3. Thu màng BC
3.4. Xây dựng qui trình tinh chế màng BC 1 Các chỉ tiêu chất lượng màng BC tinh chế
3.4.1. Các chỉ tiêu chất lượng màng BC tinh chế
Hiệu quả của quá trình tinh chế được đánh giá dựa vào các phản ứng hĩa học xác định sự hiện diện của đường, protein và quan sát dưới kính hiển vi quang học và kính hiển vi điện tử cho thấy khơng cịn sự hiện diện của vi khuẩn trong màng. Màng BC tinh chế phải cĩ màu trắng trong và khơng bị biến đổi màu khi xử lý bằng nhiệt độ cao. Độ tinh khiết của màng BC tinh chế
Màng BC sau khi tinh chế ở tất cả các lơ thử nghiệm đều được kiểm nghiệm độ tinh khiết bằng cách kiểm tra sự hiện diện của glucose và protein là hai chất cĩ nồng độ
Nước dừa
Lọc bỏ cắn
Mơi trường lên men
Giống A. xylinum Hộp nhựa vơ trùng
Hấp tiệt trùng
BC thơ
Tinh chế
Các thành phần
cao trong mơi trường nuơi cấy. Sự hiện diện của đường và protein sẽ ảnh hưởng đến chất lượng của màng.
Tìm sự hiện diện của glucose trong màng BC tinh chế
Lấy mẫu: lấy màng từ mỗi lơ tinh chế theo tỷ lệ 5 % số màng ở các lơ.
Màng BC tinh chế 10 cm x 10 cm được cắt nhỏ, cho vào 50 ml nước cất, lắc kỹ với máy lắc trong 3 giờ. Dùng thuốc thử Fehling mới pha để phát hiện sự hiện diện của đường glucose trong dịch chiết màng. Mẫu chứng âm là nước cất và mẫu chứng dương là dung dịch D - glucose. Phản ứng dương tính với sự xuất hiện tủa nâu đỏ trong ống nghiệm.
Kết quả: khơng phát hiện glucose hiện diện trong tất cả màng thử nghiệm .
Hình 3.12. Kết quả tìm sự hiện diện của glucose trong dịch chiết màng BC
Tìm sự hiện diện của protein trong màng BC tinh chế.
Lấy mẫu: lấy màng từ mỗi lơ tinh chế theo tỷ lệ 5 % số màng ở các lơ. Protein trong dịch chiết màng được phát hiện bằng phản ứng kết tủa protein với acid triclor acetic.
Kết quả: phản ứng tủa âm tính, khơng phát hiện được protein trong dịch chiết của tất cả màng BC tinh chế. 3 4 5 1 2 1.Ống chứng cĩ chứa glucose. 2. Ống chứng nước cất. 3. Dịch thử của màng số 1. 4. Dịch thử của màng số 2; 5. Dịch thử màng số 3
Hình 3.13. Kết quả tìm sự hiện diện của protein trong dịch chiết màng BC
Quan sát màng BC dưới kính hiển vi điện tử quét( SEM )
Khảo sát cấu trúc của lớp màng BC tinh chế dưới kính hiển vi điện tử quét SEM JOEL-JSM 5500. Quan sát sự tạo thành các sợi cellulose từ tế bào vi khuẩn, sợi cellulose trong màng BC thơ sau khi nuơi cấy và màng BC đã qua xử lý.
Hình 3.14. Hình chụp màng BC thơ dưới KHV điện tử quét
Nhận xét: kết quả khảo sát màng BC dưới kính hiển vi điện tử quét cho thấy:
• Mạng lưới sợi cellulose ở màng BC thơ cĩ nhiều vi khuẩn A.xylinum.(Hình 3.16) • Mạng lưới sợi cellulose ở màng BC tinh chế khơng cịn chứa vi khuẩn.(Hình 3.17) • Các cấu trúc sợi trên bề mặt màng đồng nhất. (Hình 3.18)
Hình 3.15. Sợi cellulose của màng BC sau khi xử lý Hình 3.16. Bề mặt màng BC tinh chế dưới KHV điện tử quét 1 2 1. Dịch chiết từ màng BC tinh chế. 2. Dịch chiết từ màng BC thơ.