ðể chế tạo được văc xin có hiệu lực phịng bệnh cao thì việc nghiên cứu để hiểu rõ
về kháng nguyên, sự phân bố và vai trò của chúng ñối với khả năng kích thích sinh ñáp ứng miễn dịch là vơ cùng quan trọng
Ngày nay, vai trị của kháng nguyên P.mutocida trong ñáp ứng miễn dịch ñã dần ñược làm sáng tỏ. ðối với P.multocida gây bệnh cho gia cầm và vai trò của các loại
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 17 giả đối với vai trò của từng loại kháng nguyên khác nhaụ Bằng cơng nghệ sinh học phân tử, ngày ngay vai trị của từng loại kháng ngun đối với khả năng kích thích sinh đáp
ứng miến dịch của cơ thể đang dần ñược xác ñịnh.
Polysaccharide tinh khiết
Theo Confer, 1993 bản chất capsule của P.multocida là polysaccharide và nó giữ vai trị kích thích sinh đáp ứng miễn dịch
Theo Avakian và cộng sự, 1989 cho rằng kháng nguyên capsule tinh khiết type A kích thích tạo kháng thể ở gia cầm chống lại bệnh sau khi thử thách với kháng nguyên
ñồng typẹ
Mosier, 1992 cho rằng, sở dĩ có nhiều ý kiến khác nhau về mức độ bảo hộ mà kháng nguyên capsule tinh khiết mang lại là do mức độ tinh khiết trong q trình chiết tách
kháng ngun. Kháng ngun capsule có độ tinh khiết cao khó tạo đáp ứng miễn dịch
hơn capsule khơng tinh khiết do ở capsule khơng tinh khiết cịn chứa nhiều loại protein và các chất có vai trị kích thích tạo kháng thể.
Gần ñây, bằng kỹ thuật tinh chế protein có độ tinh khiết cao cho phép nhiều tác giả nghiên cứu vai trò của protein tinh khiết trong ñáp ứng miễn dịch ñối với kháng nguyên
của P.multocida trong cơ thể gia súc, gia cầm.
Truscott và Hirsh, 1990 đã tinh chế protein màng ngồi 50Kda từ P.multocida phân lập ở chim và nhận thấy protein này ức chế khả năng tạo ñáp ứng miễn dịch thực bào ở chim. Protein 34 Kda cho phản ứng dương tính với huyết thanh của gà kháng
P.multocida cùng serotypẹ Sự khác nhau giữa các protein màng ngoài của các chủng
trong cùng serotype P.multocida phân lập ñược từ gia cầm là ở vị trí gắn của một protein
ở vùng 34 và 38 Kdạ
Ramdani và Adler, 1992 bằng kỹ thuật kháng thể đơn dịng và enzyme thực hiện với các kháng nguyên protein tinh chế ñã ñi ñến kết luận, kháng nguyên protein tinh chế chỉ
đóng một vai trị rất nhỏ trong đáp ứng miến dịch chống Pasteurella mutocida.
Lipopolysacharide (LPS)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 18 dịch phụ thuộc vào bản chất của loại LPS và lồi động vật được tiêm. Rimler và Rhoades, 1989 cho rằng LPS tinh khiết của P.multocida là chất gây miễn dịch chính ở gia cầm.
Tsuji và Matsumoto, 1988 nghiên cứu trên gà tây nhận thấy chất gây miễn dịch chính là phức hợp protein – lipopolisacharidẹ
Mendes và cộng sự, 1994 ñã gây bệnh thực nghiệm bằng cách tiêm LPS có độ tinh khiết cao trên gia cầm bằng ñường tiêm dưới da và tĩnh mạch. Tác giả nhận thấy, LPS
không gây tổn thương ñại thể nhưng gây tổn thương vi thể ở dạ Tác giả cũng cho rằng
LPS tinh khiết đóng vai trị đầu tiên trong ñáp ứng viêm ở bệnh tụ huyết trùng gia cầm.
Protein ñộc tố
Kết quả nghiên cứu của Rimler và Brogden, 1986, Rimler và Rhoades, 1989 cho thấy, một số chủng P.multocida serotype A, D có protein độc tố (khoảng 145Kda) gây
độc cho tế bào phổi bê và gây xuất huyết, hoại tử khi tiêm vào da chuột lang, gây chết ñối
với gia cầm và các loài gặm nhấm. Thurston và cộng sự cho rằng protein ñộc tố là một kháng nguyên, tác giả đã thử nghiệm vơ hoạt protein độc tố (giải ñộc tố) rồi tiêm cho
chuột, chuột ñược miễn dịch khi thử thách với Pasteurela multocidạ
Cho tới nay nhiều nhà khoa học ñã xác ñịnh kháng nguyên của vi khuẩn P.multocida gồm 3 loại:
Kháng nguyên vỏ K (Capsule), bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp Carter
ñã phân loại P.multocida gồm 4 serotype A, B, D, Ẹ Trong đó, serotype gây bệnh cho gia
cầm là serotype A, D.
Kháng nguyên thân O: Khi kháng nguyên vỏ (K) ñược tách ra, vi khuẩn bộc lộ một lớp kháng nguyên thân, ñược phát hiện nhờ phản ứng ngưng kết hồng cầu và phản ứng
kết tủa khuyếch tán trong thạch. Heđleston, 1972 chia P.multocida thành 16 typẹ Trong đó chủng gây bệnh cho gia cầm thuộc các type 3,5,7,8 và 9.
Sự kết hợp phân loại theo kháng nguyên vỏ (K) và kháng nguyên thân (O) cho thấy chủng gây bệnh cho gia cầm thuộc các serotype A9, A3, A7, A8 và D2
Các protein màng ngồi: Pasteur và cộng sự, 1880 đã triết tách thành cơng 5 loại
protein màng ngồi của vi khuẩn P.multocida thuộc serotype A3 phân lập từ thỏ và cho rằng nếu thỏ ñược tiêm kháng nguyên này sẽ tạo ñược miễn dịch chống bệnh khi công
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……………………… 19 thử thách với chủng vi khuẩn cùng typẹ (theo Phan Thanh Phượng, 1993)
Trong công tác nghiên cứu, chế tạo văc xin, ngoài việc nghiên cứu về cấu trúc và bản
chất của từng loại kháng nguyên các nhà khoa học còn quan tâm nghiên cứu cơ chế đáp
ứng miễn dịch, và sự hình thành đáp ứng miễn dịch ñối với những loại kháng nguyên ñó.
Từ ñó xác định ñược ñường ñưa văc xin vào cơ thể cho phù hợp. ðối với bệnh tụ huyết trùng gia cầm chúng tơi quan tâm đến đáp ứng miễn dịch dịch thể và ñáp ứng miến dịch qua trung gian tế bàọ