2.3. Xây dựng qui trình tạo màng BC a. Đối tượng nghiên cứu a. Đối tượng nghiên cứu
• Chủng vi khuẩn tạo cellulose Acetobacter xylinum từ giai đoạn nhân giống. • Mơi trường khảo sát
Amoni sulfat 0,5g Diamoni phosphat 0,3g Nước dừa già vừa đủ 1000ml.
Bổ sung đường glucose và pepton ở những nồng độ khảo sát khác nhau để khảo sát ảnh hưởng của nguồn carbon, nitơ trong quá trình lên men thu BC.
b. Bố trí thí nghiệm
Qui mơ: xác định các thơng số thích hợp cho qui trình lên men được thực hiện lặp lại
5 lần. Quá trình lên men tạo BC được thực hiện trong hộp nhựa kích thước 12cm x 22 cm x 10 cm. Sau khi xác định được các điều kiện lên men và độ dày màng cần đạt sẽ tiến hành sản xuất thử với qui mơ 5 mẻ/ lơ, mỗi mẻ dùng 50 lít mơi trường.
Thời gian: từ 1/2008 đến 7/2008
Địa điểm: thử nghiệm được thực hiện tại Phịng thí nghiệm Vi sinh Cơng nghệ, BM Vi sinh – Ký sinh Khoa Dược, ĐH Y Dược TP.HCM
c. Phương pháp nghiên cứu
Lên men A. xylinum thu màng BC trong điều kiện nuơi cấy tĩnh. Khảo sát các yếu tố
ảnh hưởng đến quá trình này cần nghiên cứu như nguồn dinh dưỡng, pH mơi trường, lượng giống sử dụng ban đầu.
Khảo sát nguồn dinh dưỡng: khảo sát nguồn carbon, nguồn nitơ, vai trị của nước
dừa già đối với quá trình tạo BC.
+ Tìm pH thích hợp: nuơi cấy A. xylinum trong khoảng pH từ pH 4,5 đến pH 7,0. Xác định pH tốt nhất cho hiệu suất tạo BC cao.
+ Xác định lượng giống vi khuẩn thích hợp đưa vào mơi trường lên men: thử nghiệm lên men vi khuẩn với những số lượng vi khuẩn ban đầu khác nhau: 104 CFU/ ml; 105 CFU/ ml; 106 CFU/ ml.
Xác định hiệu suất BC thu được: màng BC sau khi tinh chế được sấy trong tủ sấy ở 105 oC, áp suất thường đến khối lượng khơng đổi (sự chênh lệch khối lượng sau khi sấy thêm một giờ trong tủ sấy so với lần sấy trước đĩ khơng quá 0,5 mg, theo Phụ lục 5, trang phụ lục 98, DĐVN IV, 2010),[4] được khối lượng BC khơ. So sánh hiệu suất tạo BC (g/l) của từng mơi trường và các điều kiện khảo sát để tìm được mơi trường và các thơng số thích hợp cho năng suất tạo BC cao.
Xây dựng qui trình lên men
Dịch nhân giống được cho vào mơi trường lên men tạo BC sau đĩ cho vào hộp nhựa đã được hấp tiệt trùng. Nuơi cấy tĩnh trong bảy ngày, thu sản phẩm màng BC thơ, sau đĩ tinh chế màng. Cho vào các hộp nhựa 12 cm x 22 cm x 10 cm Thời gian : 6 ngày Thu hoạch màng BC thơ Giống A. xylinum từ giai đoạn nhân giống Lên men Nuơi cấy tĩnh Khảo sát các điều kiện lên men
d. Các chỉ tiêu theo dõi
- Hiệu suất BC thu được.