- Nguyên liệu
* Mẫu phân lập
Các mẫu giầy da , giầy vải tr−ớc và sau khi xử lý bằng hoá chất đ−ợc lấy tại Công ty Da giầy Hà Nội
* Môi tr−ờng phân lập và phân loại nấm mốc
+ Môi tr−ờng Czapek (g/l) Saccaroza 30 NaNO3 3 K2HPO4 1 MgSO4 0,5 KCl 0,5 FeSO4.7H2O 0,05 Thạch 15 N−ớc 1 lít PH 6 + Môi tr−ờng OA (g/l) Bột yến mạch 30 Thạch 15 N−ớc 1 lít PH 6 - Thiết bị
* Kính hiển vi quang học-Nikon P400 (Nhật) * Tủ ấm memmert(Đức)
* Các thiết bị cần thiết cho nuôi cấy vi sinh
III.3.2.2. Ph−ơng pháp
- Kiểm tra nấm mốc trên giầy vải, giầy da
Lấy các mẫu giầy vải, giầy da đã bảo quản, cân các mẫu đó rồi cho vào n−ớc vô trùng. Pha loãng n−ớc rửa ở nồng độ thích hợp. Hút 0,05 ml dung dịch từ các ống pha loãng trên vào đĩa Petri đã chứa sẵn môi btr−ờng Czepek, gạt đều rồi đặt vào tủ ấm 28- 30oC. sau 3-5 ngày, lấy ra đếm khuẩn lạc có trong mỗi đĩa Petri. Số l−ợng nấm mốc trong 1g giầy đ−ợc tính theo công thức
X=a x 1/k x 1/v
Trong đó: a là số khuẩn lạc trung bình trên đĩa Petri k là độ pha loãng
v là thể tích pha loãng đ−ợc cấy trên đĩa gạt Petri
- Ph−ơng pháp phân loại nấm
Nấm đ−ợc nuôi cấy trong tủ ấm 28-30oC trong môi tr−ơng Czapek hoặc môi tr−ờng OA có cắm lamen nghiêng. Sau 72 giờ, lấy ra quan sát hình thái d−ới kính hiển vi quang học
Phân loại nấm dựa vào 2 tiêu chí:
* Đặc điểm hình thái khuẩn lạc
+ Quan sát dạng mặt khuẩn lạc
+ Màu sắc khuẩn lạc(mầu sắc hệ sợi nấm, bào tử) và các đặc điểm khác nh− mặt trái, giọt tiết…
* Đặc điểm của vi nấm
+ Đặc điểm của cơ quan sinh bào tử trần và bào tử trần (tế bào chân, giá sinh bào tử trần, bọng đỉnh giá, cuống thể bình, thể bình, kích th−ớc…)
+ Đặc điểm của bào tử túi (thể quả, nang bào tử, bào tử túi)
+ Phân loại đến chi; dùng khoá phân loại của H.L.Barnet và cộng sự
+ Phân loại đến chi Aspergillus dùng khoá phân loại của Raper và Fennell, 1966 và khoá phân loại ‘Aspergillus and related telemorphs” của S.S. Tzean, J.L.Chen, G.Y.Liou. C.C.Chen, W.H.Hsu(Đài loan). Để phân loại chi Penicillium dùng khoá phân loại “ Penicillium and related telemorphs” của các tác giả trên.
III.3.3. Kết quả và thảo luận
III.3.3.1. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy da tr−ớc và sau khi xử lý
Các mẫu giầy da đ−ợc ngâm trong n−ớc vô trùng đ−ợc phân lập nấm sợi trên môi tr−ờng Czapek. Sau 10-15 ngày xác định số l−ợng và định tên.
Bảng 16. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy da tr−ớc và sau khi xử lý hoá chất thuộc lô MS-01
Mẫu ch−a xử lý Mẫu sau khi xử lý Tên loài Số l−ợng
(x105cfu/g)
Tên loài Số l−ợng (cfu/g)
Aspergillus fumigatus 38 Aspergillus fumigatus 3,12
Curvularia eragrostidis 52 Curvularia eragrostidis 0,92
Cladosporium nigrellum 72 Cladosporium nigrellum 0,92
Penicillium roseo-purpureum 34 Penicillium roseo-purpureum 0,22
Penicillium implicatum 19 Penicillium implicatum 0,45
Penicillium sp 22 Penicillium sp 0,45
Emericellopsis terricola 86 Emericellopsis terricola 0,22
Penicillium brefldianum 120
Aspergillus oryzae 15
Tổng cộng 458 Tổng cộng 6,3
Kết quả xét nghiệm cho thấy ở lô MS-01, ở các mẫu ch−a đ−ợc xử lý phân lập đ−ợc số l−ợng nấm sợi là 458 x105 cfu/g giầy, bao gồm 4 chi và 9 loài: Aspergillus fumigatus, Curvularia eragrostidis, Cladosporium nigrellum, Penicillium roseo- purpureum, Penicillium implicatum, Penicillium sp, Emericellopsis terricola, Penicillium brefldianum, Aspergillus oryzae. Sau khi xử lý bảy loại nấm sợi đã đ−ợc phân lập lại với số l−ợng rất nhỏ: 6,3cfu/g giầy, trong đó 2 loài Penicillium brefldianum và Aspergillus oryzae không thấy xuất hiện. Nh− vậy số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy da sau khi xử lý đã giảm hàng triệu lần.
