- Chỉ số OD
2.2.2.1 Ảnh hnỏỉiẹ c ủa nồng độN aCl trong đệm (ỉcu Ino uự protein t á c h c h i ế t
Đệm I p> ó các nong độ muôi NaCl 25tnM; 50m M; ỈOHmM; 200mM; WOmM lmnL’ I'll 7,4 va các thành phần khác cùa đệm khóng lẽ bìui vi khu;ín ilưọv chioi trong c;íc đệm liny, liên hành phíin ling v;i (liên (li. k r i qu;i nghiC’!) cứu ilưụv (lình bày (V bang 5, hình 7.
n à n g 5 : A n h l u r ớ n g n ồ n g (lọ m u ố i N a O t r o n tỉ ( l i è n i ( l òn Im ill II p m i ú n lácli th i é l pll OD m OD,„, hok'111 (niiĩ/mh 0,025 0,919 1.424 0.05 1.147 1.91 í 7/> 0,1 1.01 í 1.5.™ 7.S 0,2 1,11)7 1.90 ! ( U 0,862 1 J0X r,/i
Hình 7. Phổ điện di ảnh hướng của nồng độ muối NaCI trong đệm chiết đến khả năng cát A D N Ằ của enzym
/ - AD N Ã + dịch chiết ỡ 0,025 M NaCI; 2 - AD N Ẫ + dịch chiết ó'0,05 M NaCI; 3 - AD N Ã + dịch chiết ở 0,1 M NưCÌ; 4 - AD N / + dịch chiết ở 0,2 M NaCl; 5 - A D N À + lIỊcIi chiết ở 0,3 M NaCI.
Nhiều nghiên cứu để cập đến ánh hưởng của nồng độ muối đến hoạt độ * enzym. Có nhữ ng en zvm bị ức c h ế mạnh ở nồng độ muối lớn hơn 2 5 m M
NaCl. Ngược lại E c oR l thê hiện hoạt tính mạnh nhất ở n ồ n s độ 0.2M NaCI. Nế u ở nồng độ đêm 0,1 M NaCK EcoR\ chí còn 2 5 c-c hoạt dò. Theo bang 3 khá nàn ° chiết rút protein ờ những non II độ muối khác nhau gán như nhau. Theo dõi diện di đồ (hình 7) thấv hàm lượng muối tâng dán thì hoai tính RE
giảm ililn và 111 At hẳn ở nồng độ đệm 0,3 M NaCI. Điều này có the (lo ờ nồng (lộ N a + quá cao ức c h ế lioạt động của loại R E này. Theo BioLabs. RK H(K’ III bị ức c h ế mạnh ở nồng độ muối lớn hơn 25 m M NaCI. Theo Canior và Schinimel, 1980 ở nồng độ NaCl cao khả nãng hoà t a n c ủ a p r o t e i n c i i / . y m l ã n g
do tương tác giữa r.liững phân tử protein giảm di. Ngược lại. ớ lìồMii dò muôi thấp RE cua vị khuẩn 5 hoạt động mạnh.
Vì (lịch cliiếl lliô cẩn phải quii các bước tinh sạch dõi l)()i IIOIIIĨ (lộm Cíin phái có mội lirựng muối xác định ít nhất là 0.05 M tic tfmg khả Iifmu Ii0! 1 kci trong kỹ tIllicit sắc ký. Do vậy, chúng tồi tliẩy lằng hoạt tính RH llic hiện loi nhất ớ đ ệm I B pH 7,4; 0.05M NaCI. Chúng tôi lựa chọn đệm n;ụ c ho những (hí nghiệm liếp theo.