Nguyên tắc: là phương pháp tách chiết RNA khỏi các thành phần khác dựa trên sự phân tách các pha bằng li tâm. Một dung dịch ly giải gồm phenol pH4 và guanidine thyocyanat sẽ làm phá vỡ tế bào, giải phóng nucleic acid, protein và các thành phần khác bao gồm DNase và RNase. Dưới tác dụng của lực li tâm lớn sẽ làm phân tách thành ba pha: pha trong suốt ở trên (RNA), pha giữa
(protein biến tính) và pha Phenol – Chloroform ở dưới (DNA, mảnh vỡ tế
bào…). Trong quy trình này, chúng tôi sử dụng kit tách chiết RNA của công ty
TNHH Công Nghệ Sinh học Khoa Thương.
Quy trình:
− Chuẩn bị số lượng ống eppendorf bằng số bệnh phẩm cộng thêm chứng dương và chứng âm; đánh dấu các ống eppendorf với ký hiệu của các bệnh phẩm.
− Thêm 100 µl huyết thanh vào mỗi ống.
− Thêm 900 µl dung dịch 1. Vortex mạnh ít nhất 5 giây. Để yên 10 phút. − Thêm 200 µl dung dịch 2, trộn thật đều.
− Ly tâm 13000 vòng/phút trong 10 phút ở nhiệt độ phòng.
− Chuyển 600 µl dịch nổi vào ống eppendorf mới.
− Thêm 600 µl dung dịch 3 (dung dịch này cần được trộn đều trước khi sử dụng).
− Trộn đều hỗn hợp và để yên 10 phút.
− Ly tâm 13000 vòng/phút trong 10 phút ở nhiệt độ phòng.
− Cẩn thận hút bỏ phần dịch nổi.
− Thêm 900 µl dung dịch 4. Ly tâm 13000 vòng/phút trong 5 phút ở nhiệt
độ phòng. Cẩn thận hút bỏ dịch nổi.
− Làm khô cặn ở 600C (trong bồn ủ nhiệt khô) trong 10 phút. − Hòa cặn lại trong 50 µl dung dịch 5.
− Nếu không sử dụng ngay, dịch RNA tách chiết được bảo quản ở -200C cho đến 6 tháng.