4. 2.1.1 Định tính trong ống nghiệm
4.2.2.1. Với thành phần glycosid tim Định tính ống nghiệm:
Định tính ống nghiệm:
− Các vị thuốc cân theo khối l−ợng công thức của NTTGGCA, NTTGGLH. Thêm n−ớc đến ngập, sắc trong 3 lần, mỗi lần 1 giờ gạn một n−ớc, lọc nóng qua bông.
Tập trung dịch lọc, để nguội, thêm chì acetat 30%. Khuấy đều, để lắng, lọc bỏ tủa. Loại chì thừa bằng Na2SO4 15%. Lọc bỏ tủa. Dịch lọc đ−ợc cô cách thuỷ còn 45-50ml. Để nguội, chuyển vào bình gạn, lắc với ether ethylic. Gạn bỏ lớp ether ethylic. Lớp n−ớc lắc với cloroform 5 lần, mỗi lần 5 ml. Tập trung dịch chiết cloroform. Bốc hơi cloroform thu đ−ợc cắn glycosid tim. Cắn glycosid tim đem hoà tan trong cồn tuyệt đối để làm các phản ứng định tính. Quá trình chiết xuất đ−ợc mô tả trong hình 4.8.
Song song tiến hành chiết xuất glycosid tim trong các vị thuốc cóc mẳn, lá hen. Tiến hành thử các phản ứng định tính sau: - Các phản ứng trong ống nghiệm + Phản ứng Lieberman + Phản ứng Baljet -57-
Dịch sắc Dịch lọc Dịch lọc N−ớc, sắc, gạn, lọc Chì acetat 30%, lọc dd Na2SO4 15%, lọc
Cô cách thuỷ, để nguội
Ether dầu hoả
Cloroform (5 ml x 5 lần)
Bốc hơi dung môi Cắn glycosid tim Cồn tuyệt đối Glycosid toàn phần trong cồn Lớp cloroform Lớp n−ớc Dịch chiết đậm đặc Nguyên liệu
Hình 4.8: Sơ đồ chiết xuất glycosid tim
+ Phản ứng Legal
+ Phản ứng Keller - Kiliani
Kết quả định tính đ−ợc thể hiện trong bảng 4.
Bảng 4.4: Kết quả định tính glycosid.
Phản ứng Mẫu thử
Lieberman Baljet Legal Keller-
Kiliani
NTTGGCA + + + +
NTTGGLH +++ +++ +++ +++
Lá hen ++ ++ ++ ++
Cóc mẳn + + + +
Nh− vậy trong các mẫu thử đều có glycosid tim.
Định tính bằng SKLM:
Dùng bản mỏng silicagel tráng sẵn của hãng Merck, hoạt hoá ở 110oC, dùng dung dịch trong cồn của glycosid tim để chấm sắc ký, hiện mầu bằng dung dịch Natrinitroprussiat 1% trong dung dịch NaOH 1N trong cồn 50o. Triển khai bằng các hệ dung môi sau:
Hệ I: ethylacetat: methanol: n−ớc (8:0,5:0,5) Hệ II: cloroform : butanol (9:1)
Hệ III: ethylacetat: cloroform (9:1)
Kết quả cho thấy hệ dung môi I có khả năng tách tốt nhất và cho 4 vết glycosid tim trong ph−ơng thuốc NTTGGLH t−ơng ứng với 4 vết của lá hen và 1 vết của NTTGGCA t−ơng ứng với 1 vết của cóc mẳn. Màu sắc và hệ số Rf của các vết đ−ợc thể hiện trong bảng 4.5.
Bảng 4.5: Kết quả định tính glycosid tim bằng SKLM
NTTGGLH Lá hen Cóc mẳn NTTGGCA Vết
Rf Màu sắc Rf Màu sắc Rf Màu sắc Rf Màu sắc
1 0,44 Hồng nhạt 0,44 Hồng nhạt
2 0,57 Hồng đậm 0,57 Hồng đậm
3 0,71 Hồng đậm 0,71 Hồng đậm
4 0,88 Hồng đậm 0,88 Hồng đậm 0,88 Hồng đậm 0,88 Hồng đậm
Định l−ợng glycosid tim bằng ph−ơng pháp cân trong NTTGG:
Ph−ơng thuốc NTTGGLH và NTTGGCA đ−ợc tán thành bột, xác định độ ẩm, rồi tiến hành chiết xuất glycosid tim theo sơ đồ 3. Cắn thu đ−ợc đem sấy khô đến khối l−ợng không đổi, đem cân. Lặp lại thí nghiệm 3 lần. Hàm l−ợng glycosid tim trong các ph−ơng thuốc đ−ợc trình bày trong bảng 4.6.
Bảng 4.6: Hàm l−ợng glycosid tim trung bình của các ph−ơng thuốc
STT Ph−ơng thuốc Hàm l−ợng glycosid tim trung bình (%)
1 NTTGGLH 0,014
2 NTTGGCA 0,004