CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.5. Tinh sạch các đoạn DNA trên gel agarose
Chúng tôi sử dụng GeneJET Gel Extraction Kit của hãng Thermo Scientific để tinh sạch sản phẩm PCR. Quy trình thực hiện:
1. Điện di sản phẩm PCR cần tinh sạch trên gel agarose 0.8%, hiệu điện thế: 100V 2. Sau khi điện di, nhuộm bản gel trong EtBr trong 10 phút, sau đó cắt đoạn gel có
chứa đoạn DNA cần tinh sạch chuyển sang ống eppendorf 1.5ml. 3. Bổ sung Binding Buffer vào ống eppendorf chứa gel (V:W = 1:1).
4. Ủ hỗn hợp gel + Binding Buffer ở 55oC trong 10 phút, cho tới khi miếng gel tan hoàn toàn. Trong lúc ủ, cách 2 – 3 phút dảo ống một lần để đảm bảo gel tan đều. Sau khi gel tan hoàn toàn, đem ống eppendorf đi vortex và spindown trước khi chuyển lên cột tinh sạch.
5. Chuyển dung dịch gel đã tan ở bước 4 sang cột tinh sạch. Ly tâm 1 phút, 12000 vòng/phút ở 24oC. Bỏ dịch, đặt cột tinh sạch lại vào ống.
6. Bổ sung 100 µl Binđing Buffer vào cột tinh sạch. Ly tâm 1 phút, 12000 vòng/phút ở 24oC. Bỏ dịch, đặt cột tinh sạch lại vào ống.
7. Bổ sung 700 µl Wash Buffer vào cột tinh sạch. Ly tâm 1 phút, 12000 vòng/phút ở 24oC. Bỏ dịch, đặt cột tinh sạch lại vào ống.
8. Ly tâm cột tinh sạch không chứa gì trong 1 phút, 12000 vòng/phút ở 24oC để loại bỏ hoàn toàn Wash Buffer.
10. Bỏ cột tinh sạch, DNA thu được điện di kiểm tra trên gel agarose 0.8%và đo nồng độ. Sản phẩm sau tinh sạch được lưu giữ ở tủ lạnh – 20oC.