2.1.1. Cây thuốc
Các bộ phận của cây thuốc đƣợc sử dụng cho chiết xuất, gồm rễ, lá, nụ hoa, đài hoa hoặc toàn bộ cây bỏ rễ đã đƣợc làm khô. Các nguyên liệu đƣợc thu nhận trong thời gian 2015-2017 và đƣợc phân loại bởi ThS. Nguyễn Anh Đức và giữ tại Khoa Sinh học, Trường ĐH Khoa học Tự nhiên.
- Đài hoa của cây bụp giấm Hibiscus sabdariffa L.) được thu hái tại vườn, trồng ở Hà Nội (Hà Tây) từ tháng 9 đến tháng 10. Đài hoa tươi được thu hái trong khoảng 15 ngày sau khi hoa nở, ở trạng thái mềm, không nhăn héo và có màu đỏ sẫm.
- Rễ cam thảo Glycyrrhiza uralensis Fisch. ex DC.) và quả ngũ vị tử (Schisandra chinensis (Turcz.) Baill) đƣợc thu mua ở cửa hàng thuốc Đông y ở Hà Nội. Rễ cam thảo là loại rễ đƣợc thu hái từ tháng 5 đến tháng 6, đã đƣợc cắt thành từng lát mỏng khoảng 2 mm và sấy khô. Quả ngũ vị tử là dƣợc liệu ở dạng quả chín, đƣợc thu hái từ tháng 9 đến tháng 10.
- Lá của cây chùm ngây (Moringa oleifera Lam.) và lá của cây đinh lăng (Polyscias fruticosa (L.) Harms.) được thu hái tại vườn, trồng ở Bắc Giang từ tháng 5 đến tháng 6 trên cây đƣợc trồng đƣợc khoảng 2 đến 3 năm.
- Nụ hoa của cây hòe Sophora japonica L. được thu hái tại vườn, trồng ở Thái Bình từ tháng 8 đến tháng 9 trên cây trồng đƣợc khoảng 4 năm. Nụ hoa hòe đƣợc thu hái là nụ tấm.
- Nụ hoa hòe chuẩn, là dƣợc liệu chuẩn Dƣợc điển có nguồn gốc từ cây Hòe (Sophora japonica L.) đóng gói 10 g, có độ ẩm 10,0%, hàm lƣợng rutin 21,1% do Viện kiểm nghiệm thuốc Trung Ƣơng, Bộ Y tế cung cấp có số kiểm soát CV 0116042.01.
- Nguyên liệu ở dạng toàn cây, bỏ rễ từ cây rau má (Centella asiatica (L.) Urban. được thu hái tại vườn và lá của cây sen Nelumbo nucifera Gaertn. được thu hái tại hồ, trồng ở Bắc Ninh từ tháng 8 đến tháng 9; nguyên liệu toàn cây, bỏ rễ từ cây rau đắng biển Bacopa monnieri (L.) Wettst.) thu hái tại vườn trồng ở Ninh Thuận từ tháng 7 đến tháng 8, chọn loại có chiều dài từ 15-20 cm; vỏ củ hành tây Allium cepa L. được thu mua ở tại vườn trồng ở Đà Lạt từ tháng 11 đến tháng 12.
47
2.1.2. Chủng vi sinh vật và dòng tế bào ung thƣ
Các chủng vi sinh vật kiểm định gồm: E. coli ATCC 25922, S. aureus ATCC 25923, B. subtilis ATCC 23857 và B. cereus ATCC 14579 đƣợc cung cấp từ Viện Vi sinh vật và Công nghệ sinh học, ĐHQGHN. Dòng tế bào ung thƣ đại trực tràng HCT116 được cung cấp từ Bộ môn Sinh học Tế bào/ Khoa Sinh học, Trường ĐH Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN.
2.1.3. Động vật thí nghiệm
Chuột giống đực, dòng Swiss albino khỏe mạnh, trọng lƣợng 25 - 30 g/con, khoảng 8-9 tuần tuổi, đƣợc Ban cung cấp Động vật thí nghiệm, Học viện Quân y cung cấp. Chuột được nuôi trong điều kiện tiêu chuẩn, đầy đủ thức ăn nước uống trước khi nghiên cứu 7 ngày và trong suốt thời gian thí nghiệm tại phòng thí nghiệm của Học viện quân Y, Bộ Quốc phòng. Mỗi nhóm thí nghiệm có trung bình n= 32 con.