Bảng 17. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy da tr−ớc và sau khi xử lý hoá chất thuộc lô MS-02
Mẫu ch−a xử lý Mẫu sau khi xử lý Tên loài Số l−ợng
(x105cfu/g) Tên loài
Số l−ợng (cfu/g)
Aspergillus fumigatus 34 Aspergillus fumigatus 47,48 Curvularia eragrostidis 46 Curvularia eragrostidis 4,12 Cladosporium nigrellum 23 Cladosporium nigrellum 4,12 Penicillium sp 88 Penicillium roseo-purpureum 60,5 Aspergillus sp 24 Penicillium implicatum 4,12 Penicillium brefldianum 62
Penicillium implicatum 22
Aspergillus oryzae 12
Tổng cộng 329 Tổng cộng 120,34
Trong lô MS-02 ở các mẫu ch−a xử lý phân lập đ−ợc 9 loìa nấm sợi thuộc 4 chi:
Aspergillus fumigatus, Curvularia eragrostidis, Cladosporium nigrellum, Penicillium roseo-purpureum, Penicillium implicatum, Penicillium sp, Emericellopsis terricola, Penicillium brefldianum, Aspergillus oryzae, với số l−ợng 329 x105 cfu/g giầy.
Sau khi xử lý, năm loại nấm sợi đã đ−ợc phân lập lại với số l−ợng nhỏ: 120,34 cfu/g giầy. Trong đó 4 loài nấm sợi Penicillium brefldianum, Penicillium roseo- purpureum, Penicillium implicatum, Aspergillus oryzae không thấy xuất hiện. Nh− vậy số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy da sau khi xử lý đã giảm hàng trăm nghìn lần.
Bảng 18. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy da tr−ớc và sau khi xử lý hoá chất thuộc lô MS-03
Mẫu ch−a xử lý Mẫu sau khi xử lý Tên loài Số l−ợng
(x105cfu/g)
Tên loài Số l−ợng (cfu/g)
Aspergillus fumigatus 26,0 Aspergillus fumigatus 73,3 Cladosporium nigrellum 48,0 Cladosporium nigrellum 3,6 Penicillium roseo-purpureum 24,0 Penicillium roseo-purpureum 54,0
Penicillium sp 16,0 Penicillium sp 14,4
Aspergillus sp 25,0 Aspergillus sp 36,0
Penicillium brefldianum 80,0
Aspergillus oryzae 22,0
Tổng cộng 241,0 Tổng cộng 181,3
Trong lô MS-03, ở các mẫu ch−a xử lý phân lập đ−ợc 7 loài nấm sợi thuộc 3 chi: Aspergillus fumigatus, Cladosporium nigrellum, Penicillium roseo-purpureum, Penicillium sp, Aspergillus sp, Penicillium brefldianum, Aspergillus oryzae với sô− l−ợng 241 x105cfu/g giầy.
Sau khi xử lý nấm sợi phân lập đ−ợc với số l−ợng nhỏ: 181,3 cfu/g giầy. Trong đó 2 loài nấm sợi Aspergillus oryzae, Penicillium brefldianum. Không thấy xuất hiện. Nh− vậy số l−ợng bào tử nẫm mốc trên giấy da sau khi xử lý đã giảm hàng trăm nghìn lần.
Từ kết quả của 3 lô giầy da phân lập sau khi chống mốc, một số loài nấm mốc hay gặp trên giầy da và có khả năng phân huỷ các cơ chất trên giầy không thể sinh
tr−ởng đ−ợc nữa nh−: Aspergillus oryzae, Penicillium brefldianum, Penicillium implicatum… một số loài nấm mốc còn lại có tần xuất bắt gặp rất nhỏ.
