- Chương trình chạy:
3.1.5.1.Kiểm tra bằng enzyme hạn chế Sa p
d) Quan sát và chụp ảnh
3.1.5.1.Kiểm tra bằng enzyme hạn chế Sa p
Phân tích bản đồ enzyme hạn chế vector pJET1, chóng tôi nhận thấy có một trình tự nhận biết của Sap I tại vị trí 1125. Theo như thiết kế, gen as-48 có hai trình tự nhận biết của enzyme hạn chế Sap I nằm ở hai đầu 5’ của gen. Sau khi cắt kiểm tra bằng Sap I, điện di kiểm tra trên gel agarose 1,7% sẽ cho tổ hợp sáu băng có kích thước là: 234 bp (kích thước của gen as-48), khoảng 0,63 kb (là một phần của vector), khoảng 0,9 kb (gồm gen as-48 và mét phần vector), các phần còn lại của vector có kích thước tương ứng khoảng 3,2 (vector pJET1); 2,8 và 2,6 kb. Đối với plasmid không chứa gen ngoại lai, sản phẩm cắt chỉ mở vòng. Sơ đồ và kết quả cắt plasmid tái tổ hợp bằng enzyme hạn chế Sap I được thể hiện ở hình 15.
A)B) B)
Hình 15. A) Sơ đồ biểu hiện quá trình cắt kiểm tra bằng enzyme hạn chế Sap I. B) Điện di sản phẩm cắt pJET1-as48 bằng Sap I trên gel agarose 1,7% Đường chạy số 1, 3, 4: Sản phẩm cắt plasmid tái tổ hợp
1000 900 900 800 700 600 300 200 bp 1 2 3 4
một phần vector (~0,63 kb) Phần còn lại của vector (~ 3,2; 2,8; 2,5 kb)
3,4 kb Sap I Sap I as-48 Cloning site(498-497) Sap I Sap I (1125) gen as-48 (~0,23 kb) gen as-48+ một phần vector (~0,9 kb)
Đường chạy số 2: Maker 100 bp (Fermentas)
Trên điện di đồ cho thấy, sản phẩm cắt ADN plasmid ở đường chạy số 3, 4 cho nhiều băng. Trong đó, băng kích thước nhỏ nhất (hơn 0,23 kb) tương ứng với kích thước của gen và băng lớn nhất (hơn 3 kb) tương ứng với kích thước của vector pJET1. Đây là kết quả trường hợp cắt của Sap I ở hai đầu gen as-48. Hai băng có kích thước khoảng 0,63 kb và 2,8 kb là kết quả trường hợp cắt từ trình tù
Sap I 1125 đến điểm đầu của gen (cho băng 627 bp và phần còn lại của vector). Ngoài ra, còn trường hợp enzyme hạn chế cắt từ vị trí Sap I 1125 đến điểm cuối của gen cho hai băng kích thước khoảng 0,9 kb và 2,6 kb. Cả sáu băng này đều có kích thước đúng như tính toán. Như vậy, bước đầu có thể khẳng định những dòng tế bào này mang plasmid tái tổ hợp pJET1-as48.