- Chỉ số OD
2.3.4 Điện di protein tr êng cl polyacr ilamit có SI)S (S Ỉ)S P A(Ỉ R)
Để đánh giá mức độ tinh sạch của c h ế phẩm enzym, chúng tôi tiên liànli tliện di dịch chiết thô cùng các c h ế phẩm enzym sau khi qua các bước sắc kỹ trên gcl polyacrylamit có SDS. Kết quả điện di (hình 23) cho thflv. qua mỏi hước tinh sạch các dạng protein khác đã bị loại bò đáng kể khoi protein enzym. Trong dịch chiết Ihô có nhiều loại protein và CÍÌC prolein này có trọng lượng phàn lử khá lớn tập trung ở khoảng 66.000 Da - 220.0()()Da, the hiện bằng những hăng đ ệm màu trên cột geỉ 2. Sau khi dịch chiết được trực tiếp Sik ký qua 2 cột Heparin Scpharoza CL-6B và DE AE - Xc nlulo/a c 11 lí TI tĩ lòi iiliAn (hấy CỘI heparin có khá năn e linh sạch R E vi kluián 5 hơn CÕI DỈ-AU. - Xcnluloza. Cụ thè, sổ luựng bàng thấy đuực Irên CỘI geỉ 4 nhiểu hơn so với cột gc! 3. Tuy nhiên chúng có những băng rất giông nhauvà khíí sác I1ÓI ớ k lieuinji MW lir 40.000 Da 97.tK)0Díi, có thể protein enzym có trọng lượng MVV năm Irons kliíỉáim r.ìiv? Như vây, chê phẩm enzym được tinh sạch I11()I phrin SÍIII khi s;k' ky C ị i i a cọt Heparin Sepharoza CL-6B và DEAR - Xciilulo/H.
KỐI q u ; i c u a q u á í r ì n h t i n h s ạ c h q u a 2 CỘI s ắ c k ý ( l ư ợ c t h e h i c i t t r ê n c ộ t
íícl 5 .(\1 (hình 23). Sau kill qua cột Sephacryl S-200. prolcin c n / v m (liKít linh sạch sơ bộ nhưng dã loại bỏ đirực khá nhiều loại pmiein gan Cíinli Iiímh tròn cột Heparin Scpharoza CL-6B và DEA E - Xenluloza ( CỘI gcl 5). ( ụ Ihc. s;m
phẩm sắc ký qua CỘI Heparin Scpharoza, dã qua mội bưov tinh sạch qua cnt
Sepliacrvl. cho một băng prolcin khá sắc nét chứng ló rang RR vi klni;m 5 lương dối linh sạch (cột gcl 6). Băng protein này Iiíim iKMig vimg o') M W Iir 66.000 Da - ‘>7.400 Da. C h ế pliiỉm enzvni sau khi qiui CỘI DEAH - Xcnlultva
■có 2 h ă n g p m l c i n ( c ộ t g o l 7 ) , c h ứ n g t ỏ r ằ n g c h ế p h ẩ m n à y c ó ( l ộ l i n h sạch k é m
hơn so với c h ế pliíĩni qua CỘI heparin (cột gcí 6).
- Nếu chỉ qua một bước tinh sạch bằng sắc ký qua cột Heparin Sepharoza CL-6B hoặc D E A E - Xenluloza thì c h ế phẩm RE được tinh sạch một phần.