III.3.3.2. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy vải tr−ớc và sau khi xử lý
Các mẫu giầy vải đ−ợc ngâm trong n−ớc vô trùng và phân lập nấm sợi trên môi tr−ờng Czapek. Sau 10-15 ngày xác định số l−ợng và định tên
Trong lô MS-04, ở các mẫu ch−a xử lý phân lập đ−ợc 9 loài nấm sợi thuộc 5 chi: Aspergillus arenarius, Apergillus restrictus, Aspergillus zonatus, Cladosporium nigrellum, Curvularia eragrostidis, Eurotium chevalieri, Penicillium baarense, Penicillium roseo-purpureum, Penicillium sp. Với số l−ợng 283,49 x103cfu/g giầy
Bảng 19. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy vải tr−ớc và sau khi xử lý thuộc lô MS-04
Mẫu ch−a xử lý Mẫu sau khi xử lý Tên loài Số l−ợng
(x103cfu/g)
Tên loài Số l−ợng (cfu/g)
Aspergillus arenarius 115 Aspergillus arenarius 18,8 Curvularia eragrostidis 0,6 Curvularia eragrostidis 0,47 Cladosporium nigrellum 0,45 Cladosporium nigrellum 3,29 Penicillium baarense 0,6 Penicillium baarense 0,47
Penicillium sp 0,64 Penicillium sp 0,47 Aspergillus zonatus 18 Apergillus restrictus 120 Penicillium roseo-purpureum 18 Eurotium chevalieri 10,2 Tổng cộng 283,49 Tổng cộng 23,5
Sau khi xử lý, năm loài nấm sợi(thuộc 4 chi) đã đ−ợc phân lập lại với số l−ợng nhỏ: 23,5cfu/g giầy. Trong đó 4 loại nấm sợi Aspergillus zonatus, Apergillus restrictus, Penicillium roseo-purpureum, Eurotium chevalieri. Không thấy xuất hiện. Nh− vậy số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy vải sau khi xử lý đã giảm hàng vạn lần.
Trong lô MS-05, ở các mẫu ch−a xử lý phân lập đ−ợc 8 loài nấm sợi thuộc 5 chi: Aspergillus arenarius, Aspergillus oryzae, Aspergillus zonatus, Cladosporium nigrrllum, Curvularia eragrostidis, Eurotium chevalieri, Penicillium nalgiovensis, Penicillium sp. Với số l−ợng 366,5 x103cfu/g giầy.
Bảng 20. Số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy vải tr−ớc và sau khi xử lý thuộc lô MS-05
Mẫu ch−a xử lý Mẫu sau khi xử lý Tên loài Số l−ợng
(x103cfu/g)
Tên loài Số l−ợng (cfu/g)
Aspergillus arenarius 96 Aspergillus arenarius 12,7 Curvularia eragrostidis 136 Curvularia eragrostidis 20,4 Cladosporium nigrellum 44 Cladosporium nigrellum 10,2
Penicillium sp 32 Penicillium sp 5,1
Penicillium nalgiovensis 3,4 Penicillium nalgiovensis 1,2 Aspergillus zonatus 6,8
Eurotium chevalieri 12,5 Aspergillus oryzae 5,8
Tổng cộng 336,5 Tổng cộng 49,6
Sau khi xử lý, năm loại nấm sợi (thuộc 4 chi) đã đ−ợc phân lập lại với số l−ợng rất nhỏ: 49,6 cfu/g giầy. Trong đó các loài nấm sợi Aspergillus zonatus, Eurotium chevalieri, Aspergillus oryzae không thấy xuất hiện. Nh− vậy số l−ợng bào tử nấm mốc trên giầy vải sau khi xử lý đã giảm vạn lần
Từ kết quả của 2 lô thí nghiệm, sau khi xử lý bằng công nghệ chống nấm mốc, một số nấm mốc hay bắt gặp trên giày vải có khả năng phan huy các cơ chất trên giầy không thể sinh tr−ởng đ−ợc nh−: Aspergillus zonatus, Eurotium chevalieri, Aspergillus oryzae, Penicillium roseo-purpureum…Một số loài nấm mốc còn lại bắt gặp rất nhỏ.
III.3.4. Kết luận
Sau khi xử lý bằng các công nghệ chống nấm mốc hay gặp trên giầy vải và giầy da có khả năng phân huỷ các cơ chất trên giầy không thể sinh tr−ởng đ−ợc, số loài nấm mốc khác có tần suất bắt gặp rất nhỏ.
III.4. Cỏc cụng nghệ chống mốc cho cỏc sản phẩm giầy vải, giầy da trong quỏ trỡnh sản xuất, bảo quản và lưu thụng
III.4.1. Nghiờn cứu ứng dụng cụng nghệ xử lý độẩm để phũng chống nấm mốc trong sản xuất và lưu thụng cỏc loại sản phẩm giầy vải, giầy da xuất khẩu
III.4.1.1. Độ ẩm, cơ sở và một số biện pháp chống ẩm ứng dụng trong ngành giầy