Chúng tôi sử dụng kháng huyết thanh đơn giá O, H của hãng SIFIN (Đức) và Bio RAD (Pháp).
Sử dụng khay thuỷ tinh trong đó có các giếng nhỏ. Nhỏ 1 giọt kháng huyết thanh vào giếng, dùng que cấy vô trùng lấy 1 phần khuẩn lạc cần định type từ thạch nuôi cấy, trộn đều khuẩn lạc và kháng huyết thanh, lắc nhẹ và quan sát:
+ Phản ứng dương tính: có sự hình thành các hạt ngưng kết nhỏ li ti.
+ Phản ứng âm tính: huyễn dịch vi khuẩn và kháng huyết thanh đồng nhất không có những hạt nhỏ li ti mà có màu trắng sữa hơi đục.
Đối với các chủng sau khi định được kháng nguyên O, H1 mà chưa định được type thì phải xác định pha 2 của kháng nguyên H. Sau khi xác định kháng nguyên H pha 1 theo sơ đồ trên, tiến hành xác định pha 2 như sau:
- Chuẩn bị thạch Sven Gard: đây là môi trường bán cố thể, có bán sẵn trên thị trường, chỉ cần pha theo hướng dẫn của nhà sản xuấ t. Dùng đĩa có đường kính 6cm trước khi đổ thạch nhỏ 1 giọt nhỏ Anti Sven Gard Ser um với mục đích ức chế pha 1.Tuỳ theo pha 1 mà có loại Anti Sven Gard Serum khác nhau ví dụ SG1, SG2, SG3, SG4, SG5, SG6.
- Sau khi đã có thạch Sven Gard, dùng que cấy vô trùng lấy một ít vi khuẩn đã xác định được kháng nguyên H pha 1, chấm nhẹ lên bề mặt thạch ở giữa đĩa thạch.
- Nuôi ở 370 C/24h.
- Tiến hành phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính tương tự như đối với pha 1. Xác định type Salmonella bằng kháng huyết thanh theo KauffmannWhite (Salmonella serotyping following Kauffmann Scheme) (năm 1972).
Bảng 2.1. Bảng cấu trúc kháng nguyên của một số loài Salmonella
Nhóm Type Kháng nguyên O Kháng nguyên H
Pha 1 Pha 2 A S. paratyphi A 1,2,12 A - B S. paratyphi B 1,4,5,12 1 1,2 S. typhimurium 1,4,5,12 I 1,2 S. derby 1,4,5,12 f,g [1,2] S. Essen 4,12, G,m - S. Brandenburg 4,12 l,v e,n,z15 C1 S. Paratyphi C 6,7 (vi) C 1,5 S. Cholerae suis 6,7 C 1,5 S. bareilly 6,7 I 1,5 D S. enteritidis 1,9,12 G,m 1,5 S. dublin 1,9,12 g,p - S. typhi 1,9, Vi c,d - S. gallinarum 1,9,12 - - S. pullorum 9,12 - -