- Chỉ số OD
2.2.1.Chọn tlộ plia loãng dịch thô thích họp cho phân lích
Ncu ớ bAÌ cứ độ pha loãng nào cơ chất ADN vÀn giữ (.lược nguvên vẹn Iliì nliững chúng vi sinh vật này không có sự hoại động cua e n / y m giới hạn Ticn chúng kh ổng tiếp lục được phan tích. Qua diều tra sơ hộ, chúng lôi (ffi phát hiện chung vi khuẩn 5 có RE. Vì vậy, chúng tôi Ihực hiện phíin irnịĩ ph;i loãng dịch cliiếi rút thô cua vi khuẩn 5 với 6 nồng (lộ khác nhau: \ịKy. 1/27: 1/81; 1/243; 1/486; 1/729 tronc dun g dịch đệm phản ứng NHB 2 ( jOtnM Tris- HCI; lOmM MgCK; 5 0m M NaCI; I m M D I T pH 7.0 ờ 2 5 ' C). Từ mỏi tiling (lịch (ló lây 30 |il CÍIO vào 2 nl ADN X chuẩn (500 Mg/ml). I [ pliíin trng I piờ à 17"c. Dừng phán úng bằng sốc nhiệt Ctí"C trong 3 ph ú t. Điện di sán phíim phân ứng (rên gel a e a r o / a 0,8%. Kếl qua I.liu dược thè liiện tròn hìnli 5.
chiết thô pha loãng ở nồng độ khác nhau. / - Dịch chiết thỏ;
2 - ADNÀ+ dịch chiết thó pha loãni> ì 19; 3 - ADNẰ + dịch chiết thó pha loãiiiỊ Ị 127; 4 - ADNÀ + dich chiết thô pha Ịoữììg 1181; 5 - AD NẢ + dịch chiết thô pha loữnq ì 1243; 6 - AD NẦ + dịch chiết thô pha loâníỊ 1/48Ố;
7 - ADNẢ + dich chiết tho pha loãng ỉ 1729.
Q u a kết quả trên, chúng tôi nhận thấy rằng trong dịch chiết thỏ cùa tế bào có mặt endo nu cle aza giới hạn. Enzvm này cắt A D N thành nhiêu vạch và Ư mỗi độ pha loãng khác nhau đcu thể hiện rất rõ hoạt tính cua nó. ơ cột gel 2 và 3 dịch chiết thô có độ pha loãng 1/9 và 1/27 nên hàm lượng các nuclcaza còn nhiều khiến các vạch AD N bị cát mò' hơn và các đoạn có kích thước nhỏ hơn đã bị căt nát. Vì vậy, khi chạy điện di thấy xuất hiện các vệt s án s đậm dưới châ n cột điện di soi dưới đèn tứ ngoại, ơ cột gcl 6 và 7 c n d o n u c l c a / a
hoạt (lộng còn rất mạnh. Ở các độ pha loãng này AD N X VÃII hị cắt hoàn tním và hàm lượng các tạp chất dã giảm dán g kể so với 2 tlộ plìa loãng I/1) và 1/27. Tuy nhiên với độ pha loãng 1/81 và 1/243 tương ứng với cột gel 4 và 5 c;íe hăng ADN rõ nét hơn cả, tạp chất không còn nhiều, ánh phổ diện (li cho kct quả tối nhất. Do dó chúng tôi cho rằng ừ các dộ pha loãng ihấp vần thày sir phá huỷ của RE với các A D N chuẩn nhưng biểu hiện rõ ràng à các độ pha loãng cao. Th e o Lê Thị Kim Tuyến, hiện tượng này có thè do cncioiHiclca/H không dặc hiệu và enzym giới hạn cùng hoạt động. Nhưng vì e n / y m gitíi han Itiạnỉi hơn endonuc leaz a kh ông đặc hiệu do đó RE còn hoạt dộng ờ l á c (lộ pha loãng cao. Qua kết quả này, chúng tôi chọn nồng độ dịch chiết thô pha loãng <s I lần hoặc 243 lÀn, đống thời dựa trên độ hấp phụ quang học ờ lurớc sóng 28()nm (lể tiến hành các phản ứng pha loãng ở những thí nghiệm liếp then.