O N Ằ.
-
Để kliẳng định chắc cliắn điều này chú ng lôi tiên hành thí nghiêm so sánh 3 pliiìii ứng cùn g một ỈLÍc: enzim đang nghiên cứu cắt ADNẰ; enzim clum'ii cat ADNA. và cá 2 enzi m cắt ADNA.. Kết quà thể hiện ở hình 2.
enzim phân tích là m ộ t isoschizomer với H a e III. Ngoài ra, chúng tôi thực hiện phản ứng với các cơ chất khác nhau: ệX 1 7 4 , p u c 118 cũng cho kết quả tương tự. The o BioLabs [36] thì Mae III có trình tự cắt như sau:
ị
5' G G c c 3'
3’ c c GG 5'
Do vậy enzi m giới hạn ở chủng vi kh uẩn 5 cũng có trình tự nhận biết và vị trí cắt n hư trên.