c1. Xây dựng qui trình tạo màng thành phẩm Acetul
Xác định các tiêu chuẩn của màng BC tinh chế sử dụng chế tạo màng trị bỏng
Màng BC tinh chế dùng để tạo màng trị bỏng Acetul phải đạt được những tính chất sau:
- Cảm quan: mềm mại, dẻo dai, mỏng, cĩ khả năng áp sát vào da, cĩ tính che phủ tốt, cĩ khả năng cản khuẩn.
- Độ ẩm thích hợp, cĩ khả năng hút nước và HCTSM . Để đạt các tiêu chuẩn này cần khảo sát:
- Màng BC thơ cĩ độ dày thích hợp. Tạo màng BC cĩ độ dày khác nhau bằng cách sử dụng lớp mơi trường nuơi cấy tĩnh cĩ độ dày khác nhau. Mơi trường được cho vào các hộp nuơi cấy với độ dày lớp mơi trường như khác nhau để tạo lớp màng BC cĩ độ dày cần khảo sát.
- Độ ẩm thích hợp của màng BC sau khi đạt các tiêu chuẩn về độ tinh khiết.
Tất cả các thơng số này sẽ được khảo sát đồng thời để xác định thơng số thích hợp nhất.
Khảo sát độ ẩm thích hợp của màng BC dùng để tạo màng trị bỏng: màng BC thu
được từ các lơ được tinh chế và làm khơ tạo màng ở những độ ẩm khác nhau bằng cách sấy màng trong tủ sấy và xác định độ ẩm, sau đĩ thử nghiệm khả năng hút nước của màng để xác định độ ẩm thích hợp của màng BC tinh chế sử dụng chế tạo màng trị bỏng.
Phương pháp khảo sát khả năng hút nước của màng BC tinh chế
Mơ hình thử nghiệm: màng BC ở những độ ẩm khác nhau được ngâm ngập trong nước, sau những khoảng thời gian xác định 2 giờ, 4 giờ, 6 giờ, 12 giờ, 24 giờ màng được vớt ra khỏi nước bằng kẹp, giữ màng cho đến khi nước trên màng khơng cịn chảy xuống nữa, cân lại màng để xác định lượng nước hút được sau những khoảng thời gian thử nghiệm.
Phối hợp các hoạt chất với màng BC tinh chế tạo màng trị bỏng Acetul
Chế tạo màng BC phối hợp với hoạt chất tái sinh mơ và các tá dược để đáp ứng yêu cầu thể chất mềm, mịn, trắng, trong, bám dính vào da tốt, khơng bị khơ nhanh khi để ngồi khơng khí, cĩ khả năng che phủ tốt.
Tiến hành
Chuẩn bị màng: màng BC tinh chế cĩ kích thước 10 cm x 10 cm. Tiệt trùng màng BC tinh chế bằng phương pháp nhiệt ẩm trong autoclave 121 oC / 20 phút
Chuẩn bị hỗn hợp hoạt chất tái sinh mơ, tinh dầu tràm và tá dược: phối hợp tá dược với HCTSM, tinh dầu tràm ở những nồng độ khác nhau.
Phối hợp màng BC tinh chế với HCTSM và tá dược ở các nồng độ khảo sát.
Đánh giá chất lượng màng ở giai đoạn này: - Khả năng thấm hút nước và hoạt chất tái sinh mơ.
- Tính chất cảm quan: phải đạt tính mềm mại, dính sát vào da. - Khả năng thơng thống của màng.
- Tác dụng điều trị bỏng.
Các yếu tố này sẽ là cơ sở để lựa chọn tá dược và nồng độ tá dược thích hợp. Sau khi phối hợp với hoạt chất và tá dược, đĩng gĩi màng trong bao PE và bao nhơm, hàn kín và tiệt trùng bằng tia gamma.
c2. Đánh giá khả năng thấm hút nước và tính thơng thống của màng Acetul
Phương pháp khảo sát khả năngthấm hút nước của màng Acetul
Mơ hình thử nghiệm: thử khả năng hút nước của màng Acetul trên những bản thạch bán lỏng chứa 0,2 % thạch, kích thước bản thạch 20 cm x 15 cm dày 2 cm. Ở nồng độ này bản thạch chứa hàm lượng nước lớn (99,8 %) và cĩ một bề mặt rất ẩm ướt, gần giống bề mặt vết thương.
Màng thử nghiệm được cân sau đĩ đặt màng trên những bản thạch bán lỏng, sau những khoảng thời gian xác định cân lại màng để xác định lượng nước đã thấm hút vào màng.
Phương pháp khảo sát khả năng cho thốt hơi nước của màng
Khả năng cho thốt hơi nước của màng được tính dựa trên lượng nước mất đi theo thời gian của màng trong tình trạng đã hút nước. Các màng thử nghiệm được đặt trên những bản thạch bán lỏng 12 giờ để màng hút nước và cĩ độ ẩm tối đa. Lấy màng và cân, ghi trọng lượng ban đầu, sau đĩ đặt màng thử nghiệm vào những hộp nhựa khơng đậy nắp. Đặt hộp ở nhiệt độ 37 oC, sau những khoảng thời gian khác nhau cân lại trọng lượng màng. Tính lượng nước mất đi theo thời gian. Thử nghiệm trên màng Acetul và màng BC tinh chế.
Thú thử nghiệm: thỏ trắng, mắt đỏ khơng phân biệt giới tính, trọng lượng từ 2,5 kg- 2,8 kg/ thỏ. Dùng 15 thỏ chia làm 3 lơ. Thỏ được cạo sạch lơng ở vùng lưng 48 giờ trước khi thử nghiệm.
