D. Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống viêm
7.Thử nghiệm trên viêm đa khớp ở chuột cống trắng gây bằng chất bổ trợ (chất sáp D) phân lập từ trực khuẩn lao
(chất sáp D) phân lập từ trực khuẩn lao
7.1. Cách tiến hành
Chất sáp D được phân tán và đồng nhất hóa trong một hỗn dịch gồm 1 phần Tween 80, 4 phần dầu parafin và 4 phần dung dịch NaCl 0,9 %. Chất bổ trợ này cuối cùng có 1 mg sáp D trong 1 ml. Hỗn dịch được bảo quản trong lọ, tiệt khuẩn ở 12 0C trong tủ sấy trong nửa giờ, lắc trước khi dùng. Thí nghiệm trên chuột cống trắng Wistar,
từ 30 đến 90 ngày tuổi ( để có tỷ lệ viêm khớp 80 – 100 %). Tiêm dưới da ở gan bàn chân sau của chuột 0,5 ml hỗn dịch vô khuẩn để gây viêm khớp.
7.2. Mô tả viêm khớp và những tổn thương khác ở phủ tạng
- Tổn thương ở khớp: Có hai loại, một viêm khớp xuất hiện sớm ở nơi tiêm và viêm đa khớp thứ phát xuất hiện giữa ngày thứ 10 và 25 sau khi tiêm chất bổ trợ.
Viêm khớp xuất hiện sớm không đặc trưng, được gây nên do tác dụng kích ứng của chất bổ trợ. Phù và đỏ da xuất hiện sau 24 giờ, phản ứng viêm này tiến triển một cách kín đáo trong 8 - 9 ngày, rồi tăng lên khi xuất hiện viêm đa khớp thứ phát.
Viêm đa khớp thứ phát là một phản ứng tăng cảm chậm. Đó là một viêm khớp di trú, thường gây tổn thương những khớp ở các chi. Những khớp đuôi chuột cũng luôn bị viêm. Viêm khớp kèm theo viêm khuếch tán các gân và bao gân. Phản ứng viêm tiến triển theo thể cấp tính hay bán cấp trong nhiều tuần, kèm theo sút cân, đạt mức tối đa giữa các ngày thứ 10 và 15 sau khi xuất hiện, mất đi sau trung bình một tháng, để lại những tổn thương dinh dưỡng tiến triển: phì đại xương, cứng khớp và co rút mô liên kết quanh khớp.
Đôi khi, phản ứng viêm nhẹ và mất đi không để lại di chứng, có khi một khớp lành có thể bị mắc bệnh do một cơn viêm về sau, hiếm khi một khớp bị viêm trước lại bị viêm lại.
- Tổn thương ở phủ tạng: Các tổn thương này kèm theo viêm đa khớp trong một số trường hợp, và không bao giờ xảy ra khi không có viêm khớp. Đó là các tổn thương hệ bạch huyết, những hạch phụ thuộc ở chân tiêm chất bổ trợ và những chi bị bệnh luông bị sưng, những tổn thương da thể hòn, thể ban khởi phát nhất thời và bệnh da mạn tính, và những tổn thương niêm mạc. Các tổn thương niêm mạc diễn ra ở mắt: viêm kết mạc, viêm giác mạc, viêm mống mắt-thể mi, ở bộ máy niệu sinh dục: viêm niệu đạo và quy đầu bao, ở đường tiêu hóa: tiêu chảy, thường phối hợp với viêm quy đầu và viêm niệu đạo.
7.3. Đánh giá mức độ viêm khớp ở giai đoạn viêm
- Xác định chủ quan cường độ, đỏ và phù của các khớp ở các chi da cạo nhẵn, nghiên cứu riêng mức độ viêm ở chân được tiêm. Cách đánh giá cường độ phản ứng viêm từ 0 đến 4 ở mỗi khớp trong các khớp: khớp xương quay – cổ tay, khớp chày – cổ chân, khớp giữa các đốt phía trong của chân trước và chân sau. Những khớp xương bàn tay – ngón tay và khớp xương bàn chân-ngón chân được coi như là một khớp. Cụ thể: 0 là trạng thái bình thường, 1 là ban đỏ, 2 là vừa đỏ vừa sưng, 3 là viêm tấy giả, 4 là tổn thương hoại tử ở chân được viêm. Chỉ số viêm tối đa là 36 đối với viêm đa khớp thứ phát và 16 đối với viêm khớp nguyên phát.
- Đo sự thay đổi chiều dày của những bàn chân sau được tiêm. Cũng có 4 mức độ đánh giá cường độ những tổn thương thứ phát: bình thường, nhẹ, vừa, nặng, và chú ý tới thể trọng động vật.
7.4. Thử tác dụng thuôc chông thấp khớp trên viêm khớp nguyên phát
Ward (1962) cho thuốc hàng ngày cho động vật thí nghiệm trong 21 ngày kể từ khi tiêm chất bổ trợ, trộn lẫn thuốc với thức ăn. Kết quả đạt được từ những lô thử nghiệm gồm 15 chuột cống trắng chứng và 15 chuột thử thuốc, cho mỗi liều của mỗi thuốc. Ngày thứ 13, xác định hiệu lực của các thuốc thử nghiệm.
Newbould (1963) cho thuốc hàng ngày cho động vật thí nghiệm trong 14 ngày, liều đầu cho một ngày trước khi tiêm chất bổ trợ. Tác dụng của thuốc được đo ngày thứ 13 kể từ khi tiêm chất bổ trợ.