4.1. KẾT LUẬN
Mục tiêu của báo cáo đồ án tốt nghiệp này là “Nghiên cứu q trình trích ly tinh dầu Húng quế (Ocimum basilicum L.), phân tích thành phần hóa học, khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật và ứng dụng trong mỹ phẩm.” là nhằm để tìm ra các điều kiện trích ly tinh dầu Húng quế tối ưu nhất, thử nghiệm khả năng kháng vi sinh vật và ứng dụng bổ sung tinh dầu Húng quế vào gel trị mụn. Sau quá trình thực hiện các thí nghiệm trên thu được những kết quả như sau:
Điều kiện tối ưu nhất để thu nhận lượng tinh dầu Húng quế tốt nhất cả về hàm lượng cũng như chất lượng bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước với nguyên liệu cây Húng quế héo, tỷ lệ nguyên liệu/thể tích nước chưng cất là 1/3, thời gian ngâm là 30 phút với nồng độ NaCl được bổ sung trong quá trình ngâm là 10% và thời gian chưng cất là 120 phút.
Đánh giá cảm quan cho thấy được tinh dầu Húng quế thu được có màu vàng nhạt trong suốt, mùi thơm dịu nhẹ đặc trưng của Húng quế, có vị đắng và hơi the. Bên cạnh đó, xác định các chỉ số hóa lý, thành phần hóa học của tinh dầu Húng quế được thu ở huyện Củ Chi (Tp. Hồ Chí Minh) bằng phương pháp GC/MS.
− Thành phần hóa học tinh dầu Húng quế gồm có 13 hợp chất hóa học với các
thành phần chính như estragole (83,836%), linalool (3,060%), β-ocineme (3,025%), ngồi ra cịn có một số hợp chất khác như eucalyptol, methyleugenol, humulene, germacrene D, γ-cadinene, α-epi-cadinol, trans- α-bergamotene, bicyclogermacrene, β-fenchol và β-elemene.
− Hàm lượng tinh dầu Húng quế là 0,55%.
− Tỷ trọng tinh dầu Húng quế là 0,527.
− Chỉ số acid ( IA) là 5,423.
− Chỉ số ester ( IE) là 14,399.
− Chỉ số savon (IS) là 19,822.
− Chỉ số ethenol : Tỷ lệ tinh dầu/cồn 70o = 1:9,33 Tỷ lệ tinh dầu/cồn 80o = 1:5,87 Tỷ lệ tinh dầu/cồn 90o = 1:1,53 Tỷ lệ tinh dầu/cịn 96o = 1:0,80
99
Hoạt tính kháng vi sinh vật của tinh dầu Húng quế thu được kết quả khá tốt từ tinh dầu nguyên chất cho tới các nồng độ pha loãng lần lượt là 10-1, 10-2, 10-3 cũng cho thấy khả năng kháng vi sinh vật ở tinh dầu này khá khả quan và phần nào có thể thay thế được các hóa chất thương mại trên thị trường hiện nay.
Ứng dụng tinh dầu Húng quế vào trong gel trị mụn cho thấy kết quả mang lại khá hiệu quả, trong tinh dầu Húng quế có chứa các hợp chất estragole, linalool, β- ocimene, eucalyptol, methyleugenol, humulene và germacrene D có tác dụng kháng khuẩn cũng như kháng nấm, ngồi ra cịn ức chế sự sinh trưởng và phát triển của các vi sinh vật.
4.2. KIẾN NGHỊ
Vì điều kiện thời gian, chi phí khơng cho phép nên đề tài mới chỉ xây dưng được quy trình trích ly tinh dầu Húng quế với điều kiện thích hợp và thử hoạt tính kháng khuẩn. Vì vậy, cần tiếp tục nghiên cứu thêm:
– Các loại Húng quế phân bố trên lãnh thổ Việt Nam, phương pháp trồng và
chăm sóc, thời điểm thu hái, điều kiện thổ nhưỡng, bảo quản sẽ làm ảnh hưởng đến hiệu suất và thành phần hóa học của tinh dầu.
– Xác định tính chất vật lý khác như: chỉ số chiết quang, chỉ số khúc xạ, nhiêt độ kết tinh tinh dầu,...
– Xác định các chỉ số hóa học như: chỉ số iod,...
– Tìm hiểu sâu hơn về quá trình làm sạch và tinh chế tinh dầu.
– Nghiên cứu chuyên sâu về thử nghiệm hoạt tính kháng oxy hóa và kháng
viêm của tinh dầu Húng quế.
