Bài 11 : LẬU CẦU
4.1. Xét nghiệm trực tiếp:
4.1.1. Nhuộm Gram:
Nhìn chung, các phương pháp thơng thường, xét nghiệm trực tiếp bệnh phẩm từ họng mũi thường ít giá trị trong việc xác định căn nguyên gây bệnh; vì lẫn nhiều loại vi khuẩn và nếu xác định được vi khuẩn, cũng có thể đó chỉ là các vi khuẩn chí. Chỉ tiêu bản của các bệnh phẩm là máu, dịch não tủy hay các dịch cơ thể mới có giá trị trong chẩn đốn căn nguyên phế cầu.
Nhuộm Gram tiêu bản đờm cũng có giá trị xác định căn nguyên phế cầu khi số lượng bạch cầu đa nhân tăng lên. Phế cầu thường xếp thành từng đơi hình mắt kính hay ngọn nến; cũng có thể đứng đơn lẻ, tạo chuỗi ngắn, bắt màu Gram (+).
82
Tính bắt màu Gram (+) có thể bị mất do bệnh phẩm để quá lâu, môi trường không đủ chất dinh dưỡng hay bệnh nhân đã dùng nhiều kháng sinh.
4.1.2. Thử nghiệm Quellung:
Phản ứng Quellung dương tính xảy ra khi kháng thể đặc hiệu loài (type- specific antiserum) gắn với thành phần polysaccharide của vỏ phế cầu; gây nên sự thay đổi chỉ số khúc xạ của vỏ, khi ánh sáng chiếu vào mà ta nhìn thấy dễ dàng dưới dạng “phình vỏ”. Hình ảnh quan sát thấy là: tế bào vi khuẩn bắt màu xanh đen, xung quanh tế bào có một quầng với đường viền sắc nét, đó là gờ ngồi của vỏ, do ánh sáng xuyên qua vỏ sáng hơn vùng tế bào phế cầu. Các tế bào đứng đơn, xếp đơi, xếp thành chuỗi ngắn hay đám đều có thể có phản ứng Quellung. Bằng thử nghiệm này, phế cầu khuẩn có thể được xác định trực tiếp từ các dịch cơ thể: dịch não tuỷ, dịch phúc mạc, dịch hút nội khí quản hoặc đờm hoặc từ 1 khuẩn lạc đơn.
Kỹ thuật được thực hiện bằng cách: đặt một giọt nhỏ hay 1 ăng dịch cơ thể, canh thang nuôi cấy hay huyền dịch vi khuẩn (khuẩn lạc của nuôi cấy 18 - 24 giờ ở 35 - 370C/ 5% CO2, pha trong nước muối sinh lý tạo độ đục tương đương 0,5 Mc Farland) lên phiến kính sạch. Nhỏ tiếp 1 giọt hay 1 ăng đầy kháng huyết thanh, trộn kỹ. Nhỏ tiếp 1 ăng đầy dung dịch xanh methylene bão hoà, trộn kỹ. Phủ lamen lên hỗn hợp trên, sau 10 phút, quan sát hiện tượng phình vỏ của phế cầu bởi tác động của kháng huyết thanh đặc hiệu bằng kính hiển vi với vật kính dầu.
Chú ý: phản ứng chỉ xảy ra khi có sự tương quan về lượng giữa kháng nguyên (vi khuẩn) và kháng thể (kháng huyết thanh); do đó, để tránh âm tính giả do dư thừa kháng nguyên, nên chuẩn bị các phiến kính sao cho mỗi một vi trường chỉ chứa từ 50 - 100 tế bào; lượng tế bào tối ưu nhất để quan sát là 25 - 50 tế bào vi khuẩn trong một vi trường.
Trong thử nghiệm Quellung, phế cầu khuẩn được xác định với một bộ kháng huyết thanh. Kháng huyết thanh có thể là một tập hợp của 90 loại kháng thể đặc hiệu tương ứng với 90 loại phế cầu khuẩn khác nhau (omniserum) còn gọi là kháng huyết thanh đa giá; hoặc tập hợp của một số kháng thể đặc hiệu lồi hay nhóm và trong mỗi tập hợp có 4 - 7 loại kháng huyết thanh đơn giá (58 loại trong tổng số 90 thuộc về 20 nhóm kháng huyết thanh mà mỗi nhóm bao gồm từ 2 - 4 loại). Hiện nay người ta đã biết rõ 46 loại hay nhóm phế cầu khuẩn khác nhau và hơn 90% các
83
chủng phế cầu phân lập được từ máu hay dịch não tuỷ đều thuộc về 1 trong 23 loại hay nhóm phế cầu khác nhau mà đã được chọn để sản xuất vắc xin phòng bệnh do phế cầu.
Do vậy, tại một số phịng thí nghiệm người ta thường dùng 12 nhóm kháng huyết thanh (12 pooled sera) để xác định loại hay nhóm các chủng phế cầu phân lập được từ máu và dịch não tuỷ. Khi xác định týp huyết thanh hay thực hiện thử nghiệm Quellung nên tuân theo hướng dẫn của hãng sản xuất và theo mục đích dịch tễ học để chọn kháng huyết thanh. Có thể có mặt các kháng thể gây phản ứng chéo trong omniserum nên phải có sự kiểm tra hình thái học của khuẩn lạc và vi khuẩn cũng như tính bắt màu Gram của các chủng được thử nghiệm.