- Chuột nhắt trắng 1820 g ,4 6 tuần tuổi.
6.Mô hình gây nhiễm vi nấm toàn thân ở chuột nhắt trắng
Để gây nhiễm vi nấm toàn thân, thường dùng nấm Candida hoặc nấm Aspergillus
gây nhiễm cho chuột nhắt trắng. Dưới đây, trình bày kỹ thuật gây nhiễm vi nấm toàn thân bằng nấm Aspergillus fumigatus ở chuột nhắt trắng. Muốn gây nhiễm bằng nấm Candida
cũng dùng theo cách tương tự.
6.1. Dụng cụ
- Chủng nấm Aspergillus fumigatus
- Chuột nhắt trắng không phân biệt đực cái 18-20 gam - Ống hút
- Môi trường thạch Sabouraud - Cối chày sứ
- Tủ ấm - Tủ sấy
- Que bạch kim để cấy nấm
- Đèn cồn để tiệt trung que bạch kim - Hộp Petri
- Dao mổ - Cân
- Thuốc nghiên cứu
- Cylophosphamnid hoặc hydrocortison - Dung dịch NaCl 0,9% ( nước muối sinh lý) - Bơm và kim tiêm
- Kính lúp
6.2. Chuẩn bị
- Chuẩn bị môi trường thạch Sabouraud, xem mục 1.3 của chương “nghiên cứu tác dụng chống vi nấm in vitro”
- Chuẩn bị canh nấm gốc Aspergillus fumigatus: Tiến hành như mục 2.2. Chế canh nấm gốc có tỷ lệ nấm là 500 000 cfu/ml.
6.3. Gây mô hình
- Tiêm tĩnh mạch đuôi chuột nhắt trắng mỗi 0,2 ml canh nấm gốc. Muốn để bệnh nhiễm vi nấm phát triển dễ hơn, cần gây tổn thương hệ miễn dịch cho chuột bằng cách tiêm dưới da Cylophosphamnid liều 5 mg/kg hoặc hydrocortison acetat leefi 25 mg/kg, 2 lần, vào ngày 4 và ngày 2 trước khi gây nhiễm nấm.
- Quan sát tỷ lệ chuột bị nhiễm bệnh và tỷ lệ chuột chết trong vòng 20 ngày. Nhưng chuột chết được coi như bị nhiễm bệnh mà chết. Đối với những chuột sống sót, xác định số cfu trong mô thận, như phần mở đầu đã đề cập.
6.4. Thử thuôc
- Khi đã chỉnh lý mô hình chó kết quả (tức là thấy chuột bị nhễm vi nấm toàn thân mà chết, hoặc xác định thấy có nấm ở hộp thận), thì có thể thử thuốc. thuốc thường được dùng dạng thuốc tiêm hoặc thuốc uống.
- Để thử thuốc, dùng 3 lô, mỗi lô 20 con: 1 lô chứng dùng dung môi pha thuốc; 1 lô thử thuốc tham chiếu; còn 1 lô để thử thuốc nghiên cứu
- Cách tiến hành lúc đầu như phần gây mô hình. Thuốc được dùng từ ngày đầu tiên gây nhiễm nấm, ngày dùng một lần, liền trong 20 ngày. Đến ngày 20, xác định nấm trong thận của những chuột sống sót teo kỹ thuât đã mô tả trên.