Để từ đó tìm ra phương pháp trích ly thu nhận tinh dầu hiệu quả nhất mà vẫn giữ được mùi thơm tự nhiên của tinh dầu Húng quế. Bên cạnh đó, cũng cho thấy tầm quan trọng của tinh dầu Húng quế trong thực tế.
100
TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Tài liệu tiếng Việt
[1]. Tôn Long Dày (2013). Ly trích và khảo sát thành phần hóa học của tinh dầu
Bạc Hà. Đại học Cần Thơ. Luận văn tốt nghiệp.
[2]. Nguyễn Thị Hồng (2011). Nghiên cứu xác định thành phần một số hợp chất
hoá học trong tinh dầu từ cây ngãi cứu ở Quảng Nam, Đại học Đà Nẵng.
[3]. Nguyễn Thị Mai Hương, Hồ Tuấn Anh (2017), Nghiên cứu hoạt tính kháng
khuẩn của một số loại tinh dầu. Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp
Việt Nam – Số 7(80)/2017
[4]. Nguyễn Thị Hồng Liên (2014). Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu
lá lốt được ly trích từ phương pháp lơi cuốn hơi nước và phương pháp vi sóng, Trường Đại học Cần Thơ.
[5]. Phùng Thị Ái Hữu (2012). Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hoá
học tinh dầu cây sả chanh Cẩm Lệ, Trường Đại học sư phạm – Đà Nẵng.
[6]. Bùi Thị Hồng Loan (2017). Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của dịch chiết
cao Củ cải trắng (Raphanus sativus L.). Đại học Bà Rịa – Vũng Tàu.
[7]. Đỗ Tất Lợi, 1985. Tinh dầu Việt Nam. NXB Y học, Hà Nội.
[8]. Lã Đình Mỡi (2001). Tài nguyên thực vật có tinh dầu ở Việt Nam, NXB Nơng Nghiệp.
[9]. Lê Lương Phương Nghi (2018). Nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn của tinh
dầu Húng quế Ocimum basillicum trên một số lồi vi khuẩn gây bệnh đường hơ hấp, Đại học Nguyễn Tất Thành.
[10]. Lê Ngọc Thạch (2003). Tinh dầu. Nxb. Đại học Quốc Gia Tp. Hồ Chí Minh. [11]. Nguyễn Tấn Thịnh (2013). Tìm hiểu thành phần hợp chất thứ cấp trong cây
lược vàng callisia fragrans (lindl) Wood, Khóa luận tốt nghiệp, Đại học cơng
nghệ kỹ thuật, Tp. HCM.
[12]. Ngô Văn Thu, 2011. Bài giảng dược liệu – tập 1. Nhà xuất bản Trung tâm thông tin thư viện - Trường đại học Dược Hà Nội.
[13]. Mai Thị Anh Tú (2009). Khảo sát tinh dầu tần dầy lá, Đại học Cần Thơ. [14]. Nguyễn Năng Vinh, 1977. Kỹ thuật khai thác và sơ chế tinh dầu. NXB Nông
101
[15]. Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hồng Minh Tâm, 1999. Sinh lí học thực vật. NXB Giáo dục, Hà Nội.
[16]. Dược điển Việt Nam IV (2004), nhà xuất bản Y học.
[17]. Tiêu chuẩn Việt Nam 189:1993. Tinh dầu và phương pháp thử. Năm ban
hành 1993-09-07, 430/QĐ-TĐC.
2. Tài liệu tiếng Anh
[18] Claudia Turek, Florian C. Stintzing, 2013. Stability of Essential Oils: A Review. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 12, 40. [19]. Mohammed Chenni, Douniazad EI Abed, Njara Rakotomanomana, Xavier
Fernandez, Farid Chemat, 2016. Comparative Study of Essential Oils Extracted from Egyptian Basil Leaves (Ocimum basilicum L.) Using HydroDistillation and Solvent-Free Microwave Extraction. Molecules, 21, 113-128.
[20]. Neveen Helmy Abou EI-Soud, Mohamed Deabes, Lamia Abou EI-Kassem, Mona Khalil, 2015. Chemical Composition and Antifungal Activity of
Ocimum basilicum L.. Open Access Macedonian of Medical Sciences, 3(3),
374-379.
[21]. Opalchenova G., Obreshkova D., 2003. Comparative studies on the activity of basilan essential oil from Ocimum basilicum L. against multidrug resistant clinical isolates of the genera Staphylococcus Enterococcus and Pseudomonas by using different test methods. J. Microbiol Methods, 54(1), 105-110. [22]. S. K. Marwat, M. S. Khan, S. Ghulam, N. Anwar, G. Mustafa, K. Usman,
2011. Phytochemical constituents and pharmacological activities of sweet Basil Ocimum basilicum L. (Lamiaceae). Asian Journal of Chemistry, 23 (9), 3773-3782.
