phũng thớ nghiệm.
Quy trỡnh tạo khối tế bào sõm Ngọc Linh từ giai đoạn nuụi cấy tạo callus đến nuụi cấy trong Bioreactor 15 lớt:
- Quy trỡnh kỹ thuật tạo callus từ rễ sõm Ngọc Linh tự nhiờn, trong đú sử dụng mụi trường MS cú bổ sung 1 mg/l NAA và 0,1 mg/l kinetin với pH mụi trường = 5,8, duy trỡ nuụi cấy trong thời gian 35 ngày. Với cỏc điều kiện và thành phần mụi trường như trờn tỷ lệ tạo callus đạt 40%.
- Quy trỡnh kỹ thuật duy trỡ nuụi cấy callus trờn mụi trường thạch mềm. Mụi trường và điều kiện thớch hợp để tế bào phỏt triển tốt nhất là: mụi trường MS cú bổ sung NAA, 0,1 mg/l kinetin, 30 g/l đường saccarose, pH mụi trường: 5,8; nhiệt độ 24-260C trong thời gian 35 ngày, sau 3 – 4 lần cấy chuyển trờn mụi trường thạch mềm thỡ tế bào khụng cũn khả năng biệt húa và tốc độ phỏt triển của tế bào cao nhất và ổn định với tỷ lệ tăng trưởng đạt 5,38 lần.
- Đó xõy dựng được qui trỡnh kỹ thuật nuụi cấy và tối ưu húa nuụi cấy sõm Ngọc Linh trong mụi trường lỏng. Đó lựa chọn được mụi trường và điều kiện nuụi cấy thớch hợp cho tế bào sõm thớch nghi và phỏt triển tốt trờn mụi trường lỏng trờn hệ thống shaker bỡnh 150 ml. Mụi trường MS cú sử dụng NAA = 6,42 mg/l ; kinetin = 0,11 mg/l; đường = 34,3 g/l, pH = 5,6-5,8; nhiệt độ nuụi cấy là 24-260C, khụng cú ỏnh sỏng, tốc độ lắc của shaker là 150 vũng/phỳt, thời gian nuụi cấy: 14 ngày. Khi sử dụng mụi trường nuụi cấy tối ưu khối lượng tế bào thu được đạt 20,11 g/l và khối lượng saponin toàn phần đạt 20,01mg/g.
- Đó xõy dựng qui trỡnh kỹ thuật nuụi cấy trờn hệ thống Bioreactor 5 lớt và 15 lớt với cỏc điều kiện nuụi cấy như trờn hệ thống mỏy lắc.
- Qui trỡnh kỹ thuật thu hoạch khối tế bào sõm và hàm lượng chất NAA tồn dư trong giới hạn cho phộp.