- Chỉ số OD
2.2.2.Chọn đệm cliiếl mẫu thích hựp
Diinu dịch chi ối nil có ảnh hương đến ihành pliíìn \ à so lượn ị: (.ác clìiìt !:nỉig dịch chiel. Khi đã chọn được điểu kiện nuôi cày lỏi ƯU (!0 Ihu (iược nhicu sinh khối lliĩ dệni chiết nuĩu Cling phái là đệm có khá nàng d n r i nil liiêu 11 LI ã nhất iức là !ĨE thu được không bị mát hoại lính.
Rât Iiltiểu nghiên cứu trước dây đã dề cập đen ành lurớng < na I'll \Ìì
u ổ n g (lộ N a C I đ c h h o ạ t đ ộ p h â n g i a i c ủ a e n z y m t roil.II ( l ộ m pliíin tni.il. I n m g
luận áĩi miy chúng tôi liên hành chiết rút protein cua chung vị khn.m 5 (lưới íinli Itưỏìig cua pfỉ và nồng độ NaCI trong tliệm chièt 1C hào nliăm lim kicm (lung (lịch cỏ kha nang chiêì dược nhiều RE nhát. Ngliicn cứu nàv lìi một kliíii
c - ạ n h n h ỏ ( r o n g n g h i ê n c ứ u c ơ b ả n n h ằ m c h o n i ự a đ ệ m c h i ẽ i t ế li;n> c ó p l l v;in o n g ( l ộ m u ố i 111 íc h h ợ p d ồ n g t h ờ i i n ừ r ộ n g k h á n ấ n g ứ t i g i l ụ n i ! u i ; i c n / v m n o n g ( l ộ m u ố i 111 íc h h ợ p d ồ n g t h ờ i i n ừ r ộ n g k h á n ấ n g ứ t i g i l ụ n i ! u i ; i c n / v m
(lang million c lí li.
- T ế bào vi khuẩn được chiết trong đệ m TB ở các pH 5,5: pH 6. V pỊỊ 7.0; pH 7,4; pH 8,0 (50niM NaCl). Sau dỏ tiến hành phán ứng v;ì diện di. Kêt t|u;i nghiên cứu được trình bày ở bang 4 và hình 0.
Hả n g 4: Ảnh hưởng pH đệm đến hàm lượng protein lách chiêi
p l ỉ O Dịko P r o t e i n (m g ini) 5,5 1,524 2.205 (\(y 6,5 1,630 2,358 7 . 1 7,0 1,600 2.323 7.0 7,4 1,570 2,270 6 . 4 8,0 2,094 2,659 12 . 0
1 2 3 4 5
H ì n h 6. Phổ điện di ảnh hưởng pH đệm chiết đến kha năng cất
A D N X c ủ a e n z y m / - AD N Ằ + dịch chiết ớ p H 5,5 2 - AD N Ả + dịch chiếỉ ()'p l l 6,5 3 - A D N Ả + dịch chiết ớ pH 7,0 4 - A D N À + dịch chiết ớ pH 7,4 5 - A D N Ằ + dịch chiết ờ p H 8,0
pH môi trườne ảnh hướng rõ rệt đến phản ứng enzvm vì nó anh hướng đến mức độ ion hoá cơ chất, enzym và ánh hướng đến độ bên của protein enzym. pH đ ệm chiết tế bào cua hầu hết những nghiên cứu trước đâv ớ khoáng pH trung tính. Điện di đó (hình 6) cho thấy: ớ tất ca các đệm nghiên cứu có pH khác nhau hoạt tính dịch chiết biếu hiện như nhau, ch ứn s to răng hoạt độ của RE đ an g nghiên cứu thích hợp ở khoang pH dịch chiết tương đối rộng. Nghiên cứu của chú ng tôi cũng phù hợp với nghiên cứu trên RE S n i 30 DI được tách từ SelenoỉiiotKis rumi/ianỉium. Hàm lượng protein được chiết ra từ
đệ m pH 5,5; pH 6.5: pH 7,0; pH 7,4 dao động không dáng kc. Đệm 1 H có pH 8,0 h à m lưựng protein là I2mg/ml lớn gàn gấp đôi so với các (lộm khííc. tuy nhiên hoạt tlọ ciia RE không thay đổi cho thấy, có thể hàm lượng c ;ic pĩolcin khác kliông ánh luĩởng (lốn hoạt độ RE đang nghicii cứu. pit thích hí/p cho hoại (lộng cua nhiều c n / v i n vào khoáng 7. Mạt khác, các Inrớc sất’ Kí (lo Imh sạch enzym cán pH nhất định vừa dể đảm háo độ bcn cua protein c n / v m c 0 ĩ 1 e 111 clc tang kliíi năng trao dổi ion với thành phần CỘI. Do Vc)y, cluini: tòi t hon • lộm có pH 7,4 (lể tliực hiện các nghiên cứu tiếp (heo.
2.2.2.1. Ả n h h n ỏ ỉ i ẹ c ủ a n ồ n g đ ộ N a C l t r o n g đ ệ m (ỉcu I n o u ự p r o t e i nt á c h c h i ế t