D. Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống viêm
6.Thử nghiệm trên viêm khớp thực nghiệm gây bởi chất bổ trợ Freund
Phương pháp này gây bệnh giống như viêm khớp ở bàn chân chuột cống trắng. Dùng những nhóm 3 chuột cống đực trắng, không mang tác nhân gây bệnh, cân nặng khoảng 200 g. Cho chuột uống thử nghiệm. Với 5 nhóm thử thuốc, có một nhóm đối chứng. Một ngày sau, đo bàn chân phải sau về độ dày bằng một trắc vi kế qua phần dọc
giữa. Tiêm nội bì dưới bề mặt gan bàn chân của cùng bàn chân 0,05 ml chất bổ trợ bằng kim tiêm số 20.
Chất bổ trợ Freund là hỗn hợp của vi khuẩn Mycobacterium chết trong parafin lỏng, nhưng cũng có thể dùng dầu khoáng hoặc dầu thực vật, và một số trực khuẩn kháng acid, đã gây hội chứng kiểu viêm khớp. Trong phương pháp này, dùng trực khuẩn lao từ các chủng của người PN, DT và C, để vi khuẩn phát triển trong 8 tuần, diệt vi khuẩn bằng hơi nước, và sấy khô vi khuẩn trong tủ sấy chân không.
Tiếp tục cho chuột uống thuốc thử nghiệm tới ngày thứ 13, và lúc đó cân thể trọng chuột. Đo độ dày của bàn chân tiêm và tính tỷ lệ % tăng độ dày của bàn chân. Mức tăng độ dày là 5 đến 8 mm ± 0,5 mm đối với chuột đối chứng, 13 ngày sau khi tiêm dịch treo vi khuẩn. Mức độ nghiêm trọng của các tổn thương thứ phát, như sưng bàn chân trái sau, sưng các bàn chân trước, sưng các tai và sưng đuôi được đánh giá là không, nhẹ, vừa, nặng vừa, và nặng. Đuôi của chuột đối chứng có thể có một số hòn dọc theo phần giữa đuôi.
Tỷ lệ % ức chế sự tăng độ dày của bàn chân tiêm được tính theo công thức: i =100 [1-(a-x)/(b-y)]
Trong đó i là tỷ lệ % ức chế, y là độ dài trung bình của các bàn chân phải sau của chuột đối chứng trước khi tiêm, b là cùng độ dày ở ngày thứ 13, x là độ dày trung bình của bàn chân phải sau của các chuột thử thuốc trước khi tiêm, a là cùng độ dày trung bình ở ngày thứ 13. Phương pháp này dựa trên một hội chứng được coi là gần gũi hơn với viêm khớp dạng thấp so với mọi thử nghiệm khác. Hoạt tính chống viêm của phần lớn các loại thuốc chống sốt rét có liên quan với cloroquin.