ðể chế tạo ñược văc xin có hiệu lực phòng bệnh cao thì việc nghiên cứu ñể hiểu rõ về kháng nguyên, sự phân bố và vai trò của chúng ñối với khả năng kích thích sinh ñáp
ứng miễn dịch là vô cùng quan trọng
Ngày nay, vai trò của kháng nguyên P.mutocida trong ñáp ứng miễn dịch ñã dần
ñược làm sáng tỏ. ðối với P.multocida gây bệnh cho gia cầm và vai trò của các loại kháng nguyên ñược nghiên cứu khá sâu, song vẫn còn nhiều ý kiến khác nhau của các tác
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 17 giảñối với vai trò của từng loại kháng nguyên khác nhaụ Bằng công nghệ sinh học phân tử, ngày ngay vai trò của từng loại kháng nguyên ñối với khả năng kích thích sinh ñáp
ứng miến dịch của cơ thểñang dần ñược xác ñịnh.
Polysaccharide tinh khiết
Theo Confer, 1993 bản chất capsule của P.multocida là polysaccharide và nó giữ vai trò kích thích sinh ñáp ứng miễn dịch
Theo Avakian và cộng sự, 1989 cho rằng kháng nguyên capsule tinh khiết type A kích thích tạo kháng thểở gia cầm chống lại bệnh sau khi thử thách với kháng nguyên
ñồng typẹ
Mosier, 1992 cho rằng, sở dĩ có nhiều ý kiến khác nhau về mức ñộ bảo hộ mà kháng nguyên capsule tinh khiết mang lại là do mức ñộ tinh khiết trong quá trình chiết tách kháng nguyên. Kháng nguyên capsule có ñộ tinh khiết cao khó tạo ñáp ứng miễn dịch hơn capsule không tinh khiết do ở capsule không tinh khiết còn chứa nhiều loại protein và các chất có vai trò kích thích tạo kháng thể.
Gần ñây, bằng kỹ thuật tinh chế protein có ñộ tinh khiết cao cho phép nhiều tác giả
nghiên cứu vai trò của protein tinh khiết trong ñáp ứng miễn dịch ñối với kháng nguyên của P.multocida trong cơ thể gia súc, gia cầm.
Truscott và Hirsh, 1990 ñã tinh chế protein màng ngoài 50Kda từ P.multocida phân lập ở chim và nhận thấy protein này ức chế khả năng tạo ñáp ứng miễn dịch thực bào ở
chim. Protein 34 Kda cho phản ứng dương tính với huyết thanh của gà kháng
P.multocida cùng serotypẹ Sự khác nhau giữa các protein màng ngoài của các chủng trong cùng serotype P.multocida phân lập ñược từ gia cầm là ở vị trí gắn của một protein
ở vùng 34 và 38 Kdạ
Ramdani và Adler, 1992 bằng kỹ thuật kháng thểñơn dòng và enzyme thực hiện với các kháng nguyên protein tinh chếñã ñi ñến kết luận, kháng nguyên protein tinh chế chỉ ñóng một vai trò rất nhỏ trong ñáp ứng miến dịch chống Pasteurella mutocida.
Lipopolysacharide (LPS)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 18 dịch phụ thuộc vào bản chất của loại LPS và loài ñộng vật ñược tiêm. Rimler và Rhoades, 1989 cho rằng LPS tinh khiết của P.multocida là chất gây miễn dịch chính ở gia cầm. Tsuji và Matsumoto, 1988 nghiên cứu trên gà tây nhận thấy chất gây miễn dịch chính là phức hợp protein – lipopolisacharidẹ
Mendes và cộng sự, 1994 ñã gây bệnh thực nghiệm bằng cách tiêm LPS có ñộ tinh khiết cao trên gia cầm bằng ñường tiêm dưới da và tĩnh mạch. Tác giả nhận thấy, LPS không gây tổn thương ñại thể nhưng gây tổn thương vi thểở dạ Tác giả cũng cho rằng LPS tinh khiết ñóng vai trò ñầu tiên trong ñáp ứng viêm ở bệnh tụ huyết trùng gia cầm.
Protein ñộc tố
Kết quả nghiên cứu của Rimler và Brogden, 1986, Rimler và Rhoades, 1989 cho thấy, một số chủng P.multocida serotype A, D có protein ñộc tố (khoảng 145Kda) gây
ñộc cho tế bào phổi bê và gây xuất huyết, hoại tử khi tiêm vào da chuột lang, gây chết ñối với gia cầm và các loài gặm nhấm. Thurston và cộng sự cho rằng protein ñộc tố là một kháng nguyên, tác giả ñã thử nghiệm vô hoạt protein ñộc tố (giải ñộc tố) rồi tiêm cho chuột, chuột ñược miễn dịch khi thử thách với Pasteurela multocidạ
Cho tới nay nhiều nhà khoa học ñã xác ñịnh kháng nguyên của vi khuẩn P.multocida gồm 3 loại:
Kháng nguyên vỏ K (Capsule), bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu gián tiếp Carter
ñã phân loại P.multocida gồm 4 serotype A, B, D, Ẹ Trong ñó, serotype gây bệnh cho gia cầm là serotype A, D.
Kháng nguyên thân O: Khi kháng nguyên vỏ (K) ñược tách ra, vi khuẩn bộc lộ một lớp kháng nguyên thân, ñược phát hiện nhờ phản ứng ngưng kết hồng cầu và phản ứng kết tủa khuyếch tán trong thạch. Heđleston, 1972 chia P.multocida thành 16 typẹ Trong
ñó chủng gây bệnh cho gia cầm thuộc các type 3,5,7,8 và 9.
Sự kết hợp phân loại theo kháng nguyên vỏ (K) và kháng nguyên thân (O) cho thấy chủng gây bệnh cho gia cầm thuộc các serotype A9, A3, A7, A8 và D2
Các protein màng ngoài: Pasteur và cộng sự, 1880 ñã triết tách thành công 5 loại protein màng ngoài của vi khuẩn P.multocida thuộc serotype A3 phân lập từ thỏ và cho rằng nếu thỏñược tiêm kháng nguyên này sẽ tạo ñược miễn dịch chống bệnh khi công
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 19 thử thách với chủng vi khuẩn cùng typẹ (theo Phan Thanh Phượng, 1993)
Trong công tác nghiên cứu, chế tạo văc xin, ngoài việc nghiên cứu về cấu trúc và bản chất của từng loại kháng nguyên các nhà khoa học còn quan tâm nghiên cứu cơ chếñáp
ứng miễn dịch, và sự hình thành ñáp ứng miễn dịch ñối với những loại kháng nguyên ñó. Từñó xác ñịnh ñược ñường ñưa văc xin vào cơ thể cho phù hợp. ðối với bệnh tụ huyết trùng gia cầm chúng tôi quan tâm ñến ñáp ứng miễn dịch dịch thể và ñáp ứng miến dịch qua trung gian tế bàọ