Trước khi kiểm tra sự có mặt của cấu trúc biểu hiện gen ZmbZIP72, chúng tôi tiến hành PCR kiểm tra sự có mặt của gen chỉ thị hygromycin trong các cây ngô chuyển gen pCAMBIA1300_ZmbZIP72. Sự có mặt của gen chỉ thị Hygromycin giúp cây có thể sống sót qua các giai đoạn chọn lọc trong nuôi cấy mô. Tuy nhiên, thực tế thì nhiều phôi vẫn có thể tái sinh dù không có gen kháng hygromycin. Vì vậy việc kiểm tra sự có mặt của gen chỉ thị bước đầu giúp chúng tôi xác định được quá trình chuyển gen có xảy ra hay không. Cặp mồi được sử dụng trong thí nghiệm PCR này khuếch đại vùng mã hóa của gen chỉ thị
hygromycin với kích thước lý thuyết là 984bp. Quan sát kết quả điện di trên hình 3.19 có thể nhận thấy ở đường chạy của đối chứng dương là sản phẩm PCR từ plasmid pCAMBIA1300_ZmbZIP72, xuất hiện một băng khá đậm, sáng, có kích thước xấp xỉ 1kb, điều này chứng tỏ phản ứng PCR xảy ra bình thường. Đối chứng âm chúng tôi sử dụng là H2O và cây không chuyển gen đều không xuất hiện băng DNA nào, cho thấy không có sự tạp nhiễm trong quá trình thực hiện thí nghiệm. Ở các đường chạy 11 và 33 xuất hiện một băng sản phẩm đậm, sáng, kích thước bằng đối chứng dương. Như vậy, có thể nói rằng, gen chỉ thị hygromycin đã được chuyển vào trong hệ gen của các cây con tái sinh này. Ở các mẫu còn lại, sản phẩm PCR không xuất hiện băng DNA, như vậy, các cây này mang kết quả âm tính với gen chỉ thị hygromycin.
Hình 3.19: Sản phẩm PCR nhân gen chỉ thị hygromycin ở các cây chuyển gen T0
M: maker 1kb, (+): sản phẩm PCR của đối chứng dương với khuôn là plasmid pCAM1300_ZmbZIP72, (-): Sản phẩm PCR từ H2O, WT: sản phẩm PCR từ DNA
tổng số của cây ngô không chuyển gen, 1 – 44: Sản phẩm PCR của 44 mẫu DNA cây chuyển gen