3. Tài liệu Iternet
[23]. http://uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/271 [24]. https://vi.wikipedia.org/wiki/Escherichia_coli
[25]. https://vi.wikipedia.org/wiki/Staphylococcus_aureus [26]. https://en.wikipedia.org/wiki/Aspergillus_flavus
102
PHỤ LỤC
Phụ lục 1: Thành phần các chất môi trường và cách pha một số dung dịch thử Dung dịch chuẩn độ KOH 0,1N
Cân khoảng 0,56 g KOH rắn, hòa tan trong 100 ml ethanol 96º, ta được dung dịch KOH trong cồn nồng độ khoảng 0,1N.
Môi trương tăng sinh khuẩn NB
Cân chính xác 5 g mơi trường Pepton; 3 g mơi trường Beef extract (có thể thay thế bằng 0,3 g môi trường Maet extract), 15 g muối NaCl. Hịa tan mơi trường trên trong 100 ml nước cất vô trùng. Đun sôi, khuấy đều và khử trùng bằng nồi hấp ở 121ºC trong 15 phút; pH cuối 7,0 ± 0,2.
Môi trường cấy kháng khuẩn NA
Cân chính xác 5 g mơi trường Pepton; 3 g mơi trường Beef extract (có thể thay thế bằng 3 g môi trường Meat extract); 5 g muối NaCl và 15 g Agar. Hịa tan mơi trường trên trong 1000 ml nước cất vơ trùng. Sau đó đem đun sơi, khuấy đều và khử trùng bằng nồi hấp ở 121ºC trong 15 phút; pH cuối 7,0 ± 0,2.
Môi trường tăng sinh nấm PDB
Cân chính xác 20 g khoai tây; 2g glucose; 0,03 g kháng sinh chloramphenicol. Sau đó hịa tan mơi trường trên vào 100 ml dịch chiết khoai tây đã được đun. Khuấy đều và khử trùng bằng nồi hấp ở 121ºC trong 15 phút; pH cuối 7,0 ± 0,2.
Môi trường cấy kháng nấm PDA
Cân chính xác 20g khoai tây; 2g glucose; 0,03 g kháng sinh Chloramphenicol. Sau đó hịa tan mơi trường trên vào 100 ml dịch chiết khoai tây đã được đun. Khuấy đều và khử trùng bằng nồi hấp ở 121ºC trong 15 phút; pH cuối 7,0 ± 0,2.
Phụ lục 2: Xử lý thống kê ảnh hưởng của các yếu tố đến hàm lượng tinh dầu húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
1. Xử lý ảnh hưởng của kích thước nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
KICH THUOC NGUYEN LIEU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
103
Class Level Information Class Levels Values T 4 A1 A2 A3 A4 Number of Observations Read 12 Number of Observations Used 12
KICH THUOC NGUYEN LIEU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Dependent Variable: N
Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 3 0.19149167 0.06383056 20.59 0.0004 Error 8 0.02480000 0.00310000
Corrected Total 11 0.21629167
R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.885340 15.21940 0.055678 0.365833
Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 3 0.19149167 0.06383056 20.59 0.0004
KICH THUOC NGUYEN LIEU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
t Tests (LSD) for N
NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 8 Error Mean Square 0.0031 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.1048
104 t Grouping Mean N T A 0.55333 3 A3 B 0.37667 3 A4 B B 0.33333 3 A2 C 0.20000 3 A1
2. Xử lý ảnh hưởng của bộ phân nguyên liệu đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
BO PHAN NGUYEN LIEU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Class Level Information Class Levels Values
T 3 B1 B2 B3 Number of Observations Read 9 Number of Observations Used 9
BO PHAN NGUYEN LIEU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Dependent Variable: N
Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 2 5.11126667 2.55563333 586.75 <.0001 Error 6 0.02613333 0.00435556
Corrected Total 8 5.13740000
R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.994913 5.945643 0.065997 1.110000 Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 2 5.11126667 2.55563333 586.75 N <.0001
105
BO PHAN NGUYEN LIEU 11:00 Monday, February 10, 2014 9 The ANOVA Procedure
t Tests (LSD) for N
NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 6
Error Mean Square 0.004356 Critical Value of t 2.44691 Least Significant Difference 0.1319
Means with the same letter are not significantly different. t Grouping Mean N T
A 2.15333 3 B1 B 0.77667 3 B2 C 0.40000 3 B3
3. Xử lý ảnh hưởng của thể tích nước chưng cất đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
THE TICH NUOC CHUNG CAT 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Class Level Information Class Levels Values T 3 C1 C2 C3
Number of Observations Read 9 Number of Observations Used 9
THE TICH NUOC CHUNG CAT 11:00 Monday, February 10, 2014
The ANOVA Procedure Dependent Variable: N
106
