Tách chiết DNA tổng số là bước đầu tiên trong quá trình nghiên cứu gen sinh vật. Hiện nay, có rất nhiều phương pháp tách chiết DNA tổng số rất hiệu quả từ mô thực vật đã được nghiên cứu, cải biến và ứng dụng tùy thuộc vào đối tượng và điều kiện nghiên cứu. Tách chiết DNA của thực vật thường gặp khó khăn bởi thành cellulose ảnh hưởng đến chất lượng của việc phá vỡ tế bào do khó nghiền mẫu thành bột mịn. Việc sử dụng ni tơ lỏng trong quá trình nghiền làm thành cellulose trở nên giòn hơn, dễ vỡ hơn, giúp phá vỡ mỗi liên kết giữa các tế bào trong mô lá, đồng thời bảo vệ DNA không bị phá hủy bởi các enzyme trong tế bào. Ở đây, chúng tôi sử dụng đệm chiết chứa CTAB 2%. CTAB là hóa chất dùng trong tách chiết acid nucleic có hiệu quả cao và đang được sử dụng phổ biến hiện nay. Dung dịch CTAB là một dung môi có khả năng hòa tan acid nuleic cao, do đó mà CTAB được dùng là chất chính trong quá trình tách DNA. Để tăng hiệu quả hoạt động của CTAB, đệm chiết được làm ấm ở 650C trước khi bổ sung vào bột lá, sau đó ủ mẫu ở 65oC. Nhiệt độ này còn có tác dụng là vỡ thêm màng tế bào và màng nhân để giải phóng tối đa được DNA và biến tính một vài protein, đặc biệt là enzyme thủy phân DNA. Thay vì sử dụng protease K, trong thí nghiệm này -mecapthoetanol được sử dụng như là một một chất khử cực mạnh để loại bỏ tannin và các hợp chất polyphenol khác, giúp cho DNA thu được sạch hơn.
DNA tổng số của các cây ngô chuyển gen pCAMBIA1300 _ZmbZIP72 sống sót được pha loãng 10 lần và điện di trên gel agarose 0,8%. Kết quả trên hình 3.18 cho thấy, DNA được tách chiết khá nguyên vẹn, thể hiện là một băng DNA tổng số rõ nét, phù hợp cho các thí nghiệm sinh học phân tử sau đó.
Hình 3.18: DNA tổng số tách chiết từ mẫu lá cây chuyển gen ZmbZIP72 thế hệ T0