- Chuột nhắt trắng 1820 g ,4 6 tuần tuổi.
7.Mô hình gây nhiễm nấm phổi ở chuột nhắt trắng
Để gây bệnh nhiễm vi nấm phổi thực nghiệm, thường dùng nấm Cryptococcus neoformans ở chuột nhắt trắng.
7.1. Dụng cụ
- Chủng nấm Cryptococcus neoformans
- Chuột nhắt trắng không phân biệt đực cái 18-20 gam - Ống nhỏ giọt
- Ống hút - Micropipet
- Môi trường thạch Sabouraud - Cối chày sứ
- Tủ ấm - Tủ sấy
- Que bạch kim để cấy nấm - Thuốc nghiên cứu
- Thuốc tham chiếu đã biết là có tác dụng chống nấm - Dung dịch NaCl 0,9% (nước muối sinh lý).
7.2. Chuẩn bị
- Chuẩn bị môi trường Sabouraud, xem mục 1.3 của chương “ Nghiên cứu tác dụng chống vi nấm in vitro”
- Chuẩn bị canh nấm gốc Cryptococcus neoformans: Tiến hành như mục 2.2, nhưng ở đây cần tỷ lệ nấm cao hơn là 107(10 triệu) cfu/ml, nhỏ sâu vào trong mũi chuột.
- Quan sát chuột. Thường bệnh nhiễm nấm phổi xuất hiện sau 7 ngày và tiếp tục phát triển.
- Đến ngày thứ 7, quan sát bằng cảm quan triệu chứng của bệnh nhiễm nấm phổi ở chuột. Đồng thời xác định nấm, số cfu trong mô phổi, như đã mô tả ở trên.
7.4. Thử thuôc
- Khi đã chỉnh lý mô hình có kết quả (tức là thấy chuột bị nhiễm nấm phổi), thì có thể thử thuốc. Thuốc thường được dùng dạng thuốc uống, thuốc tiêm hoặc nhỏ vào mũi
- Để thử thuốc, dùng 3 lô, mỗi lô 20 con: 1 lô chứng dùng dung môi pha thuốc; 1 lô thử thuốc tham chiếu; còn 1 lô để thử thuốc nghiên cứu.
- Cách tiến hành lúc đầu như phần gây mô hình. Thuốc được dùng từ ngày đầu tiên gây nhiễm nấm, ngày dùng 2 lần, sáng và chiều, nếu là nhỏ mũi; còn nếu uống và tiêm thì dùng ngày 1 lần, liền trong 14 ngày. Đến ngày 14, ngoài quan sát bằng cảm quan, cần xác định nấm trong phổi theo kỹ thuật đã mô tả ở trên
7.5. Đánh giá kết quả
Đánh giá kết quả bằng cảm quan vào 2 thời điểm: lúc 7 ngày và lúc 14 ngày kể từ khi dùng thuốc dựa vào các thông số sau:
- Số chuột chết
- Số chuột còn sống có biểu hiện nấm phổi
Đến ngày thứ 14, đánh giá thêm về số phổi còn nhiễm nấm và số cfu xác định được trong phổi