Model 2 0.21695556 0.10847778 18.99 0.0025 Error 6 0.03426667 0.00571111
Corrected Total 8 0.25122222
R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.863600 10.86497 0.075572 0.695556
Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 2 0.21695556 0.10847778 18.99 0.0025
THE TICH NUOC CHUNG CAT 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
t Tests (LSD) for N
NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 6
Error Mean Square 0.005711 Critical Value of t 2.44691 Least Significant Difference 0.151
Means with the same letter are not significantly different. t Grouping Mean N T A 0.89000 3 C2 B 0.68667 3 C1 C 0.51000 3 C3
4. Xử lý ảnh hưởng của nồng độ NaCl bổ sung vào mẫu ngâm đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
NONG DO NaCl 11:00 Monday, February 10, 2014 13 The ANOVA Procedure
107
Class Level Information Class Levels Values T 4 D1 D2 D3 D4 Number of Observations Read 12 Number of Observations Used 12
NONG DO NaCl 11:00 Monday, February 10, 2014 14
The ANOVA Procedure Dependent Variable: N
Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 3 0.32269167 0.10756389 42.60 <.0001 Error 8 0.02020000 0.00252500
Corrected Total 11 0.34289167
R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.941089 7.800680 0.050249 0.644167
Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 3 0.32269167 0.10756389 42.60 <.0001
NONG DO NaCl 11:00 Monday, February 10, 2014 15
The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for N
NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 8
Error Mean Square 0.002525 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.0946
108 t Grouping Mean N T A 0.82333 3 D3 B 0.69000 3 D2 B B 0.68667 3 D4 C 0.37667 3 D1
5. Xử lý ảnh hưởng của thời gian ngâm mẫu trong NaCl đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
THOI GIAN NGAM MAU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Class Level Information Class Levels Values T 4 E1 E2 E3 E4
Number of Observations Read 12 Number of Observations Used 12
THOI GIAN NGAM MAU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Dependent Variable: N
Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 3 0.22242500 0.07414167 25.28 0.0002 Error 8 0.02346667 0.00293333
Corrected Total 11 0.24589167
R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.904565 9.115331 0.054160 0.594167
Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 3 0.22242500 0.07414167 25.28 0.0002
109
THOI GIAN NGAM MAU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
t Tests (LSD) for N
NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 8
Error Mean Square 0.002933 Critical Value of t 2.30600 Least Significant Difference 0.102
Means with the same letter are not significantly different. t Grouping Mean N T A 0.82333 3 E2 B 0.55333 3 E3 B B 0.53333 3 E4 B B 0.46667 3 E1
6. Xử lý ảnh hưởng của nhiệt độ ngâm mẫu đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
NHIET DO NGAM MAU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Class Level Information Class Levels Values T 5 F1 F2 F3 F4 F5
Number of Observations Read 15 Number of Observations Used 15
NHIET DO NGAM MAU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
110
Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F Model 4 0.33197333 0.08299333 30.51 <.0001 Error 10 0.02720000 0.00272000
Corrected Total 14 0.35917333
R-Square Coeff Var Root MSE N Mean 0.924271 9.171211 0.052154 0.568667
Source DF Anova SS Mean Square F Value Pr > F T 4 0.33197333 0.08299333 30.51 <.0001
NHIET DO NGAM MAU 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
t Tests (LSD) for N
NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate.
Alpha 0.05 Error Degrees of Freedom 10 Error Mean Square 0.00272 Critical Value of t 2.22814 Least Significant Difference 0.0949
Means with the same letter are not significantly different. t Grouping Mean N T A 0.84667 3 F4 B 0.55333 3 F1 B B 0.53333 3 F3 B B 0.51000 3 F2 C 0.40000 3 F5
7. Xử lý ảnh hưởng của thời gian chưng cất đến hàm lượng tinh dầu Húng quế thu được bằng phương pháp chưng cất lôi cuốn hơi nước
111
The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Values T 5 G1 G2 G3 G4 G5
Number of Observations Read 15 Number of Observations Used 15
THOI GIAN CHUNG CAT 11:00 Monday, February 10, 2014 The ANOVA Procedure
Dependent Variable: N
Source DF Sum of Squares Mean Square F Value Pr > F