4. 2.1.1 Định tính trong ống nghiệm
4.2.1.2. Nghiên cứu alcaloid của lá hen Chiết xuất alcaloid toàn phần:
Chiết xuất alcaloid toàn phần:
Cân khoảng 10g bột thô lá hen, loại chất béo bằng ether dầu hoả trong 8 giờ. Loại bỏ ether dầu hoả, thấm ẩm d−ợc liệu bằng NH4OH 5%, để qua đêm. Tiến hành chiết bằng cloroform trong bộ Soxhlet trên nồi cách thuỷ đến khi kiệt alcaloid (thử bằng thuốc thử Mayer và Dragendorff).
Thu lấy dịch chiết alcaloid, cô đặc, chiết 5 lần bằng H2SO4 2%, mỗi lần 20ml. Dịch acid thu đ−ợc đem kiềm hoá bằng NH4OH đặc đến pH = 10, chiết bằng cloroform. Thu hồi cloroform. Cắn thu đ−ợc đem hoà tan trong cồn tuyệt đối. Quá trình chiết xuất đ−ợc thể hiện ở hình 4.4.
NH4OH đặc đến pH 10 Cloroform Cồn tuyệt đối Alcaloid toàn phần trong cồn Cắn alcaloid Dịch chiết cloroform Dịch chiết base Dịch chiết acid
Ether dầu hoả
Cloroform (chiết nóng)
dd H2SO4 2% (lắc) Dịch chiết cloroform
D−ợc liệu đã loại chất béo thấm ẩm NH4OH 5%
Lá hen
Thu hồi cloroform
Hình 4.4: Sơ đồ chiết xuất alcaloid của lá hen
Định tính alcaloid bằng SKLM:
Dùng bản mỏng Silicagel tráng sẵn của hãng Merck, dùng dịch chiết cồn alcaloid toàn phần để chấm sắc ký. Sử dụng các hệ dung môi sau để khai triển SKLM:
Hệ I: cloroform: methanol (9:1)
Hệ II: cloroform: methanol: amoniac đặc (50:9:1) Hệ III: cloroform: methanol (1:1)
Hiện màu bằng thuốc thử Dragendorff.
Kết quả cho thấy, hệ dung môi II có khả năng tách tốt nhất với 4 vết alcaloid có hệ số Rf và màu sắc ở bảng 4.2; hình 4.5.
Hình 4.5: Sắc ký đồ alcaloid toàn phần Bảng 4.2: Hệ số Rf * (Rfì100) và màu sắc các vết trên SKLM alcaloid toàn phần lá hen A4 A3 A2 A1 Vết Rf * Màu sắc A1 38 Đỏ cam nhạt A2 53 Đỏ cam A3 67 Đỏ cam đậm A4 99 Đỏ cam đậm
Định l−ợng alcaloid toàn phần bằng ph−ơng pháp cân:
Cân chính xác khoảng 10g bột lá hen, tiến hành chiết alcaloid toàn phần theo sơ đồ 1. Dịch chiết thu đ−ợc đem sấy khô tới khối l−ợng không đổi, cân. Hàm l−ợng alcaloid toàn phần đ−ợc tính theo công thức:
a X(%) = ì 100 b(1 − c)
Trong đó: a - khối l−ợng alcaloid toàn phần b - khối l−ợng lá hen đem chiết c - l−ợng ẩm của lá hen
Kết quả định l−ợng sau 3 lần cho thấy, hàm l−ợng alcaloid toàn phần trung bình của lá hen là 0,11%.