Hình trên cho thấy kháng thể trung hịa khĩa lớp vỏ của virus, virus khơng bám dính và khơng thâm nhập được vào tế bào vật chủ. Sự xâm nhập cĩ thể bị khĩa ở các giai đoạn khác nhau. (1) Virion màu xanh da trời bị kháng thể trung hịa gắn tiểu phần của virus làm virus khơng gắn được với thụ thể của tế bào. (2) Virion màu đỏ là virion trần đã xâm nhập được vào nội bào nhưng kháng thể trung hịa đã khĩa vị trí tiếp cận với TRIM21 (TRIM21 màu vàng) vơ hiệu hĩa
enzym , chúng khơng gắn kết được vào hệ gen trong tế bào vật chủ. (3) Virion màu xám là virus trần, kháng thể trung hịa đã khĩa sự xâm nhập vào nội quan của tế bào. Kết quả virus bị ly giải hoặc khơng tổng hợp các tiểu phần virus, bởi vậy kháng thể trung hịa làm giảm sự nhiễm virus vào tế bào (Klasse, 2014).
Về cơ chế trung hịa PEDV, kháng thể trung hịa khĩa vị trí bám của virus
PED vào tế bào vật chủ. Báo cáo trước đây cho biết, sau khi phân lập được kháng thể đơn dịng đặc hiệu PEDV, mẫu kháng thể đơn dịng đã trung hịa virus, kết quả virus khơng bám dính được vào tế bào Vero. Kháng thể trung hịa đã bộc lộ chức năng hồn chỉnh trung hịa virus thơng qua việc khĩa vị trí tiếp cận của PEDV và phịng ngừa sự nhiễm của PEDV vào tế bào. Tác giả cịn cho thấy virus hấp thụ vào tế bào thơng qua màng nội bào trong điều kiện 370Cthì hiệu quả hơn
40C (Gong & cs., 2018).
Đánh giá hiệu giá kháng thể trung hịa bằng cách nhuộm hĩa miễn dịch sẽ nhanh và chính xác hơn là dựa vào vào việc chờ virus gây bệnh tích tế bào (CPE). Kháng thể trung hịa xác định bằng phương pháp nhuộm miễn dịch trong vịng 30 giờ trong khi quan sát virus gây bệnh tích trên tế bào sau khi nhiễm ít nhất 3 ngày. Ngồi ra, việc quan sát PEDV trong phản ứng trung hịa bằng cách nhuộm miễn dịch đặc hiệu cịn cho phép xác định điểm pha lỗng cuối mà ở đĩ giảm 90% số cụm virus nhiễm vào tế bào một cách dễ dàng. Xác định PEDV nhiễm trong tế bào bằng cách nhuộm hĩa miễn dịch (immunocytochemical)
(Paudel & cs., 2014a), hoặc nhuộm miễn dịch huỳnh quang (immunofluorecent)
(Joseph & cs., 2015). Trong phản ứng nhuộm miễn dịch cĩ thể dùng kháng thể đa dịng hoặc đơn dịng kháng PEDV và kháng thể cộng hợp kháng lồi gắn enzyme
peroxidase. Cơ chất phát hiện màu là DAB hoặc AEC. Ngồi ra, nhĩm tác giả
(Annamalai & cs., 2017) xác định kháng thể trung hịa bằng cách xác định giảm số số cụm PFU (PFU- plaque forming unit).
Hiệu giá kháng thể trung hịa được xác định là số đảo ngược của độ pha lỗng cao nhất của mẫu mà làm giảm ít nhất 90% số cụm virus so với đối chứng âm. Mẫu được gọi dương tính khi hiệu giá mẫu ≥1:20 (Okda & cs., 2015; Clement & cs., 2016). Tuy nhiên, một số tác giả lại đánh giá phản ứng trung hịa dương tính khi số tế bào nhiễm PEDV giảm ít nhất 50% (Paudel & cs., 2014a), hay giảm 80% (Lin & cs., 2015) so với đốichứng âm thì gọi là dương tính.
Phản ứng trung hịa được tối ưu cho việc định lượng kháng thể trung hịa trong sữa đầu và sữa thường, nĩ quan trọng trong kiểm sốt miễn dịch mẹ truyền cho lợn con bú sữa mẹ. Kháng thể trung hịa cĩ trong sữa đầu (1-3 ngày sau đẻ) cao gấp 4 trong huyết thanh mẹ (Clement & cs., 2016).
Nguồn: Clement & cs. (2016)