4. 2.1.1 Định tính trong ống nghiệm
4.2.1.3. Nghiên cứu glycosid tim của lá hen
Chiết xuất glycosid tim:
Cân khoảng 10 g bột thô lá hen, loại chất béo bằng ether dầu hoả. Chiết xuất bằng cồn 70o trong bộ Soxhlet. Thu lấy dịch chiết cồn, cơ đặc, hồ tan trong 100 ml n−ớc cất. Loại tạp bằng 30 ml dd chì acetat 30%. Loại chì thừa bằng dd Na2SO4 10%. Để lắng, lọc 2 lần. Cô dịch lọc, lắc với cloroform. Lấy lớp dịch cloroform. Thu hồi cloroform. Hoà tan cắn trong cồn tuyệt đối thu đ−ợc glycosid tim trong cồn.
Qúa trình chiết xuất đ−ợc mơ tả trong sơ đồ hình 4.6.
Bã d−ợc liệu đã loại chất béo
Dịch chiết cồn
Dịch chiết cồn đậm đặc
Ether dầu hoả
Cồn 70o (chiết nóng) Thu hồi cồn N−ớc cất Chì acetat 30%, Na2SO4 10% (loại tạp), lọc Cloroform Cắn glycosid tim Cắn glycosid tim Thu hồi cloroform
Cồn tuyệt đối gLycosid tim trong cồn Dịch chiết cloroform Dịch lọc Dịch chiết n−ớc Lá hen
Hình 4.6: Sơ đồ chiết xuất glycosid tim của lá hen
Định tính glycosid tim bằng SKLM:
Dùng bản mỏng silicagel tráng sẵn của hãng Merck, dịch chấm sắc ký là dd cồn của glycosid tim, triển khai SKLM bằng các hệ dung môi sau:
Hệ I: ethylacetat: cyclohexan (4:1) Hệ II: ethylacetat: aceton (9:1)
Kết quả cho thấy hệ II có khả năng tách tốt hơn, sắc ký đồ glycosid tim cho 4 vết có hệ số Rf và màu sắc ở bảng 3.
Hình 4.7: Sắc ký đồ glycosid tim
Bảng 4.3: Hệ số Rf *(Rfì100) và màu sắc các vết glycosid tim
G4 G3 G3 G2 G1 Vết Rf * Màu sắc G1 26 Đỏ tím nhạt G2 48 Đỏ tím đậm G3 62 Đỏ tím đậm G4 80 Đỏ tím đậm Chú thích: 1- Lá hen ; 2- NTTGGLH ; 3- Cóc mẳn
Định l−ợng glycosid tim bằng ph−ơng pháp cân:
Cân chính xác khoảng 10g bột thơ lá hen, tiến hành chiết xuất theo sơ đồ trên, cắn thu đ−ợc đem sấy khô đến khối l−ợng khơng đổi. Kết quả trung bình của 3 lần định l−ợng cho thấy hàm l−ợng glycosid tim trong lá hen là 0,05%.