Phương pháp
Mơ hình gây bỏng ở thỏ [10]
Chọn mơ hình gây bỏng bằng nhiệt khơ với các điều kiện thí nghiệm như sau: Nhiệt độ gây bỏng: 90 oC, thời gian: 10 giây
Độ bỏng: II nơng
Diện tích bỏng: 18-20 %
Vị trí gây bỏng: vị trí gây bỏng là vùng hai bên sống lưng thỏ (vì ở vùng này, da tương đối rộng và bằng phẳng, da tương đối dày nên khơng gây thương tổn quá nặng cho các cơ quan nội tạng).
Dụng cụ gây bỏng: dùng một bình nhơm hình trụ cĩ đường kính đáy là 5 cm, trong đĩ cĩ đổ đầy nước sơi, nhiệt độ đáy bình khoảng 90 oC. Dùng một quả cân 1 kg đè lên bình tạo một áp lực ổn định, giúp đáy bình ép sát da thỏ.
Phương pháp gây bỏng:
Chuẩn bị thú thử nghiệm: thỏ được cạo sạch lơng vùng hai bên sống lưng trước 24 giờ để tránh kích ứng da.
Gây mê thỏ: thỏ được gây mê bằng dung dịch thiopental 1 %, liều 1,5 ml / kg thể trọng. Tiêm tĩnh mạch vành tai, thỏ mê sau 3 giây.
Gây bỏng: đặt bình nhơm cĩ chứa nước sơi lên sát vùng da thỏ cần gây bỏng. Dùng quả cân 1 kg đè lên bình nhơm, sao cho đáy bình thật sát với da thỏ trong thời gian 10 giây.
Chẩn đốn độ sâu của vết thương bỏng: tiêm tĩnh mạch vành tai thỏ đã được gây bỏng 12-15 ml dung dịch natri fluorescein. Quan sát vết thương phát quang dưới đèn Wood trong phịng tối.
Khảo sát mức độ tổn thương dasau khi gây bỏng: quan sát sự phát quang của vết thương dưới đèn Wood trong phịng tối. Nếu vết bỏng sâu sẽ khơng phát quang, ngược lại vết bỏng nơng sẽ cĩ phát quang màu vàng.
Thỏ được chia làm 3 lơ, mỗi lơ 5 thỏ, mỗi thỏ 2 vết bỏng. Thỏ được thay băng mỗi 24 giờ 1 lần trong vịng 15 ngày đầu, bắt đầu ngay sau khi gây bỏng. Theo dõi điều trị trong vịng 22 ngày.
Lơ 1: đắp màng BC phối hợp hoạt chất tái sinh mơ. Lơ 2: đắp chế phẩm màng Acetul.
Lơ 3: lơ chứng khơng điều trị. Đánh giá kết quả:
- Theo dõi tình trạng của vết bỏng trong thời gian điều trị: độ phù nề, hoại tử, nhiễm trùng cĩ mủ hay khơng.
- Đo diện tích cịn lại của vết thương, đánh giá quá trình lành sau những khoảng thời gian và so sánh khả năng điều trị của màng. Dùng phép tốn phân tích thống kê, so sánh giá trị trung bình diện tích vết thương cịn lại giữa các lơ.
- Giải phẫu bệnh lý: sau khoảng thời gian điều trị, giải phẫu bệnh lý vùng da bị bỏng đã được đắp màng, xem xét mức độ biểu mơ hĩa và tính bất thường về mặt tế bào học. Thực nghiệm được tiến hành tại BM. Giải phẫu Bệnh, Trường Đại Học Y Dược TP. Hồ Chí Minh.
c4. Qui trình đĩng gĩi màng và tiệt trùng màng
Qui trình đĩng gĩi
Chuẩn bị bao bì: màng PE, bao nhơm.
- Tạo bao nhơm: cắt màng bao nhơm với kích thước 15cm x 15 cm, ép tạo thành túi - Cắt màng PE tạo bao với kích thước 12 cmx 12 cm.
Đĩng gĩi
- Màng thành phẩm được đặt trong bao PE, hàn kín bao.
- Bao PE chứa màng sẽ tiếp tục được đặt trong bao nhơm, sau đĩ hàn kín bao nhơm. - Quá trình thao tác được thực hiện trong tủ Laminar.
- Qui mơ đĩng gĩi: mỗi mẻ khoảng 500 màng.
Qui trình tiệt trùng
Màng thành phẩm Acetul được tiệt trùng bằng tia bức xạ. - Thiết bị chiếu xạ: nguồn Cobalt – 60: SVST – Co 60/B. - Loại bức xạ sử dụng: tia gamma
- Suất liều: 1,3 KGy/ h, liều kế đo: ECB - Liều khử trùng: 25 Kgy/ phút.
- Với điều kiện tiệt trùng như trên thì phân xuất bắt gặp 1 đơn vị sản phẩm nhiễm khuẩn (SAL) đạt ở mức 1 x 10-6.
Qui trình chiếu xạ được thực hiện tại Trung tâm nghiên cứu và triển khai cơng nghệ bức xạ TP.Hồ Chí Minh.
d. Các chỉ tiêu theo dõi
- Kiểm nghiệm màng dựa trên các chỉ tiêu màng bán thành phẩm và thành phẩm, tác dụng làm mau lành vết thương của màng Acetul trên thú thử nghiệm.
e. Sản phẩm nội dung cần đạt
- Màng thành phẩm Acetul đạt tiêu chuẩn cơ sở
2.6. Xây dựng qui trình kiểm nghiệm màng BC tinh chế và màng thành phẩm Acetul (tiêu chuẩn cơ sở) Acetul (tiêu chuẩn cơ sở)