Chuẩn bị một dãy gồm 9 ống Eppendorf loại 1,5ml, đầu typ loại 1000µl và 100 µl hấp, sấy vơ trùng. Pipet tự động 1000 µl và 100 µl.
Tiến hành: Cho vào 9 ống Eppendorf mỗi ống 900 µl nước sinh lý vơ trùng, đánh số thứ tự từ 1-9. Trộn ñều mẫu canh khuẩn cần xác ñịnh ñậm độ, dùng pipet hút 100µl canh khuẩn cho vào ống thứ nhất rồi trộn ñều bằng máy Vortex, thay ñầu typ rồi hút 100 µl từ
Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ……………………… 30
đến ống thứ 9. Như vậy ta ñược độ pha lỗng canh khuẩn lần lượt là 10-1 ñến 10-9, tương
ứng với các ống từ 1 đến 9 theo hệ số pha lỗng 10 lần.
Hình 2.01. Sơ đồ pha lỗng canh khuẩn
Chuẩn bị 9 ñĩa thạch máu ñánh số theo độ pha lỗng ở các nồng ñộ 107, 108, 109 mỗi nồng ñộ 3 ñĩạ Dùng pipet hút 100µl canh khuẩn ở từng nồng ñộ pha loãng tương ứng
nhỏ lên mỗi ñĩa, láng ñều lên mặt thạch. ðể tủ ấm 370C/18-20h. ðếm số lượng khuẩn lạc trên từng ñĩa ở các ñộ pha lỗng khác nhau và xác định số lượng vi khuẩn có trong 1ml canh khuẩn ban đầu theo cơng thức:
X = a x N x 10
Trong đó: X là số lượng vi khuẩn có trong 1ml canh khuẩn ban đầu
a là số khuẩn lạc trung bình đếm ñược trong 100 µl canh khuẩn ở mỗi nồng ñộ pha lỗng tương ứng.
N là nồng độ pha lỗng canh khuẩn
(Lấy kết quả trung bình xác định tại 3 nồng độ pha lỗng làm kết quả cuối cùng)