CHƢƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.3. ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG MANG GEN CỦA CÁC DÕNG BẠCH ĐÀN
3.3.2. Xác định sự có có mặt của gen EcHB1 trong cây bằng PCR
phƣơng pháp PCR
Tiến hành kiểm tra sản phẩm PCR bằng điện di trên gel Agarose 0,8% với đối chứng dƣơng là plasmid tách từ vi khuẩn A. tumefaciens có mang
vector chứa gen EcHB1, đối chứng âm là cây đối chứng chƣa chuyển gen
trồng ngoài vƣờn ƣơm. Kết quả cho thấy trong số 40 dòng bạch đàn lai UP giả định chuyển gen có 11 dịng (CG5, CG11, CG14, CG18, CG24, CG28, CG29, CG32, CG34, CG35, CG38) xuất hiện một băng duy nhất với kích thƣớc khoảng 759bp tƣơng đƣơng với kích thƣớc của đoạn gen EcHB1 và promoter CaMV 35S xuất hiện trên đối chứng dƣơng (Hình 3.16), đối chứng âm khơng chuyển gen thì khơng hiện băng.
Theo nhƣ kết quả phân tích cho thấy từ 40 dịng bạch đàn lai UP chuyển gen EcHB1 đƣợc kiểm tra thì có 11 dịng cho kết quả PCR dƣơng tính với gen
EcHB1 chiếm tỷ lệ 28,9%. Tỷ lệ này tƣơng đƣơng hoặc cao hơn so với các nghiên cứu chuyển gen cho cây lâm nghiệp trƣớc đây nhƣ ở bạch đàn lai UU khi chuyển gen EcHB1 (có 6/19 dịng kiểm tra bằng phƣơng pháp PCR và có 1 dịng đƣợc khẳng định bằng phƣơng pháp lai Southern Blot) [79]. Hoặc với Xoan ta khi kiểm tra 70 dòng Xoan ta chuyển gen GA20 chỉ có 5 dịng PCR
dƣơng tính với gen GA20 chiếm tỷ lệ 7,14%, từ 50 dòng Xoan ta chuyển gen
chiếm tỷ lệ 6,0% [25]. Tuy nhiên trong nghiên cứu chuyển gen GS1 vào cây
Xoan ta của Nguyễn Văn Phong và cộng sự (2019), khi tác giả kiểm tra 55 dòng Xoan ta chuyển gen GS1 dƣơng tính với PCR có 21 dịng dƣơng tính với Southern Blot [80].
Các dịng xuất hiện băng trên gel điện di tiếp tục đƣợc kiểm tra lại lần 2 sau đó 1 tháng. Kết quả cho thấy, 11 dòng này vẫn thể hiện kết quả dƣơng tính với gen EcHB1. Nhƣ vậy, bƣớc đầu đề tài đã tạo ra đƣợc 11 dịng bạch
đàn lai UP chuyển gen EcHB1 (Hình 3.17).
Hình 3.17. Kết quả kiểm tra sự có mặt của gen EcHB1 bằng PCR
Chú thích: (+): Plasmid mang gen EcHB1; (-): dịng bạch đàn lai UP khơng chuyển
gen; mk: DNA marker 1 kb; giếng số 1-13: (CG5, CG11, CG14, CG18, CG24, CG28, CG29, CG30, CG31, CG32, CG34, CG35, CG38)