2.1.4. Hóa chất nghiên cứu
Các chất chuẩn nghiên cứu hóa lý và hoạt tính sinh học: Quercetin chuẩn hóa lý mã số PHR1488-1, Sigma Aldrich, Mỹ); quercetin chuẩn dƣợc lý mã số 337951- 25G, Sigma Aldrich, Mỹ); DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl chuẩn (Sigma Aldrich, Mỹ , MDA Sigma Aldrich, Mỹ ; rutin chuẩn (Boipurify, Trung Quốc);
paracetamol chuẩn Dƣợc điển Việt Nam, mã số 0415019.04), vitamin C chuẩn (Canada);; FeCl3 (Merck, Đức), K₃[Fe(CN)₆] (Merck, Đức), TCA (axit Trichloroaxetic, Merck, Đức); Ammonium Molybdate (Merck, Đức ;
Các dung môi, hóa chất chiết xuất, phân tích: H2O Merck, Đức , HCl đặc Merck, Đức ; methanol. Merck, Đức ; axit axetic (Merck, Đức ; acetonitrile (Merck, Đức ; ethanol Merck, Đức ; AlCl3 Canada ; bản mỏng sắc ký Silicagel F254 20x20 cm Merck, Đức ; hexan Merck, Đức ; axetyl axetat Ấn Độ ; NaNO2 (Canada);
Na2HPO4 (Canada), KH2PO4 (Canada), Na3PO4 (Canada); cloroform Ấn Độ ; n- butanol Merck, Đức ; bột Silicagel F254 Merck, Đức ; (CH3)2SO (Dimethyl sulfoxit, Hà Lan); NaOH (Xilong Scientific, Trung Quốc), H2SO4 (Xilong Scientific, Trung Quốc) H3PO4 (Xilong Scientific, Trung Quốc), ethanol (Xilong Scientific, Trung Quốc), methanol(Xilong Scientific, Trung Quốc).
Dung dịch đệm, hệ dung môi có thành phần hóa chất: HCl pH 3.0 ; TBA 0.6%;
MDA trong n-Butanol; đệm PBS Phosphate buffer Saline ; đệm phosphat 0,1 M, pH
48
= 7,4; dung dịch Natripyruvat chuẩn 22 mg %, pha trong đệm phosphat; dung dịch cơ chất ALT, AST; dung dịch 2,4-dinitrophenylhydrazin (DNPH) 20mg %; dung dịch NaOH 0,4 N; thuốc thử Erhlich I, II; dung dịch NaNO2 0,5%; axit HCl 1,5%; thuốc thử diazo pha trước khi dùng; dung dịch CoSO4 2,16%; đệm citrat 95 mmol/l, pH = 4,1; bromocresol green 0,66 mmol/l; albumin chuẩn: 36,2 g/l; Các d.d. creatinin chuẩn, cú nồng độ 177, 354 , 530, 707 àmol/l; dung dịch Na-tungstat 10%; dung dịch H2SO4.
2/3N; dung dịch Picrat-kiềm; các dung dịch thuốc thử Pb CH3COO 2 10 %, FeCl3 5%, thuốc thử Cyanidin, Mayer, Bouchardat, dung dịch gelatin 1%
2.1.5. Dụng cụ, thiết bị chính đƣợc sử dụng trong nghiên cứu
Bảng 2.1. Danh mục dụng cụ, thiết bị chính sử dụng trong nghiên cứu Tên dụng cụ, thiết bị Hãng, nước Mục đích sử dụng
Bể siêu âm Elma, Đức Chiết xuất, xử lý mẫu
Bếp đun bình cầu có khuấy từ Electrothermal, Anh Chiết xuất, xử lý mẫu Bình thủy tinh đáy b ng, đáy tròn
các loai cỡ Isolab-Đức Đựng mẫu cho chiết, phân tích
Ống sinh hàn, cột sắc ký Duran, Đức Chiết xuất, tinh chế mẫu
Máy trộn Maxi MixII, Mỹ Trộn mẫu
Tủ sấy áp lực giảm MP 301zp, Mỹ Sấy mẫu, tinh chế mẫu
Máy cô quay IKA, Đức Cô mẫu, làm giàu mẫu
Hệ thống HPLC Agilent 1260, Đức Phân tích mẫu HPLC Máy đo quang phổ UV-vis HALO RB10, Mỹ Phân tích mẫu b ng UV-vis Máy phổ hồng ngoại IR TENSOR II, Đức Phân tích phổ IR
Máy đo điểm nóng chảy Buchi, Thụy sĩ Phân tích điểm chảy Máy đo pH Thermo Orion Star, Mỹ Đo giá trị pH
Cân điện tử AUW2200 Shimadzu, Nhật Cân khối lƣợng loại 5 số, cân mẫu
Nồi khử trùng ALP, Nhật Bản Khử trùng mẫu cho nuôi cấy vi sinh, làm mềm mẫu chiết xuất Máy lắc Sartorius, Đức Nuôi cấy vi sinh, đánh giá hoạt
tính sinh học
Tủ ấm, tủ cấy vi sinh Memmert, Đức Nuôi cấy vi sinh, đánh giá hoạt tính sinh học
Máy cô chân không Anh Cô đặc mẫu
Máy nghiền đồng thể Đức Nghiền và đồng hóa mẫu
Thiết bị Power Lab Stoelting, Mỹ Đánh giá sinh lý chuột
Hệ thống Any - maze Stoelting, Mỹ Ghi hình ảnh và phân tích hành vi chuột
Buồng tăng thân nhiệt HVQY, Việt Nam Nghiên cứu tăng thân nhiệt trên chuột
Các trang thiết bị chính sử dụng trong nghiên cứu đƣợc cung cấp từ Phòng Công nghệ Hóa sinh và phòng Công nghệ sinh học, Viện Công nghệ mới, Viện Khoa học và Công nghệ quân sự, Bộ Quốc phòng; Bộ môn Hóa sinh và Sinh học tế bào thuộc Khoa
49
Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN; Các bộ môn Sinh lý, Dược lý và Y học Quân binh chủng thuộc Học viên Quân y, Bộ Quốc phòng.