1. YấU CẦU KỸ THUẬT Cụng thức điều chế cho 100 g cao:
2.6. Định lượng: Phương phỏp HPLC (Phụ lục 4.3, DĐVN III)
* Điều kiện sắc ký:
- Cột Apollo C18 (5àm, 25cm x 4mm ) hoặc cột tương đương. - Pha động:
+ Dung mụi A: Hỗn hợp Acetonitril - nước (8:2).
120
Bảng 3.39. Chương trỡnh pha động định lượng cỏc ginsenosid trong cao
đặc SNL sinh khối
Thời gian (phỳt) Dung mụi A Dung mụi B
0 --> 25 22 78 25 --> 40 22 --> 35 78 --> 65 40 --> 75 35 --> 42 65 --> 58 75 --> 80 42 --> 100 58 --> 0 80 --> 85 100 --> 22 0 -->78 85 --> 95 22 78 - Tốc độ dũng: 2 ml/phỳt. - Detector UV ở bước súng 203 nm, - Thể tớch tiờm: 10 àl.
Chuẩn bị dung dịch thử và dung dịch chuẩn:
- Dung dịch thử:
Cõn chớnh xỏc khoảng 0,2 g chế phẩm vào bỡnh nún cú nỳt mài 100 ml, thờm chớnh xỏc 50 ml methanol, đậy nỳt, cõn chớnh xỏc khối lượng. Đun sụi hồi lưu cỏch thủy trong 1 giờ, để nguội, cõn xỏc định lại khối lượng, thờm methanol để bổ sung khối lượng mất đi (nếu cần). Ly tõm, hỳt chớnh xỏc 25 ml dịch ly tõm, cụ trờn cỏch thủy đến cạn. Hũa cắn trong 5ml nước, chuyển vào cột chiết xuất pha rắn (C18, 360 mg đó được hoạt hoỏ lần lượt với 5 ml MeOH, 5 ml MeOH 50%, 5 ml nước). Mở khoỏ, cho dung dịch chảy qua cột với tốc độ 20-25 giọt/phỳt, Khi dung dịch thử chảy vừa đến mặt trờn của lớp bột trong cột, đúng khoỏ. Dựng 20ml nước để trỏng rửa cốc và giấy lọc rồi chuyển vào cột chiết xuất pha rắn trờn, Tiếp tục mở khoỏ để dung dịch chảy với tốc độ ở trờn. Bỏ dung dịch nước chảy ra. Rửa tiếp với 10ml methanol 30% với tốc độ như trờn. Bỏ cỏc dịch rửa methanol. Rửa giải tiếp với 40ml methanol. Hứng lấy dịch chiết methanol, cụ trờn cỏch thuỷ đến cạn. Dựng methanol để hoà tan và chuyển toàn bộ cắn vào bỡnh định mức 10 ml, thờm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,45àm,
Trong suốt quỏ trỡnh chuẩn bị dung dịch thử, khụng được để cột khụ. - Dung dịch chuẩn:
121
Dung dịch chuẩn ginsenosid Rg1 trong methanol cú nồng độ đó biết khoảng 0,15 mg trong 1ml.
Dung dịch chuẩn ginsenosid Rb1 trong methanol cú nồng độ đó biết khoảng 0,25 mg trong 1ml,
Dung dịch chuẩn ginsenosid Rd trong methanol cú nồng độ đó biết khoảng 0,1mg trong 1ml.
Tiến hành:
Tiến hành sắc ký theo điều kiện đó nờu, ghi thời gian lưu và diện tớch của cỏc pớc ginsenosid Rg1, ginsenosid Rb1 và ginsenosid Rd trong mỗi dung dịch.
Hàm lượng (g) ginsenosid Rg1 (hoặc ginsenosid Rb1 hoặc ginsenosid Rd) trong 100g chế phẩm được tớnh theo cụng thức:
At ì Cc ì 50 ì 10 ì 100 X(mg) =
Ac ì mt(1-b) ì 25 ì 1000 Trong đú:
At và Ac: Diện tớch pớc ginsenosid Rg1 (hoặc Rb1 hoặc Rd) trong dung dịch thử và dung dịch chuẩn.
Cc: Nồng độ dung dịch Rg1 (hoặc Rb1 hoặc Rd) chuẩn (mg/ml). mt: Khối lượng của mẫu thử (g).
b: Độ ẩm của chế phẩm (tớnh theo số thập phõn).