Phương pháp vi sinh

III. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

NGHIÊN CỨU TĂNG THỜI GIAN BẢO QUẢN TƯƠNG ỚT BẰNG VIỆC SỬ DỤNG PHỤ GIA THỰC PHẨM Ở NỒNG ĐỘ THẤP

2.3.3. Phương pháp vi sinh

Kiểm tra một số chỉ tiêu vi sinh vật đặc trưng trong sản phẩm tương ớt: tổng số vi khuẩn hiếu khí, tổng số nấm men, nấm mốc bằng cách sử dụng kỹ thuật đổ đĩa, đếm khuẩn lạc.

Tính kết quả: Số lượng vi sinh vật trung bình cĩ trong 1g mẫu được tính theo cơng thức: v f n n C . ), 1 , 0 ( 1 2 1 Trong đĩ: C: Tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa

n1 : Số đĩa đếm ở nồng độ pha lỗng thứ 1 (độ pha lỗng thấp nhất)

n2 : Số đĩa đếm ở nồng độ pha lỗng thứ 2 (độ pha lỗng tiếp theo) f1 : Hệ số pha lỗng của đĩa đếm thứ 1

v : Thể tích mẫu cấy vào mỗi đĩa petri.

- Xác định tổng số vi sinh vật hiếu khí: Nuơi cấy một lượng mẫu nhất định hoặc mẫu đã pha lỗng lên mơi trường thạch dinh dưỡng TGA (Tryptone Glucose Agar) ở nhiệt độ 30±1C trong điều kiện hiếu khí, thời gian 48÷72 giờ. Đếm tất cả số khuẩn lạc mọc trên đĩ. Từ tổng số khuẩn lạc đếm được sẽ suy ra số lượng tế bào sống cĩ trong mẫu phân tích.

+ Dung dịch pha lỗng: nước muối pepton SPW (Saline Pepton Agar).

+ Dụng cụ và các dịch pha lỗng: Rửa sạch và khử trùng. Sử dụng dụng cụ vơ trùng.

48 + Dịch mẫu cĩ độ pha lỗng 10-1

: 25 g mẫu vơ trùng trong 225 mL dung dịch pha lỗng.

+ Pha lỗng thập phân mẫu phân tích đến nồng độ: 10-2 (1 mL dịch nồng độ 10-1 trong 9 mL dung dịch pha lỗng) và 10-3. Thời gian thao tác khơng quá 30 phút.

+ Cấy mẫu: Lấy 1 mL mẫu 10-2

; 10-

3

cho vào hộp petri (mỗi độ pha lỗng làm 2÷3 hộp và làm hai độ pha lỗng liên tiếp). Rĩt mơi trường thạch dinh dưỡng cĩ nhiệt độ 45÷50C vào các hộp petri đã cĩ mẫu, mỗi đĩa cho 15÷18 mL mơi trường. Xoay đĩa theo 2 chiều. Để yên các hộp trên mặt phẳng ngang (điều kiện vơ trùng) để thạch nguội và đơng hồn tồn.

Làm mẫu trắng (mẫu đối chứng) để kiểm tra độ vơ trùng của quá trình thao tác

+ Nuơi ủ: Lật ngược đĩa, đặt vào tủ ấm để nhiệt độ 30±1C trong thời gian 48÷72 giờ.

+ Đọc kết quả: Mẫu trắng dương tính (+): xuất hiện khuẩn lạc  Hủy, làm lại từ đầu đến khi mẫu trắng âm tính. Mẫu trắng âm tính (-): khơng xuất hiện khuẩn lạc  Tính kết quả

Các đĩa petri cấy mẫu xuất hiện các khuẩn lạc đặc trưng: khuẩn lạc màu trắng đục, dẹt. Đếm khuẩn lạc bằng mắt thường hoặc qua kính phĩng đại trong ánh đèn.

- Xác định tổng số nấm men, nấm mốc: Mơi trường dinh dưỡng phải chứa chất ức chế sự phát triển của vi khuẩn (như oxytetracyclin hoặc chloramphenicol). Cấy lên bề mặt thạch của mơi trường Yeast Glucose Chloramphenicol một lượng mẫu đã được pha lỗng nhất định và nuơi ở nhiệt độ 30±1C trong điều kiện hiếu khí, thời gian 48÷72 giờ. Đếm tất cả số khuẩn lạc mọc trên đĩ, từ đĩ suy ra lượng nấm men - nấm mốc cĩ trong mẫu phân tích.

Thực hiện thao tác tương tự như cách xác định tổng số vi khuẩn hiếu khí với dung dịch pha lỗng là nước peptone 1% vơ trùng.