b. Ginsenosid Rg1, Rb1 và Rd
3.2.3. Kết quả xõy dựng tiờu chuẩn cơ sở
3.2.3.1. Kết quả xõy dựng TCCS của rễ SNL tự nhiờn
a. Kết quả phõn tớch cỏc chỉ tiờu của rễ SNL tự nhiờn
Qua phõn tớch cỏc chỉ tiờu của SNL tự nhiờn, chỳng tụi thu được cỏc kết quả như sau:
* Mụ tả:Rễ củ cú dạng hỡnh con quay, dài 2,4-4 cm, đường kớnh 1,5-2
cm. Rễ cú màu nõu nhạt, cú những võn ngang và nốt cỏc rễ con. Thể chất nạc, chắc, khú bẻ góy. Vị đắng, hơi ngọt. Cú mựi thơm đặc trưng.
* Vi phẫu: Lỏt cắt ngang hỡnh trũn từ ngoài vào trong cú: Lớp bần gồm
nhiều hàng tế bào hỡnh chữ nhật xếp đồng tõm. Mụ mềm vỏ gồm nhiều hàng tế bào cú thành mỏng xếp lộn xộn hỡnh dạng khỏc nhau. Libe xếp thành dóy dài, nhiều ống tiết xếp rải rỏc. Gỗ cấu tạo từ cỏc mạch gỗ nhỏ thành từng đỏm xếp thành dải hướng tõm. Tầng phỏt sinh libe gỗ bao bọc cỏc bú libe, bú gỗ.
Hỡnh 3.7. Hỡnh ảnh vi phẫu rễ SNL tự nhiờn
* Soi bột: Bột màu vàng nõu, mựi thơm, vị đắng ngọt. Soi dưới kớnh hiển vi thấy: Nhiều mảnh mụ mềm mang tinh bột (1), Mảnh bần (2), Mảnh mạch vạch (3), Sợi tập trung thành bú (4), Tinh thể calci oxalat hỡnh cầu gai (5), Mảnh mụ mang tuyến tiết (6)
102
* Tro toàn phần: lấy 20 g dược liệu, nghiền nhỏ, sấy tới khối lượng
khụng đổi. Lấy 2 g bột khụ tiến hành theo DĐVN III, phụ lục 7.6. Kết quả phõn tớch 6 mẫu cho thấy: tro toàn phần 9,0 ± 0,8 %
* Định tớnh:
- Phương phỏp húa học: kết quả thử 6 mẫu cho thấy bọt cao và bền trong thời gian > 15 phỳt.
- Tiến hành định tớnh SNL tự nhiờn theo phương phỏp đó nờu ở mục 2.2.8.1, cho kết quả ở hỡnh 3.9.
Hỡnh 3.9.Sắc ký đồ chuẩn (a) và SNL
tự nhiờn (HPLC-b), sắc ký lớp mỏng (c)
Từ kết quả ở hỡnh 3.9 thấy: Khi so sỏnh với mẫu chuẩn SNL tự nhiờn trờn sắc ký lớp mỏng thỡ cả 2 sắc ký đồ tương tự nhau, vậy với điều kiện sắc ký này, chỳng tụi thấy cỏc vết sắc ký tỏch biệt rừ ràng và cú thể ứng dụng điều kiện sắc ký này để định tớnh cỏc chất chứa SNL. Trờn sắc ký đồ HPLC, mẫu thử SNL tự nhiờn cú cỏc pớc trựng với thời gian lưu của cỏc pớc chuẩn Rg1, Rb1 và Rd. Vậy trong SNL tự nhiờn cú chứa Rg1, Rb1 và Rd, điều này hoàn toàn phự hợp với cỏc tài liệu cụng bố trước đõy.
c
a b
103
Vậy mẫu SNL tự nhiờn chỳng tụi sử dụng trong nuụi cấy SNL sinh khối được khẳng định là SNL tự nhiờn. Mẫu SNL này được xỏc định lại tại Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương và Viện Dược liệu.
* Định lượng:
Để đỏnh giỏ được chất lượng SNL tự nhiờn, nguyờn liệu ban đầu của quỏ trỡnh tạo SNL sinh khối, chỳng tụi tiến hành phõn tớch hàm lượng hoạt chất saponin và cỏc ginsenosid chớnh. Từ đú so sỏnh với kết quả phõn tớch hàm lượng của sản phẩm SNL sinh khối, gúp phần đỏnh giỏ chất lượng, hiệu quả của quỏ trỡnh tạo sinh khối.
- Saponin toàn phần:
Tiến hành xỏc định saponin toàn phần của 6 mẫu độc lập, thu được kết quả ở bảng 3.31.
Bảng 3.31. Hàm lượng saponin toàn phần trong SNL tự nhiờn
Mẫu Khối lượng mẫu (g) Khối lượng saponin (g) Hàm lượng Saponin (%) 1 0,20124 0,02581 12,82 2 0,19892 0,02022 10,16 3 0,20283 0,02151 10,6 4 0,20951 0,01948 9,26 5 0,19762 0,01857 9,36 6 0,20325 0,02446 12,01 X ± SD 10,70 ± 1,44
Từ kết quả trỡnh bày ở bảng 3.31, chỳng ta thấy: hàm lượng saponin toàn phần trong mẫu SNL tự nhiờn là 10,70%, kết quả này phự hợp với cỏc tài liệu cụng bố trước là 11%. Vậy hàm lượng saponin toàn phần trong SNL 5 năm tuổi cao hơn hẳn so với cỏc loại sõm tự nhiờn khỏc trờn thế giới cú cựng độ tuổi (sõm Hàn Quốc 4 %, sõm Mỹ 7%).
104
- Ginsenosid Rg1, Rb1 và Rd:
Bảng 3.32. Hàm lượng Rb1, Rg1 và Rd trong mẫu sõm sinh khối
Mẫu Rg1 (%) Rb1 (%) Rd (%) Tổng (%) 1 1,28 2,02 0,9 4,2 2 1,27 2,01 0,91 4,19 3 1,24 1,99 0,92 4,15 4 1,21 2,03 0,89 4,13 5 1,26 2,02 0,91 4,19 6 1,25 1,98 0,92 4,15 X ± SD 1,25 ± 0,02 2,01 ± 0,02 0,91 ± 0,01 4,17 ± 0,03 Hàm lượng tổng 3 ginsenosid trong SNL tự nhiờn là 4,17 ± 0,03%, trong đú Rg1 = 1,25 ± 0,02%, Rb1 = 2,01 ± 0,02% và Rd = 0,91 ± 0,01%. Kết quả này phự hợp với cỏc tài liệu cụng bố trước đõy vế SNL tự nhiờn cựng độ tuổi (Rg1 = 1,37%, Rb1 = 2,0% và Rd = 0,87%, tổng Rb1 + Rg1 + Rd = 4,24%).
b. Tiờu chuẩn cơ sở của rễ SNL tự nhiờn
Từ kết quả phõn tớch cỏc chỉ tiờu chất lượng của SNL tự nhiờn ở trờn, chỳng tụi xõy dựng TCCS cho rễ SNL tự nhiờn như sau:
Nguồn gốc: Là rễ SNL tự nhiờn 5 – 6 năm tuổi (Panax vietnamese Ha et Grushv). Rễ SNL tự nhiờn được thu hỏi tươi, rửa sạch, bảo quản lạnh.