4. 3.1.1 Mơ hình thí nghiệm và tiến hành
4.3.4. Tác dụng chống dị ứng
Nguyên tắc: theo cơ chế dị ứng týp 1
Khi kháng nguyên xâm nhập lần 1 vào cơ thể, cơ thể trở thành mẫn cảm. Kháng ngun xâm nhập lần 2, sẽ kích thích giải phóng chất trung gian hoá học của tế bào Mast, gây dãn mạch, thoát huyết t−ơng, tăng tính thấm thành mạch. Sau khi tiêm tĩnh mạch dung dịch xanh evan, chúng tôi căn cứ vào l−ợng xanh evan thốt mạch giữa lơ chứng và lơ thử để đánh giá tác dụng chống dị ứng của mẫu thử. Mẫu thử có tác dụng chống dị ứng thì l−ợng xanh evan thốt mạch phải ít hơn lơ chứng. Vì vậy, có thể đánh giá c−ờng độ phản ứng dựa vào việc chiết và định l−ợng xanh evan thoát mạch.
Tiến hành:
Gây cảm ứng: tiêm màng bụng 0,2ml dung dịch lòng trắng trứng gà t−ơi (1:2) 3 lần vào ngày thứ 1, 3 và 5. Sau đó ni 3 tuần.(khoảng thời gian này phù hợp cho tạo cảm ứng tốt nhất).
Dùng thuốc: sau 3 tuần gây cảm ứng, chia chuột ngẫu nhiên thành 3 lô, mỗi lô 8 con.
− Lô chứng: uống n−ớc muối sinh lý; 0,5ml/20 g chuột. − Lô thử: uống dịch sắc (1:1); 0,5ml/20 g chuột
− Lô đối chứng: uống dung dịch loratadin 0,05%; 0,5ml/20 g chuột. Cho chuột uống thuốc thử tr−ớc 3 ngày. Ngày cuối cùng, sau khi cho chuột uống 60 phút, gây phản ứng quá mẫn.
Gây phản ứng quá mẫn: tiêm tĩnh mạch đuôi dung dịch xanh evan 1% 0,1ml/10g. Sau đó, tiêm dung dịch lịng trắng trứng (1:2) vào trong da vùng l−ng đã nhổ sạch lông 4 mũi, mỗi mũi 0,02ml. 30 phút sau giết chuột, cắt vùng da l−ng ngâm vào ống nghiệm có chứa 5ml hỗn hợp gồm: aceton-
natrisulfat 0,5% tỉ lệ 7:3. Các ống nghiệm đ−ợc nút chặt và để ở nhiệt độ phòng, thỉnh thoảng lắc. Sau 24 giờ, lọc lấy dịch lọc, bổ sung dung môi cho đủ 5ml đem đo quang ở b−ớc sóng 620nm. Đối chứng là hỗn hợp dung môi trên. Lập đ−ờng chuẩn liên quan giữa nồng độ và mật độ quang để tính l−ợng xanh evan thốt mạch. Kết quả đ−ợc trình bày trong bảng 4.34.
Bảng 4.34: ảnh h−ởng của dịch sắc ph−ơng NTTGGLH tới sự thoát mạch của xanh evan.
L−ợng xanh evan chiết đ−ợc (mg/100ml)
STT Lô
chứng Lô đối chứng Lô thử
1 1,096 0,610 0,321 2 1,186 0,712 0,343 2 1,186 0,712 0,343 3 0,985 0,483 0,553 4 1,179 0,485 0,333 5 1,094 0,653 0,360 6 1,232 0,605 0,475 7 1,441 0,555 0,437 8 1,448 0,570 0,438 D S X ± 1,208 ± 0,164 0,584 ± 0,079 0,408 ± 0,082 < 0,01* < 0,01* P < 0,01**
(*) P so với lô chứng, (**) P so với lô đối chứng
Nhận xét: từ kết quả thu đ−ợc, chúng tơi nhận thấy l−ợng xanh evan thốt mạch ở lô thử và lô chuẩn đều giảm nhiều so với lô chứng (P<0,01). Tác dụng chống dị ứng của dịch sắc NTTGGLH (1:1) 0,5ml/20g chuột còn mạnh hơn loratadin 0,05%; 0,5 ml/20 g chuột .